动脉瘤高脂血症小鼠模型中油红O染色全主动脉病变的成像和分析

apoE和其他类型的高脂血症小鼠中动脉粥样硬化病变的定量是评估各种遗传因素和新疗法的关键。我们的方案为在单个小鼠中以定性和定量方式分析动脉粥样硬化负担提供了分步说明。诱导动脉粥样硬化16周后，在给心脏灌注之前，将10毫升注射器装入10毫升DPBS并连接25号针头。

用镊子抬起实验小鼠的腹部皮肤，用细剪刀将皮肤从腹部底部切到颈部顶部。打开胸腔下方的腹壁，用镊子抬起胸骨进入隔膜。切开隔膜并切除胸腔以暴露胸腔。

接下来，在心脏右心房做一个小切口，并将整个体积的DPBS缓慢注射到左心室顶端穿刺中。肝脏和肾脏会变成浅棕色。当所有的生理盐水都已灌注后，使用无纺布海绵清洁胸腔中任何多余的血液和液体。

胸腔擦拭后，取出非实验器官，用镊子和细剪刀切开锁骨。将鼠标置于体视显微镜下，使用镊子和弹簧剪刀解剖主动脉。当主动脉被分离时，用盐水浸泡的无纺布海绵覆盖组织，并解剖主动脉分支，包括臂头动脉、颈动脉、锁骨下动脉、肾脏动脉、髂总动脉和股动脉。

当从主动脉分支的所有动脉都被分离出来时，使用镊子和弹簧剪刀仔细解剖和去除主动脉分支周围的外来脂肪和结缔组织。主动脉和主动脉分支的成功隔离需要练习和耐心。要固定血管树，首先将含有4%甲醛的10毫升注射器装入1X DPBS中，并连接25号针头。

请记住始终在通风橱内准备4%的甲醛。将针头插入左心室顶端穿刺，并缓慢注射整个体积的固定剂。如图所示，用无纺布海绵清洁胸腔中任何多余的液体，并使用镊子和微解剖弹簧剪刀将心脏与主动脉分开。

当组织分离后，分离并切除主动脉及其主要血管，从颈动脉上方一毫米到股动脉末端，并将血管置于DPBS容器中。对于未开封的整个主动脉的油红色O染色，使用Minutien别针将容器固定在蜡培养皿上，然后用新鲜的DPBS冲洗容器。将25毫升新鲜0.45微米孔隙过滤的油红O溶液倒入培养皿中，在室温下染色60分钟。

用60%异丙醇浸没组织，在室温下洗涤20分钟。在孵育结束时，每次洗涤用新鲜蒸馏水冲洗容器三次五分钟，并将培养皿置于解剖显微镜下。使用镊子和弹簧剪刀轻轻清洁主动脉周围的所有血管周围脂肪组织，以避免任何假背景油红O染色，并将血管转移到干净的玻璃显微镜载玻片上。

油红O会将富含脂质的斑块标记为红色，使含有非斑块的区域颜色苍白。然后使用配备相机的光学显微镜获取数字高分辨率显微照片，并最好以标记的图像文件格式保存图像。对于主动脉组织样本的表面安装，将血管转移到蜡培养皿中，并用新鲜的DPBS覆盖组织。

分叉后切断主动脉弓的颈动脉和锁骨下动脉以及腹主动脉中的髂动脉。切断肾动脉。接下来，使用微解剖弹簧剪刀沿着内曲率和髂动脉纵向打开主动脉准备，并沿着较大的曲率切割主动脉弓的三个分支，直到内曲率的基本水平。

然后使用Minutien销将主动脉平放在培养皿上，而不会伸展，使管腔侧朝上，并用新鲜的DPBS覆盖组织。与载脂蛋白E敲除小鼠相比，平滑肌细胞TGF-β-R2敲除载脂蛋白E小鼠的主动脉壁表现出严重的动脉粥样硬化，使得难以解剖病变。此外，动脉瘤在肾上主动脉下方特别广泛，高度联想到晚期人主动脉瘤。

在这里，显示了来自高胆固醇高脂肪饮食喂养的TGF-β-R2敲除载脂蛋白E小鼠的未开封主动脉的代表性图像，该小鼠被油红O染色。小鼠发展为上升和腹主动脉瘤，在臂头动脉，颈动脉，锁骨下动脉，髂动脉，股骨和肾动脉中观察到动脉粥样硬化病变形成加速。与载脂蛋白E敲除小鼠组相比，TGF-β-R2敲除载脂蛋白E小鼠组织的油红O染色显示严重的动脉瘤肿大和整个主动脉的显着伸长。

重要的是能够区分油红O染色斑块与假背景油红O染色的血管周围脂肪组织。动脉粥样硬化斑块是三维现象。在面部主动脉2D病变定量后，我们建议进行斑块集分析，例如主动脉根部和臂头动脉。

该协议还可用于确定特定遗传因素，干预或治疗是否影响这些模型中的动脉粥样硬化进展或消退。