心脏和呼吸功能障碍导致癫痫发作后突然死亡。因此,为了研究这种现象,在兔子模型上应用了多系统的方法。该技术能够同时监测和后期分析多只兔子的神经、心脏和呼吸功能,这些兔子围绕癫痫发作、心律失常和死亡前。
虽然疾病可能主要是神经元或心脏,但它可能包括大脑和心脏的电干扰,如癫痫发作和心律失常,以及呼吸功能障碍。和兔子一起工作可能很困难,因为它们的后腿力量。移动兔子时和安装监视器时,注意保持兔子的平静。
首先,将计算机连接到带有 64 针头箱的放大器。要使头箱上的每八个引脚成为参考,请将参考电极设置为独立。对于心电图电极的植入,将兔子固定在超平位置,头部位于调查员的膝盖上,低于其身体的其他部位。
随着第二个调查员将毛皮展开以暴露底层皮肤,下皮将 35 度角弯曲的电极插入每个轴线中。位置引线在胸部,后到右前和左前肢。在腹部,前肢到左后肢。
然后将地面销电极前部放在腹部右后肢。当所有心电图导线都正确放置后,用动物的后肢将兔子固定在适当大小的约束器中。使用 45 度角方法,将皮下直针电极插入头皮。
将一个 EEG 引头放在右前部、左前部、右腹管和头部左腹部位。并将中央参考引线放在其他四个引线之间的中心点。将耳朵之间的电线运行,并松散地将其系在头部后面的约束器上。
为了监测实验期间的呼吸,在边缘耳静脉上将脉冲氧化计连接到一只耳朵上,并轻轻地用帽管固定动物的嘴和鼻子上的面罩。然后将管子的另一端连接到生命体征监视器上。要录制视频 EEG-ECG,打开一个适当的市售 EEG 软件程序并调整视频,以便在视场内观察到所有兔子。
为动物进行至少10至20分钟的基线记录,或直到心率稳定到每分钟200至250次,至少5分钟。将低频滤光片设置为一赫兹,将高频滤波器设置为 59 赫兹。实时添加锁定时间的笔记,以指示干预、神经-心脏事件以及运动或调查员人工制品的时间。
对于photic刺激,将带圆形反射器的光源放在兔子面前30厘米,将闪光强度设置为最大。在头部两侧放置两面镜子,在兔子后面放置一面镜子,使光线进入兔子的眼睛。将光连接到具有可调速率、强度和持续时间的控制器上。
随着菲色刺激器设置为一个赫兹和闪光灯,记录的反应30秒。用面具遮住兔子的眼睛,模拟或导致眼睛闭合,再刺激30秒。在记录眼睛睁开和眼睛闭合反应后,关闭刺激器30秒,并将控制器设置为下一个频率设置。
在以两赫兹间隔从一个频率录制到 25 赫兹的频率后,以五赫兹增量将频率从 60 降至 25 赫兹,并以睁开眼睛记录 30 秒,闭着眼睛记录 30 秒。实验结束时,从兔子身上取出EEG和心电图引线,将动物送回家中的笼子里,由饲养人员进行日常护理。在服药之前,从未经治疗的兔子收集10至20分钟的基线EEG-ECG视频,如图所示。
对于感兴趣的药物的口服管理,将每公斤感兴趣的药物混合0.3毫克,放入三毫升食品级苹果酱中,并将混合物装入三毫升口服注射器中。轻轻地抬起兔子的上唇,将注射器的尖端滑入被兔子牙齿遮挡的嘴边,并将整卷补充药物的苹果酱注射到兔子的嘴里。然后收集两个小时的 EEG-ECG 视频数据,然后将兔子送回其家庭笼子进行常规护理。
在记录 EEG-ECG 对静脉注射药物管理的反应之前,剃掉兔子耳朵的后表面,使用 70% 的乙醇对部位进行消毒,并扩张边缘耳静脉。小心翼翼,用25口径的血管解剖器调节边缘耳静脉,并在导管末端放置注射塞。将三块卷纱布制成的夹板粘在耳朵上,以固定导管到位并直立保持耳朵。
每毫升肝素盐水注射1毫升10个USP单位,以保持导管专利。基线记录完成后,每10分钟向导管注射一至10毫克感兴趣的药物,补充盐水。每次剂量后,仔细监测视频 EEG-ECG、氧化量谱、任何神经、心脏、电和呼吸异常或癫痫活动的视觉证据。
实时以及后期分析期间注意这些变化。要分析心电图视频,请使用适当的市售软件来识别心电图数据中的心动过速、胸腺痛、异位跳动或其他心律失常的时期。为了减少要审查的数据量,创建一个塔乔格拉姆,以增加识别心动过速、心动过速或RR间隔不规则的易用性。
有关药物管理实验后的视频 EEG 分析,可通过 EEG 跟踪进行视觉滚动,以区分癫痫与非癫痫运动,每次剂量药物后至少一分钟。对于幻影刺激实验后的视频 EEG 分析,在适当的 EEG 分析软件程序中创建光谱分析图。然后分析 EEG 的腹射引线,以预测是否存在和缺乏腹射驱动节奏。
腹腔驱动节奏将在光谱分析中创建一个峰值,与刺激器的频率相对应。ECG 形态评估允许检测异常心率、传导和心电图波形式。这些痕迹还可用于量化心率、RR间隔、PR间隔、P 持续时间、QRS 间隔、QT 间隔、QTc、JT 间隔和 T 峰到 T 端间隔。
来自腹外 EEG 引线的记录通常显示的振幅高于前引线数据的振幅。所有引线的主导频率通常以增量范围进行测量。在这里,从一个有代表性的兔子实验的睡眠主轴波显示。
一段睡眠期的多个脑电油蒙太奇表明,这些波来自头部中心,这与人类的发现是一致的。除了正常的 EEG 变化外,在基线记录中还可以观察到各种有意识的非癫痫兔子运动,这些记录可用于区分这些数据和癫痫排泄物。重要的是将心电图引线安全地放入皮肤中,以保持电线远离腿部,并注意将兔子转移到约束器时电极是否仍然连接。
这种多系统记录设备将使未来的药物安全性和疗效研究,并有助于全面了解各种已获得和遗传的疾病。该技术捕获癫痫发作后潜在的致命多组织功能障碍的过程,这将导致对SUDEP机制的更好理解。