모계 예방 접종 및 항체 전송의 연구는 여러 가지 이유로 매우 중요합니다 이것은 면제 전송의 초기 경로이며 신생아와 유아의 병원균 및 질병으로부터의 후속 보호입니다. 태반과 인체의 항체 전달의 유사성으로 인해 토끼는 모성 예방 접종의 훌륭한 모델입니다. 이 비디오 기사에서 우리는 우리의 실험실이 뉴질랜드 화이트 토끼의 모성 예방 접종 연구에 활용 한 기술을 보여줍니다, 비강 내 예방 접종 및 우유 수집을 포함.
우리는 먼저 뉴질랜드 화이트 토끼에 있는 점막 모계 예방 접종 연구를 위한 예 타임라인 및 일련의 사건을 설명할 것입니다. 여성 토끼는 이 비디오에서 설명한 바와 같이 비강 내 경로를 통해 예방 접종을 받습니다. 연구에 따라, 백신 부스트를 요구할 수 있습니다 또는 추가 경로를 통해 제공 해야 할 수 있습니다., 근육 예방 접종 등.
비록 묘사 되지, 혈액 기준선 측정에 대 한 초기 예방 접종 전에 수집 해야 합니다., 그리고 정기적으로 연구의 나머지 부분에 걸쳐. 혈액은 가벼운 체이드와 국소 진통제를 가진 중앙 귀 동맥에 의해 쉽게 얻을 수 있습니다. 항원 특이적 IgG 수준의 존재는 이러한 샘플에서 측정될 수 있다.
토끼는 다음 사육된다. 우리는 이러한 연구에 대 한 높은 임신 률을 보장 하기 위해 사용 하는 공급 업체에서 입증 된 브리더를 구입 하는 것을 선호 합니다. 예방 접종 일정에 따라 토끼는 임신 기간 내내 추가 예방 접종을받을 수 있습니다.
항원 특이적 IgG는 키트에 지반으로 전달된다. 약 30~32일 후에 임신후 임신이 불붙을 것입니다. 처음 며칠 동안 키트 처리를 제한하여 거부를 최소화하는 것이 좋습니다.
혈액 샘플은 키트로부터 수집되어 트랜스플레이스로 전달된 항원 특이적 IgG 수준을 평가할 수 있다. 혈액은 초기 항원 특정 항체 수준을 평가하기 위하여 출생의 시간 또는 그 근처에 키트의 작은 수에서 집합될 수 있습니다. 다양한 영양소 외에도, 키트는 수유 하는 동안 수 유 도에서 항 원 특정 IgA를 받을.
키트는 일반적으로 4~ 8주에 짜여져 있습니다. 젖을 짜기 전에 수유에서 쉽게 수집 할 수 있습니다이 비디오에서 설명 한 바와 같이. 수집된 우유 샘플은 항원 특이적 IgA의 검출을 위해 처리된다.
연구에 따라, 백신 및 부스트는 키트에 투여될 수 있고 직렬 혈액 샘플은 측면 수페누스 정맥을 사용하여 아주 이른 나이에 키트로부터 수집될 수 있다. 우리는 이제 뉴질랜드 화이트 래빗에서 비강 내 예방 접종 및 우유 수집을 시연 할 것입니다.의정서. 모든 절차는 듀크 대학 기관 동물 관리 및 사용위원회 정책에 따라 승인 및 수행되었습니다.
비강 내 예방 접종. 필요한 재료: 아세프로마진, 주사기 및 바늘, 안과 윤활유, 이소플루란, 코 콘, 파이펫 및 파이펫 팁, 점막 백신. 동물 취급 전에 예방 접종 솔루션을 준비하십시오.
토끼는 근육질로 킬로그램 당 1 밀리그램의 아세프로마진으로 진정되고, 코 콘을 사용하여 이소플루란으로 마취됩니다. 눈꺼풀 반사에 의해 평가된 대로 완전히 마취되면, 눈의 건조와 후속 각막 궤양을 방지하기 위해 각 눈에 안과 윤활유가 추가됩니다. 일단 실험실 구성원이 백신을 관리할 준비가 되고 토끼가 마취의 적당한 평면에 있으면, 이소플루란과 산소를 끄고 코 콘을 제거하십시오.
토끼를 등쪽 의 반수성에 놓고 백신을 투여하는 실험실 구성원에 의해 두 alars의 쉽게 접근 및 시각화를 허용하는 대략 45도 각도로 목과 머리를 소품. 백신 용액의 100 마이크로리터를 초과하지 않고 파이펫을 적재하고 신속하게 하나의 콧구멍에 대한 솔루션을 관리하고 두 번째 콧구멍에 대한 절차를 반복합니다. 파이펫은 대략 45도 각도로 유지되어야 합니다.
비강 통로의 내측 측면을 향해 각도. 예방 접종의 목표는 용액이 나레의 점막에 접촉하는 것입니다. 따라서 이 점막 조직의 마모 또는 자극을 초래할 수 있으며 잠재적으로 nasally 투여 된 백신의 면역 genicity에 영향을 미칠 수 있으므로 팁은 nares 내에 배치되어서는 안됩니다.
백신은 신속하게 투여되고 다른 콧구멍에서 동일한 방식으로 수행되어야합니다. 두 비강 통로에서 투여한 후, 토끼는 백신 용액의 누출을 최소화하기 위해 30초 동안 등쪽 회복으로 유지된다. 실험실은 일반적으로 한 번에 콧구멍 당 100 마이크로 리터를 투여하지 않습니다.
더 큰 부피가 최대 총 500 마이크로리터로 투여될 경우, 백신은 예방접종 사이에 30초의 휴식 기간을 가진 100개의 마이크로리터 알리코트에서 투여될 수 있다. 그리고 백신의 추가 투여는 총 백신 부피가 전달될 때까지 각 투여 사이에 30초의 휴식으로 반복된다. 예방 접종 후, 회복을 위해 통풍관에 토끼를 놓고 흉골 의 침전을 유지할 수있을 때까지 동물을 면밀히 모니터링하십시오.
어떤 경우에는, 백신 제형이 비강으로 완전히 전달되지 않을 수 있으며 백신 제형의 일부가 나레의 외부 부분에 남아 있을 수 있다. 이 경우, 비강으로 제대로 전달된 백신의 정확한 부피가 명확하지 않기 때문에, 실험에 정의되지 않은 변수를 추가할 것이기 때문에 추가 백신 물질의 재적용을 권장하지 않는다. nares에 백신 제형의 완전하고 일관된 납품을 제공하는 백신 전달 기술을 사용하는 것이 중요합니다.
우유 컬렉션. 필요한 재료: 아세프로마진, 주사기 및 바늘, 알코올 면봉, 거즈, 안과 윤활유, 이소플루란, 코 콘, 옥시토신 및 수집 유리병. 토끼는 근육질로 킬로그램 당 1 밀리그램의 아세프로마진으로 진정되고, 코 콘을 사용하여 이소플루란으로 마취됩니다.
눈꺼풀 반사에 의해 평가된 대로 완전히 마취되면, 눈의 건조와 후속 각막 궤양을 방지하기 위해 각 눈에 안과 윤활유가 적용됩니다. 알코올 면봉으로 한계 귀 정맥 위로 피부를 청소하십시오. 1밀 주사기와 25 게이지 바늘을 사용하여, 우유를 실망시키는 한계 귀 정맥에 의해 정맥내 옥시토신의 약 1~2개의 국제 단위를 투여한다.
원활한 근육 이완으로 인해 토끼가 옥시토신 투여 후 소변을 보거나 배변하는 것이 일반적입니다. 옥시토신 투여 후, 주사 부위에 거즈 조각을 사용하여 기혈을 제공 하 게 압력을 가하십시오. 토끼의 코 위에 마취 마스크 나 코 콘을 유지하면서, 뒷마당에 토끼를 소품.
사이드 노트로, 우유 수집은 또한 측면 의 복리후생에서 동물과 함께 수행 할 수 있지만, 실험실은 토끼가 마취 마스크와 함께 똑바로 토끼를 들고 조수와 엉덩이에 올려 질 때 수집이 더 쉽다는 것을 발견한다. 멸균 튜브를 열어 우유 수집을 준비하고 유방 조직과 관련 젖꼭지를 찾습니다. 토끼는 일반적으로 유방 땀샘의 4 5 쌍을 가지고 있습니다.
젖꼭지는 일반적으로 최근 간호에서 젖은 모피에 의해 포위되고 유방 조직은 우유의 가득 차있을 때 쉽게 만져 볼 수 있습니다. 엄지와 집게 손가락 사이의 젖꼭지와 관련된 유방 조직을 잡고 젖꼭지 방향으로 선 조직에 부드러운 마사지 압력을 가하십시오. 수집 튜브를 젖꼭지 위에 놓고 표현된 우유를 수집합니다.
옥시토신이 효과적이기까지 몇 분 정도 걸릴 수 있으며, 우유 생산은 유방 땀샘마다 달라지는 것으로 보입니다. 우유 발현이 성공하지 못하면 몇 분 정도 기다리거나 추가 유방 선으로 회전하십시오. 모든 젖꼭지에서 우유를 동일한 사악한에서 수집 할 수 있습니다.
일반적으로 우유의 몇몇 밀리리터는 수유 도에서 쉽게 수집될 수 있습니다. 원하는 양의 우유가 수집된 후, 이소플루란과 산소를 끄고 토끼에서 코 콘을 제거하고 동물이 흉골 침전을 유지할 수있을 때까지 밀접하게 모니터링되는 동안 토끼가 회복 할 수 있도록하십시오. 대표적인 결과.
그림 하나. 모성 연구를 위해, 가능한 한 빨리 임신을 결정하는 것은 doe가 다시 사육될 필요가 없다는 것을 확인하는 것이 도움이 됩니다. 임신 탐지를 위한 선택권은 인슐린 성장 인자 및 황체 호르몬의 측정과 같은 심근, 초음파, 방사선 사진, 체중 증가 및 분자 기술을 포함합니다.
적절한 프로게스테론 수준은 토끼의 임신 유지를 위해 필요합니다. 따라서 몇몇 연구 결과는 또한 임신한 토끼에 있는 progesterone 수준을 평가하고 특히 중간 임신의 주위에 유기발생 도중, 비 임신 한 토끼에 대하여 높은 수준을 보여주었습니다. 그림 하나에 도시된 바와 같이, 높은 프로게스테론 수준은 벅에 의한 짝짓기 후에도 임신하지 않은 토끼에 비해 임신하지 않은 토끼에서 검출될 수 있다.
혈청 프로게스테론 수준은 자동화된 화학발광성 분석체를 사용하여 측정되었다. 그림 2. 임신 중에 트랜스페이넨으로 옮겨진 항원 특이적 IgG는 엘리사에 의해 키트의 혈청에서 측정될 수 있다.
혈액은 초기 항원 특정 항체 수준을 평가하기 위하여 출생의 시간 또는 그 근처에 키트의 작은 수에서 집합될 수 있습니다. 직렬 혈액 수집은 키트가 나이가 들어와 크기가 증가함에 따라 기술적으로 훨씬 쉽습니다. 그림 2에 묘사된 바와 같이, 키트내의 항원 특이적 IgG의 혈청 수준을 측정하고 모계 수준에 비해 측정될 수 있다.
모성 으로 전송 된 IgG 수준은 출생시 더 높고 시간이 지남에 따라 감소합니다. 그림 3. 토끼 우유는 본 비디오에 도시된 바와 같이 수집될 수 있고, 엘리사에 의한 총 및 항원 특이적 항체 수준을 측정하기 위하여 처리될 수 있다.
이 그림에 도시된 바와 같이, IgA는 키트로 수동 이송에 사용할 수 있는 모유 내의 전체 항체의 상당 부분을 구성한다. IgA와 IgG 수준은 IgM.요약보다 상당히 높습니다. 이 비디오 기사는 산모 예방 접종의 번역적으로 적합한 모델에서 점막 면역을 평가하기위한 수단으로 토끼를 수유에서 비강 내 백신의 투여 및 우유 수집을 설명하고 보여줍니다.
묘사된 것은 예방 접종, 사육, 발성, 수유 및 항체 전송을 통합한 전형적인 모계 내 비강 예방 접종 연구 설계를 위한 요약 영상입니다.
