飞酒吧测定酒精影响下抑制行为。从而促进酒精使用障碍的机械化研究。酒精是世界上最容易获得和广泛滥用的药物之一。
然而,酒精使用障碍背后的神经生物学机制是不完全了解的。果蝇,果蝇,嗜血黑色素,已被广泛用于研究乙醇对兴奋,运动,抑制和丁体糖的影响。它还用于研究其与成瘾相关行为的长期和持久变化,如耐受性、敏感性和乙醇寻求。
在果蝇和其他动物模型中的许多研究都侧重于乙醇的球运动激活效应。乙醇的显著作用是行为抑制。然而,它的研究代表性相当不足。
为了解决这个关键问题,我们开发了飞酒吧测定法,以测量乙醇影响下的抑制行为。要组装飞酒吧室,请拿一个圆形瓶子,用剃刀刀片切开其25毫升标记的底部。使用热焊铁在 50 毫升标记上创建孔。
这是介绍苍蝇的接入点。将直径为 54 毫米的圆形网眼放在 75 毫升标记处,并使用热胶固定。将直径为 70 毫米的透明塑料板放在开底端,并使用热胶固定。
为确保塑料圆牢固地固定在底部,使用重量向下压力。收集雄蝇成一组33。把它们放在食物小瓶的一侧。
将它们放在25摄氏度的培养箱中,至少50%的相对湿度和12小时光,12小时黑暗循环,在乙醇暴露前2天。通过打开灯、电脑和用于视频录制的摄像机来准备 Flypub 检测站。准备六家酒吧进行一套实验。
用数字 1 到 6 标记它们。用一个小漏斗轻轻地把苍蝇带进酒吧。用胶带关闭酒吧。
使苍蝇适应10分钟。在适应过程中,调整摄像机对焦并记录最后五分钟的适应。在适应期间准备棉垫乙醇的输送。
将棉垫切成四个相等的象限,然后修剪角,使其适合培养皿。将棉垫添加到培养皿中。在棉垫上加入一毫升95%乙醇。
确保乙醇溶液均匀地分布在垫的整个区域。用实验室湿巾快速盖住培养皿。小心地在每个酒吧下面放置含有培养皿的乙醇。
对齐舞台上的酒吧。开始录制并同时启动计时器。记录,直到苍蝇停止看笑或移动。
当超过90%的苍蝇被静静时,去除含有培养皿的乙醇。轻轻地将静种苍蝇转回食物小瓶中。将它们放回孵化器中。
连续六天每 24 小时重复一次上述步骤。使用媒体播放器打开视频。然后每10秒对从事求爱活动的男性人数进行评分。
求爱活动包括:单边翼延伸、求爱链、求爱圈、腹部弯曲和安装。显示的飞行行为的代表性记录。在适应期间,男性不表现出多少活动。
在第一次接触时,男性表现出零星的求爱。在第六次曝光期间, 男性表现出活动求爱。输入在十秒钟块中显示求爱的男性数量。
将连续 10 秒时间块中占位男性的最大数量用作代表性数据点。具有最高值的连续 10 个数据点的平均值表示每个酒吧的相互求爱的百分比。野生型广州-S展品在反复接触乙醇后,逐渐增加了不抑制求爱的活动。
这表示对乙醇抑制作用的行为敏感性。我们通过测试缺乏三胺β-羟基酶TβH的苍蝇,从而对八氯胺缺乏,来研究八氯胺在敏感性中的作用。与广电一样,TβH突变体对重复乙醇暴露的反应升级,但水平降低。
当我们比较TβH和广度-S时,我们观察到TβH突变雄性在每次接触中表现出比广州-S雄性少的抑制求爱,这表明八氯胺对敏感很重要。现在,您可以使用 Flypub 测定来设置、传导和分析乙醇引起的行为。要记住的关键点包括,一,酒吧的适当组装。
二、一致的乙醇输送,三、精确、公正的行为得分。飞酒吧测定有许多优点。设置简单、价格低廉、易于学习。
此外,可以同时检测多组苍蝇,从而有助于本研究确定遗传或实验操作的影响。Flypub测定非常吸引各级的实验者,包括高中、本科生和研究生、博士后和教职员工。总之,Flypub检测将允许您识别分子播放器、细胞通路、大脑回路和导致酒精使用障碍的风险因素。