通过压力-体积环路分析确定心脏对β肾上腺素能刺激的反应

我们的开胸方法，其中我们包括具有正呼气期末压的通气，对于评估和分析体内心脏功能以及β-肾上腺素能刺激的增加具有重要意义。该程序可用于解决与负荷无关的心脏功能的基线参数，以及转基因小鼠或干预中的β-肾上腺素能储备。在确认对踏板反射缺乏反应后，用70%乙醇消毒麻醉小鼠的左后肢，并做一个切口以暴露左股静脉。

用烧灼术对上腹部动脉和静脉进行爆破。为了更好地看到股静脉，视野通过缝合线穿过腹部。然后，将缝合线放置在导管通道的远端，以固定股静脉。

在股静脉下缝合线，并准备将颅骨结到穿刺部位。用连接到1毫升注射器的准备好的微管刺穿股静脉，并用打结的缝合线将管子固定在血管内。为了抵消任何液体损失，使用自动注射器泵以15微升的输注速率输注0.9%氯化钠，补充12.5%白蛋白，并用预热的0.9%氯化钠水合暴露的组织。

要进入胸部，请用70%乙醇冲洗胸部，并在xiphoid过程下方切开皮肤。将胸肌与胸壁钝分开，并用镊子抬起胸壁，让胸壁被切开，直到隔膜完全可见。从下面切开横膈膜以暴露心脏顶点，并使用镊子小心地去除心包。

在左侧进行有限的切除术，并在下腔静脉下方通过缝合线，以减轻下游的预紧力。使用25号套管，轻轻刺穿心尖，并用压力容积导管替换套管，直到所有电极都在心室内。然后，轻轻调整导管的位置，直到获得矩形环。

要获得压力 - 体积回路测量值，请对感兴趣的心功能参数进行在线分析，并等待获得稳态心脏功能。将呼吸器停在呼气末位置，并记录基线参数。3至5秒后，使用镊子将缝合线抬起下腔静脉下方，以获得预负荷独立参数，然后打开呼吸机。

等待至少30秒进行第二次闭塞，直到血流动力学参数稳定。在基础条件下获得测量结果后，将异丙肾上醇加载的注射器安装到注射器泵上。等待至少两分钟，直到观察到新的稳态心脏功能。

在呼气末位置停止呼吸器之前，并记录基线参数。3至5秒后，在下腔静脉下方抬起缝合线以获得预紧力独立参数，并等待至少30秒进行第二次闭塞。然后安装含有下一个异丙肾上腺素浓度的注射器，并重复基线，并预加载独立参数记录。

为了进行平行电导校准，在最后一次异丙肾上腺素剂量反应测量后，将装有15%氯化钠溶液的注射器连接到股导管，并小心地注入5微升的高渗溶液，直到压力 - 体积回路稍微向右移动。等到环路恢复到稳态，然后在呼气结束时停止呼吸器，并立即注射10微升15%氯化钠的推注。然后检查压力-体积回路是否已大大扩大，并向右移动。

要进行电导与容积比，等待5分钟，直到高渗盐水推注完全稀释，然后再取出导管，并使用1毫升注射器，配有21号套管，从跳动心脏的左心室中除去至少600微升的血液。然后将血液转移到37摄氏度水浴中的预热校准比色皿中，具有已知体积的圆柱体，并将压力容积导管中央放入每个圆瓶中以记录电导率。使用这种开放式胸压容积环测量方法，如果导管正确放置在心室内，则整个心脏周期将由矩形压力容积环表示。

如图所示，收缩期从等压收缩阶段开始，在此期间，两个心脏瓣膜都关闭。当心室压力超过主动脉压力时，主动脉瓣打开，血液在射血阶段被泵入主动脉。随后，当主动脉压超过心室压力时，主动脉瓣关闭，舒张开始。

在等气压松弛期间，心室压力下降，直到心房压力超过心室压力，二尖瓣打开。被动舒张充盈，其特征在于舒张末期压力 - 容量关系，然后发生直到下一个心脏周期开始。由于它能够独立于前负荷确定心脏功能，因此压力 - 体积分析可以提供对心脏功能，心脏收缩力的详细见解。

例如，在该分析中，异丙肾上腺素诱导了对每个测量的心脏功能和心脏收缩力参数的显着影响。相反，观察到舒张压参数的降低响应于异丙肾上腺素浓度的增加。在左心室内精确放置导管对于获得无伪影的可重复袢至关重要。

为了优化导管放置，我们更喜欢开胸方法。在PV环路测量之后，可以确定异体异体性斑越，并且可以分离组织，以识别由治疗和/或遗传修饰引起的分子和组织病理学改变。该技术为在正常和病理条件下分析小鼠模型中的β-肾上腺素能储备铺平了道路，并且可以用作测试其他刺激的模板。