심장 및 호흡 장애는 발작 후 갑작스런 사망에 기여합니다. 따라서 이러한 현상을 연구하기 위해 토끼 모델에 다중 시스템 접근법이 적용되었습니다. 이 기술은 발작, 부정맥 및 이전 죽음을 둘러싼 다중 토끼의 신경학적, 심장 및 호흡 기능의 동시 모니터링 및 나중에 분석을 가능하게 합니다.
질병은 주로 신경 또는 심장 일 수 있지만, 그것은 뇌와 심장 모두에 전기 장애를 포함 될 수 있습니다., 발작과 부정맥 등, 호흡 기능 장애 뿐만 아니라. 뒷다리의 힘 때문에 토끼와 함께 일하기가 어려울 수 있습니다. 토끼를 움직일 때, 그리고 모니터를 부착할 때 는 토끼를 진정시키는 데 주의를 기울입니다.
먼저 컴퓨터를 앰프에 64핀 헤드박스로 연결합니다. 헤드박스의 모든 8번째 핀을 참조로 만들려면 참조 전극을 독립적으로 설정합니다. 심전도 전극의 이식을 위해, 조사자의 무릎에 머리와 함께 척추 위치에 토끼를 확보하고 몸의 나머지 부분보다 낮게.
두 번째 조사자가 퍼져 서 서 기본 피부를 노출, 하체 각 축 소에 35도 각도 구부러진 전극을 삽입. 가슴에 리드를 놓고, 좌우 앞다리의 후방을 놓습니다. 그리고 복부에, 왼쪽 뒷다리에 앞쪽.
그런 다음 복부에 오른쪽 뒷다리에 접지 핀 전극 전방을 놓습니다. 모든 심전도 리드가 제대로 배치되면 동물 아래에 뒷다리가있는 적절한 크기의 구속제에서 토끼를 고정하십시오. 45도 각도 접근법을 사용하여 피하 직선 핀 전극을 두피에 삽입합니다.
오른쪽 전방, 왼쪽 전방, 오른쪽 후두, 머리의 좌측 후두 부위에 EEG 리드를 1개 배치합니다. 그리고 다른 네 개의 리드 사이의 중앙 지점에 중앙 참조 리드를 배치합니다. 귀 사이에 전선을 실행하고, 느슨하게 머리 뒤에 억제제에 밧줄.
실험 중 호흡을 모니터링하려면 맥박 산소계를 한쪽 귀 정맥 위에 부착하고 동물의 입과 코 위에 카포노그래피가 있는 얼굴 마스크를 부드럽게 고정합니다. 그런 다음 튜브의 다른 쪽 끝을 활력 징후 모니터에 부착합니다. 비디오 EEG-ECG를 녹화하려면 적절한 시판 가능한 EEG 소프트웨어 프로그램을 열고 모든 토끼가 시야 내에서 관찰될 수 있도록 비디오를 조정합니다.
최소 10~20분 동안 또는 심박수가 분당 200~250회 로 안정될 때까지 동물에 대한 기준선 레코딩을 최소 5분 동안 수행한다. 저주파 필터를 하나의 hertz와 고주파 필터를 59 헤르츠로 설정합니다. 개입, 신경 심장 이벤트, 모터 또는 조사자 유물의 타이밍을 나타내기 위해 실시간으로 시간 잠긴 메모를 추가합니다.
포성 자극의 경우, 플래시 강도가 최대로 설정된 눈 높이에 토끼 앞에 원형 반사체 30cm가 있는 광원을 배치합니다. 그리고 머리 의 양쪽에 두 개의 거울을 놓고, 빛이 토끼의 눈에 들어갈 수 있도록 토끼 뒤에 거울 하나를 놓습니다. 조정 가능한 속도, 강도 및 지속 시간으로 컨트롤러에 라이트를 부착합니다.
포성 자극기는 헤르츠를 한 헤르츠로 설정하고 플래시가 켜면 응답을 30초 동안 기록합니다. 토끼의 눈을 마스크로 덮어 눈가폐쇄를 시뮬레이션하거나 유발하고 30초 동안 자극합니다. 각 주파수에서 눈을 뜨고 눈을 감은 응답을 기록한 후, 30초 동안 인성 자극기를 끄고 컨트롤러를 다음 주파수 설정으로 설정합니다.
두 헤르츠 간격으로 각 주파수에서 60 초 동안 기록 한 후, 5 헤르츠 단위로 60에서 25 hertz로 주파수를 줄이고 눈을 뜨고 30 초 동안 기록하십시오. 실험이 끝나면 토끼에서 EEG 및 ECG 리드를 제거하고 사육장 직원이 일상적인 치료를 위해 동물을 홈 케이지로 돌려놓습니다. 약물을 투여하기 전에, 입증된 바와 같이 치료되지 않은 토끼로부터 10-20분의 기준선 EEG-ECG 비디오를 수집한다.
관심 있는 약물의 구두 투여를 위해, 음식 급 사과 소스의 3 밀리 리터에 관심있는 약물의 킬로그램 당 0.3 밀리 그램을 혼합하고, 3 밀리리터 구강 주사기에 혼합물을로드. 토끼의 윗입술을 부드럽게 들어 올리고, 주사기의 끝을 토끼의 이빨에 의해 방해받지 않는 입쪽으로 밀어 넣고, 약 보충 사과소스의 전체 볼륨을 토끼의 입에 주입합니다. 그런 다음 일상적인 치료를 위해 토끼를 홈 케이지로 되돌리기 전에 2 시간의 EEG-ECG 비디오 데이터를 수집합니다.
정맥 내 약물 투여에 대한 EEG-ECG 반응을 기록하기 전에 토끼귀의 후방 표면을 면도하고 70%에탄올을 사용하여 부위를 소독하고 한계 귀 정맥을 팽창시 보임한다. 조심스럽게, 25 게이지 협막신아테터로 한계 귀 정맥을 수납하고 카테터 의 끝에 사출 플러그를 놓습니다. 세 개의 압연 거즈 조각으로 만든 부목을 귀에 테이프로 붙이고 카테터를 제자리에 고정하고 귀를 똑바로 고정시하십시오.
카테터 특허를 유지하기 위해 헤파린화 식염수당 10 개의 USP 유닛을 1 밀리리터를 주입하십시오. 기준선 기록이 완료되면, 10분마다 한 번씩 카테터에 관심 있는 약물의 킬로그램당 1~10밀리그램으로 보충된 식염수를 주입하십시오. 각 투여량 후, 신경, 심장, 전기 및 호흡기 이상 또는 간질 활성의 시각적 증거에 대해 비디오 EEG-ECG, oximetry capnography를 주의 깊게 모니터링합니다.
이러한 변화는 실시간뿐만 아니라 사후 분석 중에도 유의하십시오. 심전도 비디오를 분석하려면 적절한 상용 소프트웨어를 사용하여 심전도 데이터 내에서 빈맥, brachycardia, 자궁 외 박동 또는 기타 부정맥의 기간을 식별합니다. 검토할 데이터의 양을 줄이려면 타코그램을 만들어 빈맥, 서맥 또는 RR 간격의 요철 기간을 쉽게 식별할 수 있습니다.
약물 투여 실험 후 비디오 EEG 분석을 위해, 각 약물 투여 후 적어도 1분 동안 간질 과 비 간질 운동을 구별하기 위해 EEG 추적을 시각적으로 스크롤한다. 포성 자극 실험 후 비디오 EEG 분석을 보려면 적절한 EEG 분석 소프트웨어 프로그램에서 스펙트럼 분석 플롯을 만듭니다. 그런 다음 후두구동 리듬의 존재와 부재에 대해 EEG의 후두증 리드를 분석한다.
후두 구동 리듬은 포성 자극기의 주파수에 해당하는 스펙트럼 분석에서 피크를 생성합니다. 심전도 형태의 평가는 비정상적인 심박수, 전도 및 심전도 파 형태의 검출을 허용합니다. 추적은 또한 심박수, RR 간격, PR 간격, P 지속 시간, QRS 간격, QT 간격, QTc, JT 간격 및 T-끝 간격에 T 피크를 정량화하는 데 사용할 수 있습니다.
후두 EEG 리드의 기록은 전두엽 리드 데이터에 대해 관찰된 것보다 더 높은 진폭을 나타낸다. 그리고 모든 리드의 지배적 인 주파수는 일반적으로 델타 범위에서 측정됩니다. 여기서, 대표적인 토끼 실험에서 수면 스핀들 파동이 나타난다.
수면 의 한 기간의 다중 EEG 몽타주 이러한 파도는 인간의 발견과 일치하는 머리의 중심에서 발생한다는 것을 보여줍니다. 정상적인 EEG 변화 외에도, 다양한 의식, 비 간질 토끼 운동은 또한 간질 편성 방출에서 이러한 데이터를 구별하는 데 사용할 수있는 기준기록 중에 관찰 될 수있다. ECG 리드를 피부에 단단히 배치하여 전선을 다리에서 멀리 유지하고 토끼를 제지기로 옮길 때 전극이 부착된 상태를 유지하는 것이 중요합니다.
이 다중 시스템 기록 장치는 미래의 약물 안전 및 효능 연구를 가능하게하고 다양한 획득 및 상속 된 질병에 대한 포괄적 인 이해를 촉진할 것입니다. 이 기술은 SUDEP의 기계장치의 더 나은 이해로 이끌어 낼 것입니다 포착 후에 잠재적으로 치명적인, 다기관 기능 장애의 과정을 포착합니다.
