该协议适用于来自人类和动物心脏的样本，即使在运输时间数小时之后。每毫克可从振动切组织切片中分离出多达 200 个菌细胞。心细胞的电生理、结构和生化分析有助于发现和更好地理解心脏病的机理。
填充100毫米组织培养皿后，用20毫升的冷切溶液，将组织样本放在培养皿中。将培养皿放在冷却至 4 摄氏度的盘子上。请记住，来自动物，特别是人类的活组织样本具有潜在的传染性。
使用剪刀或手术刀，从样品中去除多余的纤维组织和脂肪。为了优化较大组织样本的振动处理，请使用手术刀从组织中切割八毫米立方体。对于活检的较小样本，这是没有必要的。
人们可以通过史诗脂肪层来识别史诗。去除多余的脂肪后，将组织块放入盘中，将皮块朝下。为了准备组织嵌入，将400毫克的低熔点阿加罗斯煮沸为10毫升的切割溶液。
用热溶解的加糖凝胶填充十毫升注射器。密封注射器，并放在37摄氏度的水浴中至少15分钟，让糖平衡。使用钳子，将修剪试样移动到干净的 35 毫米组织培养盘中，其表骨朝下。
然后，用无菌拭子从试样中去除多余的液体。用钳子握住试样，使试样保持运动。将阿加罗斯的注射器清空，确保将样品完全浸中。
立即将盘子放在冰上，让阿加罗斯凝固10分钟。将未使用的剃须刀刀片安装到振动器的刀片支架上。如果可能，通过调整刀片的 Z 偏转来校准振动器。
使用手术刀切除适合振动器的标本支架的黄玫瑰组织块。为确保稳定性，确保组织仍充分浸入糖中。与加糖边缘，至少8毫米。
在试样支架上涂抹一层薄薄的氰丙烯酸酯。轻轻按压糖组织块，放在支架上。使用切割解决方案构建振动浴池。
然后，在振动器的外部冷却罐中加注碎冰，在整个切割过程中保持四至六摄氏度的温度。将含有红糖组织块的试样支架放入振动池中。使用手稿中描述的振动器设置，生成 300 微升厚的切片。
在平行的气室中创建部分至关重要，因为这是心室壁中心肌细胞纤维的对齐方式。否则，会有太大的伤害。使用标准光学显微镜检查心肌细胞和组织切片的对齐方式。
为了避免损坏组织，请握住糖，而不是组织本身。心肌细胞纤维，应均匀对齐，心肌细胞不应收缩。将加热板放在实验室摇床上，加热至 37 摄氏度。
以 65 RPM 启动实验室摇床。将蛋白酶溶解在溶液一的两毫升中。溶解胶原酶，在两毫升溶液中一。
但是不要混合蛋白酶和胶原酶。将氯化钙加入胶原酶溶液中，最终浓度为5微摩尔。在37摄氏度下孵育两种溶液。
使用钳子将组织切片转移到干净的 60 毫米组织培养盘中。具有五毫米的预冷却切割溶液。将盘子放在冰或冷盘上，用刀片或钳子小心地从组织中去除糖。
要进行组织切片的初始清洗，请将干净的 35 毫米组织培养盘放在热刀片上。并填补它，用两毫米预热溶液之一。将一个或两个组织切片转移到准备好的盘子中。
然后使用一毫米移液器，用于洗涤步骤。洗涤切片后，从盘子中去除溶液一个，加入两毫升的蛋白酶溶液。在热叶片上孵育切片 12 分钟，摇床转速为 65 RPM。
多洗两次组织切片，用两毫升预加热溶液一个。接下来，从菜中去除溶液一，加入两毫升胶原酶溶液。在热叶片上孵育切片至少 30 分钟，以 65 RPM 的速度摇动。
孵育15分钟后，通过用光学显微镜检查盘子，检查有无个单独的个体菌细胞。每五分钟继续检查一次，直到单个菌细胞可见。然后，用两毫升的预热溶液两次洗两次来消化。
并重新填充菜，用两毫升溶液2。小心地用细钳将组织切片的纤维拉开。继续认真工作，避免损害心肌细胞。
移液器几次，一次使用超过你的移液器。然后，通过检查盘子，在光学显微镜下确认棒状心肌细胞已分离。将盘子放回37摄氏度的热盘上，通过摇晃进行搅拌。
通过加入10毫摩尔和100毫摩尔氯化钙库存溶液，慢慢将组织悬浮液的钙浓度从5微摩尔增加至1.5毫摩尔。当钙增加完成时，使用钳子去除任何剩余的未消化组织块。首先，停止暂停的激动。
接下来，使用1000微升移液器，慢慢从悬浮液顶部取出1/3的溶液。避免心肌细胞的吸入。然后向细胞中加入700微升溶液三。
搅拌 10 分钟后，重复这些洗涤步骤。将悬浮液转移到 15 毫升离心管。允许心肌细胞在室温下沉淀，至少10分钟，最多30分钟。
完全拆下上一液。并在经过改良的酪氨酸溶液或所需的实验缓冲液中重新填充颗粒。使用光学显微镜验证细胞质量。
30%至50%的心肌细胞应为棒状，光滑无膜状。和显示，清晰的交叉条纹。为了验证隔离效率，该协议应用于大鼠心肌。
与通过冠状动脉灌注和隔离进行隔离相比，从小组织块分离。使用协议时，通过灌注分离后，观察到棒状细胞比例较低。但总数仍然很高。
相比之下，与组织块分离，产生更少的棒状细胞。流式细胞学，用于定量比较结果。将心肌细胞与组织切片分离，无法达到冠心病灌注获得的产率。
但是，从组织块中，从组织块中提供比菌细胞分离的产量高得多。接下来，该协议被应用于人类心肌。与心肌切片分离，产生海德数和很大一部分棒形人类真菌。
只有一小部分，圆形心肌细胞。与心肌切片分离，导致棒状菌的数量明显增加，而不是与组织块分离。光度定量证实，从心肌切片分离后，心肌细胞的生存能力要高得多。
与所述协议分离的人类细胞可进行结构分析。阿尔法行为素染色，揭示了一个密集的常规Z线模式和平均沙康长度1.92微米，在休息心肌细胞。LTCC 和 RyR 染色，显示透明聚类在细胞膜和 T 管附近共同本地化。
分离的心肌细胞是兴奋的，可用于研究细胞电生理学或激发收缩耦合。行动的潜在形状和持续时间，是在其他人报告的范围，心室心肌细胞，从失败的人类心脏。汗声线扫描记录的钙瞬变，在刺激后显示出明显的上冲。
并且，可接受的信号与噪声比。从下细胞边界的偏转可以看到通过收缩缩短的心肌细胞。由于此协议获得的分离器心肌细胞数量之多，细胞培养是可能的。
这可能允许基因转移，药理学测试和组织工程的人心肌细胞。一个重要的应用，是验证发现，从动物模型在人类细胞。心力衰竭是一种临床综合征，治疗选择非常有限。
改进的心肌细胞分离技术将有助于确定细胞靶点，用于诊断和未来治疗。
