母体免疫和抗体转移的研究是无价的，原因有很多，因为这是免疫转移的最初途径，也是新生儿和婴儿预防病原体和疾病的最初途径。由于胎盘和抗体转移与人类相似，兔子是产妇免疫的优良模式。在这篇文章中，我们演示了我们的实验室在新西兰白兔产妇免疫研究中采用的技术，包括产内免疫和牛奶收集。
我们将首先描述新西兰白兔的粘性母体免疫研究的示例时间表和一系列事件。雌性兔子通过鼻内途径接种疫苗，如本视频中所示。根据研究，疫苗可能需要增强，或者可能需要通过额外的途径，如肌肉内免疫接种。
虽然没有描述，血液应在初步免疫前收集，以便进行基线测量，并在研究的剩余部分定期采集。血液很容易获得中央耳动脉与温和镇痛和局部镇痛剂。这些样本中可以测量抗原特异性IgG水平的存在。
兔子然后繁殖。我们更愿意从供应商处购买久经考验的育种者，以确保这些研究的怀孕率更高。根据免疫时间表，兔子可能会在整个怀孕期间接受额外的免疫接种。
抗原特异性IgG被异位转移到试剂盒中。在大约30至32天后，怀孕确实会点燃。我们建议在头几天限制对套件的处理，以尽量减少对套件的拒绝。
血液样本可以从试剂盒中采集，以评估异地转移的抗原特定IgG水平。血液可以在出生时或出生时附近的少量试剂盒中采集，以评估早期抗原特定抗体水平。除了各种各样的营养物质外，试剂盒在哺乳期间还从哺乳剂中接受抗原特异性IgA。
套件通常在四到八周大时断奶。断奶前可以很容易地从哺乳中收集，如本视频所示。然后对采集的牛奶样本进行加工，以检测抗原特异性IgA。
根据研究，疫苗和助推剂盒可以施用，并且可以在很小的时候使用横向树脂从试剂盒中采集序列血样。我们现在将在新西兰白兔展示产内免疫和牛奶收集。所有程序均按照杜克大学机构动物护理和使用委员会的政策获得批准和执行。
鼻内免疫。所需的材料:醋氨酸、注射器和针头、眼科润滑剂、异丙酮、鼻锥、移液器和移液器尖端、粘膜疫苗。在动物处理之前准备免疫解决方案。
兔子在肌肉内每公斤用Acepromazine镇静剂一毫克，用鼻锥用伊索夫鲁兰麻醉。一旦完全麻醉，通过眼睑反射评估，眼科润滑剂添加到每个眼睛，以防止眼睛干燥和随后的角膜溃疡。一旦实验室成员准备好接种疫苗，兔子处于麻醉的足够平面，关闭异氟素和氧气，并取出鼻锥。
将兔子放在背上重新任职，以大约45度角支撑颈部和头部，使管理疫苗的实验室成员能够方便地访问和可视化两个肛门。将移液器装载不超过 100 微升的疫苗溶液，并快速将溶液施用到一个鼻孔，并重复第二个鼻孔的程序。移液器应以大约 45 度角举行。
向鼻腔通道的中间方面倾斜。免疫的目的是解决接触鼻膜的粘膜。因此，提示不应放在鼻腔内，因为这可能会导致粘膜组织的磨擦或刺激，并可能影响鼻腔管理疫苗的免疫原性。
疫苗应快速施用，并在其他鼻孔以同样的方式进行。在两个鼻腔进行给药后，兔子在后部重新任职30秒，以尽量减少疫苗溶液的泄漏。实验室通常一次管理不超过100微升的鼻孔。
如果要以最大总容量为 500 微升的量进行管理，则疫苗可以在 100 微升的别名中接种，免疫之间有 30 秒的休息时间。在疫苗总量交付之前，每个给例之间需要休息30秒，并重复使用额外的疫苗。免疫后，将兔子放在通风口进行恢复，并密切监测动物，直到它能够维持尾部重新任职。
在某些情况下，疫苗配方可能无法完全输送到鼻腔，疫苗制剂的一部分可能保留在鼻腔的外部部分。在这种情况下，由于不清楚正确输送到鼻腔的疫苗的确切数量，因此不建议重新使用额外的疫苗材料，因为这会为实验增加一个未定义的变量。重要的是使用疫苗输送技术，向鼻孔提供完整和一致的疫苗配方。
牛奶收集。所需的材料:醋氨酸、注射器和针头、酒精拭子、纱布、眼润滑剂、伊索夫鲁兰、鼻锥、催产素和小瓶。兔子在肌肉内每公斤用Acepromazine镇静剂一毫克，用鼻锥用伊索夫鲁兰麻醉。
一旦完全麻醉，通过眼睑反射评估，眼科润滑剂应用于每只眼睛，以防止眼睛干燥和随后的角膜溃疡。用酒精拭子清洁边缘耳静脉的皮肤。使用一米注射器和25米针头，通过边缘耳静脉静脉给大约一到两个国际单位的催产素，以诱导牛奶放低。
由于肌肉的平稳放松，兔子在施用催产素后经常小便或排便。催产素施用后，用一块纱布对注射部位施加压力，以提供止血剂。在保持麻醉面膜或鼻锥在兔子的鼻子上，支撑兔子的后部。
顺便提一下，牛奶收集也可以与动物在横向重新任职，但实验室发现，收集更容易，当兔子支撑在它的臀部与助手举行兔子直立与麻醉面膜。打开无菌管准备收集牛奶，并定位乳腺组织和相关奶嘴。兔子通常有四到五对乳腺。
奶嘴通常被最近护理的湿毛包围着，当充满牛奶时，乳腺组织很容易被察觉。抓住与拇指和食指之间的奶嘴相关的乳腺组织，向奶嘴方向的腺组织施加温和的按摩压力。将收集管放在奶嘴上收集表达的牛奶。
催产素有时可能需要几分钟才能有效，乳腺的产奶量似乎各不相同。如果牛奶表达不成功，请等待几分钟或旋转到额外的乳腺。所有奶嘴的牛奶都可以在同一个卑鄙中收集。
通常，几毫升牛奶可以很容易地从哺乳的鹿收集。收集到所需的牛奶量后，关闭伊索夫鲁兰和氧气，从兔子身上取出鼻锥，让兔子在密切监测的同时恢复，直到动物能够维持尾部重新驻留。代表性结果。
图一。对于产妇研究，尽早确定怀孕有助于确认母体不需要再繁殖。妊娠检测选项包括心绞痛、超声波、放射图、体重增加和分子技术，如胰岛素生长因子和孕酮的测量。
维持兔子怀孕所需的足够的孕酮水平。因此，一些研究还评估了怀孕兔子的孕酮水平，并证明与非怀孕兔子相比，特别是妊娠中期器官形成期间，其水平较高。如图一所示，与非怀孕的兔子相比，怀孕的兔子可以检测到孕酮水平升高，即使交配一降压被证实。
使用自动化疗检测测量血清前列腺激素水平。图二。在妊娠期间异位转移的抗原特异性IgG可以通过 Elisa 在试剂盒的血清中测量。
血液可以在出生时或出生时附近的少量试剂盒中采集，以评估早期抗原特定抗体水平。串行采血在技术上要容易得多，因为工具包老化和大小增加。如图二所示，可测量试剂盒中抗原特定IgG的血清水平，并与母体水平进行比较。
孕产妇转移的IgG水平在出生时较高，并随着时间的推移而减少。图三。兔子奶可以收集如本视频所示，并经过处理，以测量Elisa的总抗原和抗原特异性抗体水平。
如此图所示，IgA 在母乳中可用于被动转移到试剂盒的总抗体中占很大一部分。伊加和IgG水平都大大高于IgM.本视频文章描述并演示了鼻内疫苗的管理以及哺乳兔子的牛奶收集，作为在转换适当的母体免疫模式下评估粘膜免疫力的一种手段。
描述是一个典型的产妇内免疫研究设计，结合免疫接种，育种，点燃，哺乳和抗体转移的摘要图像。
