La disfunción cardíaca y respiratoria contribuye a la muerte súbita después de una convulsión. Por lo tanto, para estudiar este fenómeno, se aplicó un enfoque multisondético a un modelo de conejo. Esta técnica permite la supervisión simultánea y el análisis posterior de la función neurológica, cardiaca, y respiratoria de los conejos múltiples que rodean asimientos, arritmias, y muerte precedente.
Si bien una enfermedad puede ser principalmente neuronal o cardíaca, puede incluir alteraciones eléctricas tanto en el cerebro como en el corazón, como convulsiones y arritmias, así como disfunción respiratoria. Puede ser difícil trabajar con conejos debido a su fuerza en las patas traseras. Tenga cuidado de mantener a los conejos tranquilos al moverlos y al colocar los monitores.
Comience conectando la computadora a un amplificador con una caja de cabeza de 64 pines. Para que cada octavo pin de la caja de la cabeza sea una referencia, establezca el electrodo de referencia en independiente. Para la implantación de los electrodos de ECG, asegure un conejo en posición supina con la cabeza en las rodillas del investigador y más bajo que el resto de su cuerpo.
Con un segundo investigador extendiendo el pelaje para exponer la piel subyacente, inserte subdérmicamente electrodos doblados en ángulo de 35 grados en cada axila. Coloque los plomos en el pecho, posteriores a las extremidades anteriores derecha e izquierda. Y en el abdomen, anterior a la extremidad posterior izquierda.
Luego coloque un electrodo de pasador de tierra anterior a la extremidad posterior derecha en el abdomen. Cuando todos los cables de ECG se hayan colocado correctamente, asegure el conejo en un sujeción de tamaño adecuado con las extremidades traseras debajo del animal. Usando un enfoque de ángulo de 45 grados, inserte electrodos subdérmicos de clavijas rectas en el cuero cabelludo.
Coloque una ventaja de EEG en las regiones anterior derecha, anterior izquierda, occipital derecha, y occipital izquierda de la cabeza. Y coloque un cable de referencia central en el punto central entre los otros cuatro cables. Haga pasar los cables entre las orejas y atelos libremente al sujetador detrás de la cabeza.
Para monitorear la respiración durante el experimento, conecte un oxímetro de pulso a una oreja sobre la vena marginal del oído y asegure suavemente una máscara facial con tubos de capnografía sobre la boca y la nariz del animal. Luego coloque el otro extremo del tubo al monitor de signos vitales. Para grabar video EEG-ECG, abra un programa de software EEG apropiado disponible comercialmente y ajuste el video de tal manera que todos los conejos puedan ser observados dentro del campo de visión.
Realice un registro de referencia para el animal durante un mínimo de 10 a 20 minutos, o hasta que la frecuencia cardíaca se estabilice a 200 a 250 latidos por minuto durante al menos cinco minutos. Establezca el filtro de baja frecuencia en un hercio y el filtro de alta frecuencia en 59 hercios. Agregue notas bloqueadas en tiempo real para indicar el momento de las intervenciones, los eventos neuro-cardíacos y los artefactos motores o del investigador.
Para la estimulación fótica, coloque una fuente de luz con un reflector circular de 30 centímetros delante del conejo a la altura de los ojos con la intensidad del flash establecida al máximo. Y coloque dos espejos a cada lado de la cabeza, y un espejo detrás del conejo, para que la luz entre en los ojos del conejo. Conecte la luz a un controlador con una velocidad, intensidad y duración ajustables.
Con el estimulador fótico configurado en un hercio y el flash encendido, grabe la respuesta durante 30 segundos. Cubra los ojos del conejo con una máscara para simular o causar el cierre de los ojos y estimular durante otros 30 segundos. Después de registrar la respuesta de los ojos abiertos y los ojos cerrados en cada frecuencia, apague el estimulador fótico durante 30 segundos y ajuste el controlador a la siguiente configuración de frecuencia.
Después de grabar durante 60 segundos en cada frecuencia de uno a 25 hercios en intervalos de dos hercios, disminuir la frecuencia de 60 a 25 hercios en cinco incrementos de hercios, y grabar durante 30 segundos con los ojos abiertos y 30 segundos con los ojos cerrados. Al final del experimento, retire los cables de EEG y ECG del conejo y devuelva a los animales a sus jaulas domésticas para el cuidado de rutina por parte del personal de cría. Antes de administrar el medicamento, recoja de 10 a 20 minutos de video de EEG-ECG de referencia del conejo no tratado, como se ha demostrado.
Para la administración oral de un medicamento de interés, mezcle 0.3 miligramos por kilogramo del medicamento de interés en tres mililitros de puré de manzana de grado alimenticio y cargue la mezcla en una jeringa oral de tres mililitro. Levante suavemente el labio superior del conejo, deslice la punta de la jeringa hacia el lado de la boca que no esté obstruido por los dientes del conejo e inyecte todo el volumen de puré de manzana complementado con drogas en la boca del conejo. Luego recopile dos horas de datos de video de EEG-ECG antes de devolver al conejo a su jaula doméstica para el cuidado de rutina.
Antes de registrar la respuesta de EEG-ECG a la administración de medicamentos intravenosos, afeite la superficie posterior de la oreja del conejo y use etanol al 70% para desinfectar el sitio y dilatar la vena marginal del oído. Con cuidado, cánula la vena marginal del oído con un angiocatéter de calibre 25 y coloque un tapón de inyección al final del catéter. Pegue con cinta adhesiva una férula creada a partir de tres trozos enrollados de gasa en la oreja para asegurar el catéter en su lugar y mantener la oreja en posición vertical.
Inyecte un mililitro de 10 unidades USP por mililitro de solución salina heparinizada para mantener la patente del catéter. Cuando el registro de la línea de fondo haya terminado, inyecte salino complementado con uno a 10 miligramos por kilogramo de la droga de interés en el catéter una vez cada 10 minutos. Después de cada dosis, vigile cuidadosamente el video EEG-ECG, capnografía oximétrica, para cualquier anormalidad neuro, cardiaca, eléctrica y respiratoria o evidencia visual de la actividad epileptiforme.
Tenga en cuenta estos cambios en tiempo real, así como durante el análisis posterior. Para analizar el video del ECG, utilice un software comercialmente disponible apropiado para identificar períodos de taquicardia, braquicardia, latidos ectópicos u otras arritmias dentro de los datos del ECG. Para reducir la cantidad de datos a revisar, cree un tacograma para aumentar la facilidad con la que se pueden identificar los períodos de taquicardia, bradicardia o irregularidades del intervalo RR.
Para el análisis de EEG de vídeo después de un experimento de administración de fármacos, desplácese visualmente a través del trazado de EEG para distinguir los movimientos epilépticos frente a los no epilépticos durante al menos un minuto después de cada dosis de fármaco. Para el análisis de EEG de video después de un experimento de estimulación fótica, cree una gráfica de análisis espectral en un programa de software de análisis de EEG apropiado. A continuación, analizar los cables occipitales del EEG para la presencia y ausencia del ritmo de conducción occipital.
El ritmo de conducción occipital creará un pico en el análisis espectral que corresponde a la frecuencia del estimulador fótico. La evaluación de la morfología del ECG permite la detección de frecuencias cardíacas anormales, conducción y formas de ondas de ECG. Las trazas también se pueden utilizar para cuantificar la frecuencia cardíaca, el intervalo RR, el intervalo PR, la duración P, el intervalo QRS, el intervalo QT, el QTc, el intervalo JT y el intervalo T-pico a T-final.
Las grabaciones de los plomos occipitales de EEG exhiben típicamente una amplitud más alta que ésa observada para los datos frontales del plomo. Y la frecuencia dominante en todos los cables se mide comúnmente en el rango Delta. Aquí, se muestran las ondas del huso del sueño de un experimento representativo del conejo.
Los montajes múltiples de EEG de un período de sueño demuestran que estas ondas se presentan del centro de la cabeza, que es constante con resultados humanos. Además de los cambios normales de EEG, los varios movimientos conscientes, no-epilépticos del conejo se pueden también observar durante las grabaciones de la línea de fondo que se pueden utilizar para distinguir estos datos de descargas epileptiformes. Es importante colocar el cable del ECG firmemente en la piel para mantener los cables alejados de las patas y tener cuidado de que los electrodos permanezcan unidos al transferir conejos al sujetador.
Este aparato de registro multi-sistema permitirá futuros estudios de seguridad y eficacia de los fármacos, y facilitará una comprensión integral de las diversas enfermedades adquiridas y hereditarias. Esta técnica captura el curso de la disfunción potencialmente fatal, multiorgan después de un asimiento, que llevará a una mejor comprensión del mecanismo de SUDEP.
