成熟水稻的横向切片（米 苜蓿L.）使用移液器吸头作为固定支架的扫描电子显微镜成像的内核

该协议允许将种子切成完整，这样它们就不会碎裂，从而可以在任何可以放入移液器吸头的种子中可视化淀粉颗粒。可延展的塑料锥体支持干燥组织和器官的天然结构，因此这种廉价且易于使用的歧管允许在短时间内处理许多样品。从法医显微镜的优势来看，抗性淀粉，我们都在寻找的东西，酶对原淀粉的可及性，淀粉溶解，血糖指数和葡萄糖峰值，这些是培育更好的水稻品种的核心参数，以对抗当今世界各地的2型糖尿病。

现在非常高兴向您介绍Kiah Barton博士。Barton博士来自我们的实验室，她将使用教师核心成像设施向您展示如何部署这项技术。首先将干燥的内核去壳。

将单个内核放在工作台上的扁平橡胶塞上，并确保该塞子保持静止。使用第二个扁平的橡胶塞将内核与第一个橡胶塞拧紧，然后从内核中取出外壳，注意不要破坏胚乳，也不要在两个橡胶垫圈之间过于积极地研磨种子。使用细镊子去除任何剩余的谷壳，并将单个去壳的内核插入塑料250微升移液器吸头中。

确保胚核的末端朝向移液器吸头的锥形端。插入第二个250微升移液器吸头，将移液器吸头强制进入第一个移液器吸头，并在切片过程中保持移液器吸头不动，注意不要损坏移液器吸头或弯曲第二个移液器吸头。将移液器吸头组件平放在工作台上，并用手将其固定到位。

另一方面，使用锋利的手术刀刀片切开果仁的中心，切掉移液器尖端的末端。向下切开组合，然后将手术刀刀片垂直定向，使手部的两个新暴露面平行。然后用手术刀切下一毫米厚的米粒。

要进行反射光显微镜检查，请将横向米片放在一张厚重的黑色纸上。使用带有安装的鹅颈管的体视显微镜获得横向切片的光图像，使用至少10倍放大倍率进行倾斜照明。野生型日本和ssg1切片在260倍，920倍和4，200倍放大镜下进行了检查。

当适当准备时，水稻切片的厚度约为0.9毫米，胚乳和完整的果皮和芦荟层的破碎最小。该技术允许制备足够质量的切片，以观察整个胚乳细胞，复合淀粉颗粒和单个亚颗粒。半透明籽粒生产者，如野生型抗性淀粉杂交系、浙辉7954和钴生成的突变体RS111，生产出紧密包装的多面体淀粉颗粒，这是正常的水稻胚乳表型。

白垩籽粒生产商，商业品种Ye Tang和RS4的SEM图像显示了圆形和松散包装的淀粉颗粒。野生型秀秀秀11及其突变体KMD1表达Cry1Ab基因以抑制昆虫捕食，其切片和胚乳形态型与半透明的抗性淀粉系相似。这种技术可以应用于其他物种的种子。

模型单子叶植物Brachypodium distachyon产生非常坚硬的种子，但仍然有可能获得完整的横向截面。完整的横向切片也由柔软的白色冬小麦制成。这种快速、廉价的生物结构筛选方法可以应用于昆虫腿、角豆树尖刺、山楂、鱼刺或任何可以从这种样品支持设置中获益的法医显微镜领域。

执行该方案后，用于电显微镜的溅射包衣，用特定的荧光染料染色，以及应用calcafluor对突变燕麦和大麦品系中的β-葡聚糖细胞壁厚度进行染色，是通过快速表型筛选接近植物育种的一些快速方法。