通过宫内注射诱导利普托门宁皮细胞修饰

我们的外科手术使钩端细胞的特定基因编辑能够研究它们在许多生理和病理条件下的功能，如神经发育和细菌性脑膜炎的传播。为了尽量减少内西芬在内毒性分娩期间的损伤，我们使用弯曲的针头固定在头骨的骨边上，以防止其深入组织。该程序可用于通过功能实验的丧失和增益来探寻表达钩端细胞的基因的作用。

它也可以被采用来跟踪脑脊液流。这种方法的视觉演示将确保成功识别注射部位的针刺注射部位，并了解如何将针头固定到腹骨上。首先准备一个汉密尔顿注射器与30量斜针注射。

使用钳子将针头从尖端弯曲到 30 度三毫米。接下来，将内西芬稀释在10%DMSO中，浓度为每毫升1毫克，然后回填注射器。在异氟体室中麻醉动物。

然后调整鼠标头架，使喉舌与手术台表面大约在 30 度角，将动物的头固定到支架上。为了改善对西斯特纳磁石的可访问性，将动物的身体定位在距离桌子表面约30度的位置，头部向下倾斜，这将与身体的其余部分建立120度的角度，并延伸颈部的后背，以方便接触西斯特纳磁体。一旦动物被正确定位，应用眼科软膏，剃光其颈部的背部，用酒精湿巾和贝塔丁消毒区域。

使用手术剪刀，使中线切口从腹骨的水平开始，并延伸到后方。轻轻地分离表面的结缔组织和颈部肌肉，从中线侧身拉与细尖钳子，这将暴露的硬膜覆盖西斯特纳磁石。放置一个小的手术分离器，以便在整个手术过程中实现西斯特纳磁石的可视化。

识别腹骨的骨质，并立即将先前弯曲的针头插入下方。一旦杜拉被打压，让针头弯曲的尖端穿透表面之下，轻轻将注射器向上拉，并平行于动物的身体，从而确保更好的稳定性。缓慢注射化合物，避免对脑脊液的自然流动造成干扰。

注射后，让针头在内休息一分钟，然后用细尖钳小心地取出。用几滴氰丙烯酸酯粘合剂关闭皮肤，并在注射部位涂抹局部麻醉剂。将动物从支架上取下，放在加热垫上的清洁笼子里。

然后确保监测动物，直到它恢复知觉。在Cx30启动子下表达CreER的转基因小鼠内皮注射内西芬，一种可教育的荧光报告器允许对钩端细胞进行特定的重组，而无需标记相邻的Cx30表达表面星细胞和皮层中皮层的面膜星细胞。此注射方案利用脑脊液的生理运动，使内毒素芬溶液分布在整个亚布拉奇体空间，以有效地重组覆盖嗅球、皮层和小脑的钩端细胞。

该解决方案不会跨越脑脑膜屏障或与白细胞的天体利细胞接触，而不是通过口服治疗进行全身治疗。通过Pdgfr-alpha反应物识别后钩端膜细胞的重组，而表达Gfap的表面和腹膜星细胞仍未标记。尝试此实验时，必须找到注射部位进行针注。

此视觉演示提供了执行该过程的技术知识，同时最大限度地降低了破坏其下神经组织的风险。基因消融研究可以用这种技术进行，以研究钩端细胞在皮质生成和脑脊液形成调节中的作用，并确定在亚巴氏体空间中传播细菌的其他位点。