إن دراسات تحصين الأمهات ونقل الأجسام المضادة لا تقدر بثمن لأسباب عديدة لأن هذا هو الطريق الأولي لنقل المناعة والحماية اللاحقة من مسببات الأمراض والأمراض لدى المواليد الجدد والرضع. نظرا لأوجه التشابه في المشيمة ونقل الأجسام المضادة مع البشر ، تعد الأرانب نموذجا ممتازا لتحصين الأمهات. في هذا المقال الفيديو نبين التقنيات التي استخدمها مختبرنا في دراسات تحصين الأمهات في الأرانب البيضاء في نيوزيلندا، بما في ذلك التحصين داخل الرحم وجمع الحليب.
سنصف أولا جدولا زمنيا وسلسلة من الأحداث لدراسة تحصين الأمهات المخاطية في الأرانب البيضاء في نيوزيلندا. يتم تحصين الأرانب الإناث عبر الطريق داخل الرحم، كما هو موضح في هذا الفيديو. واعتمادا على الدراسة، قد يحتاج اللقاح إلى دفعة أو قد يحتاج إلى إعطاءه من خلال مسار إضافي، مثل التحصين العضلي.
وينبغي جمع الدم قبل التمنيع الأولي لقياسات خط الأساس، وطوال الفترة المتبقية من الدراسة على فترات منتظمة، وإن لم يكن يصور. يتم الحصول على الدم بسهولة عن طريق شريان الأذن المركزي مع التخدير الخفيف وعامل مسكن موضعي. يمكن قياس وجود مستويات IgG الخاصة بالمضاد في هذه العينات.
ثم يتم تربية الأرانب. نحن نفضل شراء مربي ثبت من البائعين لاستخدامها لضمان ارتفاع معدل الحمل لهذه الدراسات. اعتمادا على الجدول الزمني للتحصين، قد تتلقى الأرانب تحصينات إضافية طوال فترة الحمل.
يتم نقل IgG الخاصة بالمضاد بشكل شفاف إلى المجموعات. في ما يقرب من 30 إلى 32 يوما بعد الولادة الحوامل لا أوقد. نوصي بالحد من التعامل مع مجموعات لعدة أيام الأولى لتقليل الرفض من يفعل.
يمكن جمع عينات الدم من مجموعات لتقييم مستويات محددة من IgG مستضد التي تم نقلها عبر البلاستيك. يمكن جمع الدم من عدد قليل من مجموعات في أو بالقرب من وقت الولادة لتقييم مستويات الأجسام المضادة المستضد المحددة في وقت مبكر. بالإضافة إلى مجموعة واسعة من المواد الغذائية، ومجموعات تلقي مستضد IgA محددة من دو المرضعات أثناء الرضاعة.
وعادة ما يتم فطم مجموعات في أربعة إلى ثمانية أسابيع من العمر. قبل فطم الحليب يمكن بسهولة أن يتم جمعها من الرضاعة يفعل كما هو موضح في هذا الفيديو. ثم تتم معالجة عينات الحليب التي تم جمعها للكشف عن مستضد محدد IgA.
اعتمادا على الدراسة، يمكن إعطاء اللقاحات ودفعة لمجموعات ويمكن جمع عينات الدم التسلسلية من مجموعات في سن مبكرة جدا باستخدام الوريد الصابني الجانبي. وسوف نبين الآن التحصين داخل الرحم وجمع الحليب في نيوزيلندا الأرانب البيضاء.البروتوكول. تمت الموافقة على جميع الإجراءات وتنفيذها وفقا لسياسات لجنة العناية والاستخدام المؤسسية للحيوانات في جامعة ديوك.
التحصين داخل الرحم. المواد اللازمة: Acepromazine، حقنة وإبرة، مواد التشحيم العيون، Isoflurane، مخروط الأنف، ماصة، ونصائح ماصة، لقاح المخاطية. إعداد محلول التحصين قبل التعامل مع الحيوانات.
يتم تخدير الأرانب مع Acepromazine ملليغرام واحد لكل كيلوغرام عضلي ، وتخديرها مع Isoflurane باستخدام مخروط الأنف. مرة واحدة تخدير كامل كما تم تقييمها من قبل منعكس الجفن، يتم إضافة مواد التشحيم العيون إلى كل عين لمنع تجفيف العينين وقرحة القرنية اللاحقة. بمجرد أن يكون عضو المختبر مستعدا لإدارة اللقاح والأرنب في مستوى مناسب من التخدير ، قم بإيقاف تشغيل الأيزوفلوران والأوكسجين وإزالة مخروط الأنف.
ضع الأرنب في المقعد الظهري ودعم الرقبة والرأس بزاوية 45 درجة تقريبا تسمح بالوصول السهل وتصور كلا الشرين من قبل عضو المختبر الذي يدير اللقاح. قم بتحميل المصصة بما لا يزيد عن 100 ميكرولتر من محلول اللقاح وسرعان ما قم بإعطاء المحلول لمنخر واحد وكرر الإجراء الخاص بالخياشيم الثاني. وينبغي عقد ماصة في زاوية 45 درجة تقريبا.
زاوية نحو الجانب الوسيط من الممر الأنفي. الهدف من التمنيع هو الحل للاتصال الأغشية المخاطية للناريس. لذلك لا ينبغي وضع طرف داخل nares لأن هذا قد يؤدي إلى كشط أو تهيج الأنسجة المخاطية ويحتمل أن تؤثر على المناعة من اللقاح تدار nasally.
يجب إعطاء اللقاح بسرعة ويتم بنفس الطريقة في الأنف الآخر. بعد تناوله في كلا الممرين الأنفيين ، يتم الحفاظ على الأرنب في المقعد الظهري لمدة 30 ثانية لتقليل تسرب محلول اللقاح. عادة ما يقوم المختبر بإدارة ما لا يزيد عن 100 ميكرولتر لكل منخر في كل مرة.
إذا كان من المقرر إعطاء حجم أكبر بكمية إجمالية قصوى تبلغ 500 ميكرولتر، يمكن إعطاء اللقاح في 100 ميكرولتر من المغذيات مع فترة راحة مدتها 30 ثانية بين التحصينات. وتكررت الإدارات الإضافية للقاح مع 30 ثانية من الراحة بين كل إدارة حتى يتم تسليم إجمالي حجم اللقاح. بعد التمنيع، ضع الأرنب على البطين للتعافي وراقب الحيوان عن كثب حتى يتمكن من الحفاظ على شغل المؤخرة.
في بعض الحالات، قد لا يتم تسليم تركيبة اللقاح بالكامل إلى تجويف الأنف وقد يبقى جزء من تركيبة اللقاح على الجزء الخارجي من nares. في هذه الحالة، لأنه ليس واضحا من الحجم الدقيق للقاح الذي تم تسليمه بشكل صحيح إلى تجويف الأنف، لا يوصي بإعادة تطبيق مواد لقاح إضافية لأن هذا من شأنه أن يضيف متغيرا غير محدد إلى التجربة. من المهم استخدام تقنية توصيل اللقاح التي توفر تسليم كامل ومتسق لصياغة اللقاح إلى nares.
جمع الحليب. المواد اللازمة: Acepromazine، والمحاقن والإبر، مسحة الكحول، الشاش، مواد التشحيم العيون، Isoflurane، مخروط الأنف، الأوكسيتوسين، وقارورة جمع. يتم تخدير الأرانب مع Acepromazine ملليغرام واحد لكل كيلوغرام عضلي ، وتخديرها مع Isoflurane باستخدام مخروط الأنف.
مرة واحدة تخدير كامل كما تم تقييمها من قبل منعكس الجفن، يتم تطبيق مواد التشحيم العيون على كل عين لمنع تجفيف العينين وتقرح القرنية اللاحقة. تنظيف الجلد على الوريد الأذن هامشية مع مسحة الكحول. باستخدام حقنة واحدة مليون وإبرة قياس 25، وإدارة ما يقرب من وحدة واحدة إلى وحدتين دوليتين من الأوكسيتوسين عن طريق الوريد عن طريق الوريد الأذن هامشية للحث على الحليب خذل.
بسبب استرخاء العضلات على نحو سلس، فمن الشائع للأرنب للتبول أو التبرز بعد إدارة الأوكسيتوسين. بعد إدارة الأوكسيتوسين، وتطبيق الضغط على موقع الحقن مع قطعة من الشاش لتوفير hemostasis. مع الحفاظ على قناع التخدير أو مخروط الأنف فوق أنف الأرنب ، دعم الأرنب على أرباعه الخلفية.
كملاحظة جانبية ، يمكن أيضا إجراء جمع الحليب مع الحيوان في شغل المقاعد الجانبية ، ولكن المختبر يجد أن الجمع أسهل عندما يتم دعم الأرنب على الردف مع مساعد يحمل الأرنب منتصبا مع قناع التخدير. افتح الأنبوب العقيم للتحضير لجمع الحليب وتحديد موقع الأنسجة الثديية والحلب المرتبطة بها. الأرانب وعادة ما يكون أربعة إلى خمسة أزواج من الغدد الثديية.
عادة ما تكون الحلمات محاطة بالفرو الرطب من التمريض الحديث والأنسجة الثديية واضحة بسهولة عندما تكون مليئة بالحليب. فهم في الأنسجة الثديية المرتبطة الحلمة بين الإبهام والسبابة وتطبيق ضغط تدليك لطيف على الأنسجة الغدية في اتجاه الحلمة. ضع أنبوب التجميع فوق الحلمة لجمع الحليب المعبر عنه.
قد يستغرق الأمر عدة دقائق حتى يكون الأوكسيتوسين فعالا، ويبدو أن إنتاج الحليب يختلف بين الغدد الثديية. إذا لم يكن تعبير الحليب ناجحا، فانتظر عدة دقائق أو استدار إلى غدة مامماري إضافية. يمكن جمع الحليب من جميع الحلمات في نفس الخسيس.
عادة يمكن جمع عدة ملليلترات من الحليب بسهولة من دو المرضعات. بعد أن يتم جمع الحجم المطلوب من الحليب، قم بإيقاف Isoflurane والأوكسجين وإزالة مخروط الأنف من الأرنب، والسماح للأرنب بالتعافي أثناء مراقبته عن كثب حتى يتمكن الحيوان من الحفاظ على شغل المؤخرة. النتائج التمثيلية.
الشكل الأول. بالنسبة للدراسات الأمومية، من المفيد تحديد الحمل في أقرب وقت ممكن للتأكد من أن ال دو لا يحتاج إلى إعادة تربيته. وتشمل الخيارات المتاحة للكشف عن الحمل الجس، والموجات فوق الصوتية، والتصوير الإشعاعي، وزيادة الوزن، والتقنيات الجزيئية مثل قياسات عوامل نمو الأنسولين والبروجيستيرون.
مستويات البروجسترون الكافية ضرورية للحفاظ على الحمل في الأرانب. لذلك قامت العديد من الدراسات أيضا بتقييم مستويات البروجسترون في الأرانب الحامل وأظهرت مستويات مرتفعة بالنسبة للأرانب غير الحامل ، خاصة أثناء تكوين الأعضاء حول منتصف الحمل. كما هو مبين في الشكل الأول، يمكن الكشف عن مستويات هرمون البروجسترون مرتفعة في الأرانب الحوامل مقارنة مع الأرانب غير الحوامل حتى بعد التزاوج من قبل باك وأكد للجميع لا.
تم قياس مستويات البروجسترون المصل باستخدام المقايسة chemiluminescent الآلي. الشكل الثاني- 1- الأرقام 2- مستضد محدد IgG التي تم نقلها عبر البلاستيك أثناء الحمل يمكن قياسها في مصل مجموعات من قبل إليسا.
يمكن جمع الدم من عدد قليل من مجموعات في أو بالقرب من وقت الولادة لتقييم مستويات الأجسام المضادة المستضد المحددة في وقت مبكر. جمع الدم التسلسلي هو من الناحية الفنية أسهل بكثير مع تقدم مجموعات العمر وزيادة في الحجم. وكما هو مبين في الشكل الثاني، يمكن قياس مستويات المصل من IgG محددة مستضد في مجموعات ومقارنتها بمستويات الأم.
مستويات IgG المنقولة من الأمهات أعلى عند الولادة وتنخفض بمرور الوقت. الشكل الثالث - 1- الأرقام 3- يمكن جمع حليب الأرانب كما هو مبين في هذا الفيديو، ومعالجته لقياس مستويات الجسم المضاد الكلية والمضادة المحددة من قبل إليسا.
كما هو مبين في هذا الرقم، تشكل IgA جزءا كبيرا من إجمالي الأجسام المضادة داخل حليب الثدي المتاحة للنقل السلبي إلى المجموعات. مستويات IgA وIgG أعلى بكثير من IgM.Summary. يصف هذا المقال الفيديوي ويدل على إعطاء اللقاحات داخل الجهاز المناعي وجمع الحليب من الأرانب المرضعة كوسيلة لتقييم المناعة المخاطية في نموذج مناسب ترجمة للتحصين ضد الأم.
يصور هو صورة موجزة لتصميم دراسة التمنيع الأمومي نموذجية تتضمن التحصينات، وتربية، وإشعال، والرضاعة، ونقل الأجسام المضادة.
