Cerrahi prosedürümüz leptomeningeal hücrelerin spesifik gen düzenlemesinin nörogelişim ve bakteriyel menenjitin yayılması gibi birçok fizyolojik ve patolojik koşullarda işlevlerini incelemesini sağlar. Endoksifenintrasisternal teslimat sırasında hasarı en aza indirmek için, biz doku daha derin nüfuz önlemek için kafatasının kaudal kenarına karşı güvenli olabilir bükülmüş bir iğne kullanır. Prosedür, fonksiyon deneylerinin kaybolması ve kazanılması yoluyla leptomeningeal hücreleri ifade eden genlerin rolünü araştırmak için kullanılabilir.
Aynı zamanda beyin omurilik sıvısı akışını izlemek için kabul edilebilir. Bu yöntemin görsel gösterimi intrasisternal enjeksiyon için enjeksiyon bölgesinin başarılı bir şekilde tanımlanmasını ve iğnenin oksipital kemiğe karşı nasıl sabitlenebildiğini anlamasını sağlayacaktır. Enjeksiyon için 30 gauge yontucu iğne ile bir Hamilton şırınga hazırlayarak başlayın.
İğneyi uçtan 3milimetre 30 dereceye kadar bükmek için terlikkullanın. Daha sonra, mililitre başına bir miligram konsantrasyona 10% DMSO seyreltik endoksifen ve şırınga backfill. Isofluran odasındaki hayvanı anesthetize et.
Daha sonra fare baş tutucuyu, ağızlığın cerrahi masanın yüzeyinden yaklaşık 30 derecelik bir açıyla olması için ayarlayın ve hayvanın kafasını tutucuya sabitle. Sarnıç magna erişilebilirliğini artırmak için, vücudun geri kalanı ile 120 derecelik bir açı oluşturacak ve sarnıç magna erişimi kolaylaştırmak için boyun arka uzatacak baş aşağı eğimli ile masanın yüzeyinden yaklaşık 30 derece hayvanın vücudunu konumlandırın. Hayvan düzgün bir şekilde konumlandırıldıktan sonra, oftalmik merhem uygulayın, boynunun arkasını tıraş edin ve bölgeyi alkol mendilleri ve Betadine ile dezenfekte edin.
Oksipital kemik seviyesinden başlayıp posteriora kadar uzanan orta hat kesisi yapmak için cerrahi makas kullanın. Nazikçe sarnıç magna örten dural membran ortaya çıkaracak ince ucu cımbız ile orta hattan yan çekerek yüzeysel bağ dokusu ve boyun kasları ayırın. İşlem boyunca sarnıç magnasının görüntülemesini sağlamak için küçük bir cerrahi ayırıcı yerleştirin.
Oksipital kemiğin kaudal ucunu belirleyin ve daha önce bükülmüş iğneyi hemen altına yerleştirin. Dura delindikten sonra, şırıngayı yavaşça yukarı ve hayvanın vücuduna paralel olarak çekerek iğnenin bükülmüş ucunun yüzeyin altına nüfuz etmesini bekleyin ve bu da daha iyi bir stabilite sağlar. Beyin omurilik sıvısının doğal akışına müdahale önlemek için bileşiği yavaşça enjekte edin.
Enjeksiyondan sonra, iğne bir dakika içinde dinlenmeye bırakın, sonra dikkatle ince uç forseps yardımı ile çıkarın. Birkaç damla siyanoakrilat yapıştırıcı ile cildi kapatın ve enjeksiyon yerinde lokal anestezi uygulayın. Tutucu dan hayvan çıkarın ve bir ısıtma yastığı üzerinde temiz bir kafese yerleştirin.
O zaman bilinci yerine gelene kadar hayvanı izlediğinden emin ol. Cx30 organizatörü altında CreER ifade transgenik farelerde endoksifen intrasisternal enjeksiyon, indükleyici floresan muhabiri kortekste komşu Cx30 ifade yüzey astrositleri ve parenkimal astrositler etiketleme olmadan leptomeningeal hücrelerin özel rekombinasyon sağlar. Bu enjeksiyon protokolü beyin omurilik sıvısının fizyolojik hareketinden yararlanır, böylece endoksifen solüsyonu subaraknoid alana dağıtılır ve koku ampulleri, korteksve beyincik leri kaplayan leptomeningeal hücreleri verimli bir şekilde yeniden birleştirir.
Çözüm beyin meningeal bariyerini geçmez veya oral gavaj yoluyla sistemik uygulama aksine parankim astroglial hücreleri ile temas etmez. İntrasisternal enjeksiyon sonrası leptomeningeal hücrelerin rekombinasyon pdgfr-alfa reaktivitesi ile saptanırken, Gfap'ı ifade eden yüzey ve parenkimal astrositler etiketsiz kaldı. Bu deneyi denerken, intrasisternal doğum için enjeksiyon bölgesini bulmak önemlidir.
Bu görsel gösteri, prosedürün uygulanması için teknik know-how sağlarken altındaki nöral dokuya zarar verme riskini en aza indirir. Leptomeningeal hücrelerin kortikogenezdeki rolünü ve beyin omurilik sıvısı oluşumunun düzenlenmesindeki rolünü araştırmak ve subaraknoid alanda bakterilerin yayılması için ek alanları belirlemek için gen ablasyon çalışmaları bu teknikle yapılabilir.
