Les études sur l’immunisation maternelle et le transfert d’anticorps sont inestimables pour de nombreuses raisons, car il s’agit de la voie initiale du transfert de l’immunité et de la protection subséquente contre les agents pathogènes et les maladies chez les nouveau-nés et les nourrissons. En raison des similitudes dans la placentation et le transfert d’anticorps avec les humains, les lapins sont un excellent modèle d’immunisation maternelle. Dans cet article vidéo, nous démontrons les techniques que notre laboratoire a utilisées dans les études de vaccination maternelle chez les lapins blancs de Nouvelle-Zélande, y compris la vaccination intranasale et la collecte de lait.
Nous allons d’abord décrire un exemple de chronologie et de série d’événements pour une étude d’immunisation maternelle muqueuse chez les lapins blancs de Nouvelle-Zélande. Les lapines sont immunisées par voie intranasale, comme le démontre cette vidéo. Selon l’étude, le vaccin peut nécessiter un coup de pouce ou peut devoir être administré par une voie supplémentaire, comme l’immunisation intramusculaire.
Bien qu’il ne soit pas représenté, le sang devrait être prélevé avant l’immunisation initiale pour les mesures de base et tout au long du reste de l’étude à intervalles réguliers. Le sang est facilement obtenu par l’artère centrale de l’oreille avec une sédation légère et un agent analgésique topique. La présence de taux d’IgG spécifiques à l’antigène peut être mesurée dans ces échantillons.
Les lapins sont ensuite élevés. Nous préférons acheter des éleveurs éprouvés auprès de fournisseurs à utiliser pour assurer un taux de grossesse plus élevé pour ces études. Selon le calendrier d’immunisation, les lapines peuvent recevoir des vaccins supplémentaires tout au long de la grossesse.
Les IgG spécifiques à l’antigène sont transférées transplacentairement aux trousses. À environ 30 à 32 jours après la reproduction, les femmes enceintes s’en vont. Nous vous recommandons de limiter la manipulation des kits pendant les premiers jours afin de minimiser le rejet des faits.
Des échantillons de sang peuvent être prélevés dans les trousses pour évaluer les taux d’IgG spécifiques à l’antigène qui ont été transférés transplacentairement. Le sang peut être prélevé à partir d’un petit nombre de trousses au moment de la naissance ou près de celle-ci afin d’évaluer les niveaux précoces d’anticorps spécifiques à l’antigène. En plus d’une grande variété de nutriments, les kits reçoivent des IgA spécifiques à l’antigène de la bèvrante allaitante pendant l’allaitement.
Les trousses sont généralement sevrées à l’âge de quatre à huit semaines. Avant le sevrage, le lait peut facilement être collecté à partir de la lait maternel, comme le montre cette vidéo. Les échantillons de lait prélevés sont ensuite traités pour la détection d’IgA spécifiques à l’antigène.
Selon l’étude, des vaccins et un coup de pouce peuvent être administrés aux trousses et des échantillons de sang en série peuvent être prélevés sur les trousses à un très jeune âge en utilisant la veine saphène latérale. Nous allons maintenant démontrer l’immunisation intranasale et la collecte de lait dans le protocole de lapins blancs de Nouvelle-Zélande. Toutes les procédures ont été approuvées et exécutées conformément aux politiques du Comité institutionnel de protection et d’utilisation des animaux de l’Université Duke.
Immunisation intranasale. Matériaux nécessaires:Acepromazine, seringue et aiguille, lubrifiant ophtalmique, Isoflurane, cône de nez, pipette, et pipettes, vaccin muqueux. Préparer la solution d’immunisation avant la manipulation de l’animal.
Les lapins sont sédents avec de l’acepromazine un milligramme par kilogramme par voie intramusculaire et anesthésiés avec de l’isoflurane à l’aide d’un cône de nez. Une fois entièrement anesthésié comme évalué par réflexe de paupière, un lubrifiant ophtalmique est ajouté à chaque oeil pour empêcher le dessèchement des yeux et l’ulcération cornéenne subséquente. Une fois que le membre du laboratoire est prêt à administrer le vaccin et que le lapin est dans un plan d’anesthésie adéquat, éteignez l’isoflurane et l’oxygène et retirez le cône de nez.
Placez le lapin en réamence dorsale et soutenez le cou et la tête à un angle d’environ 45 degrés qui permet un accès et une visualisation faciles des deux alaires par le membre du laboratoire qui administre le vaccin. Chargez la pipette avec pas plus de 100 microlitres de la solution vaccinale et administrez rapidement la solution à une narine et répétez la procédure pour la deuxième narine. La pipette doit être maintenue dans un angle d’environ 45 degrés.
Angle vers l’aspect médial du passage nasal. Le but de l’immunisation est que la solution entre en contact avec les membranes muqueuses des narines. La pointe ne doit donc pas être placée dans les narines, car cela pourrait entraîner une abrasion ou une irritation des tissus muqueux et potentiellement influencer l’immunogénicité du vaccin administré par voie nasale.
Le vaccin doit être administré rapidement et fait de la même manière dans l’autre narine. Après administration dans les deux voies nasales, le lapin est maintenu en réorgence dorsale pendant 30 secondes afin de minimiser les fuites de la solution vaccinale. Le laboratoire n’administre généralement pas plus de 100 microlitres par narine à la fois.
Si un volume plus important doit être administré avec un volume total maximal de 500 microlitres, le vaccin peut être administré en 100 aliquotes microlitres avec une période de repos de 30 secondes entre les vaccinations. Et des administrations supplémentaires de vaccins répétées avec 30 secondes de repos entre chaque administration jusqu’à ce que le volume total de vaccins soit livré. Après la vaccination, placez le lapin sur le ventrum pour la récupération et surveillez de près l’animal jusqu’à ce qu’il soit capable de maintenir la réamence sternale.
Dans certains cas, la formulation vaccinale peut ne pas être complètement administrée dans les fosses nasales et une partie de la formulation vaccinale peut demeurer sur la partie extérieure des narines. Dans ce cas, comme il n’est pas clair du volume exact du vaccin qui a été correctement administré dans les fosses nasales, ne recommandez pas une nouvelle application de matériel vaccinal supplémentaire, car cela ajouterait une variable non définie à l’expérience. Il est important d’utiliser une technique d’administration du vaccin qui assure l’administration complète et uniforme de la formulation du vaccin aux narines.
Collecte du lait. Matériel nécessaire: Acepromazine, seringues et aiguilles, tampon d’alcool, gaze, lubrifiant ophtalmique, Isoflurane, cône de nez, ocytocine et flacon de collecte. Les lapins sont sédents avec de l’acepromazine un milligramme par kilogramme par voie intramusculaire et anesthésiés avec de l’isoflurane à l’aide d’un cône de nez.
Une fois entièrement anesthésié tel qu’évalué par réflexe de paupière, un lubrifiant ophtalmique est appliqué sur chaque œil pour empêcher le dessèchement des yeux et l’ulcération cornéenne subséquente. Nettoyez la peau sur la veine marginale de l’oreille avec l’écouvillon d’alcool. À l’aide d’une seringue d’un mil et d’une aiguille de calibre 25, administrer environ une à deux unités internationales d’ocytocine par voie intraveineuse par la veine marginale de l’oreille pour induire le lait laissé tomber.
En raison de la relaxation des muscles lisses, il est courant que le lapin urine ou défèque après l’administration d’ocytocine. Après l’administration d’ocytocine, appliquez une pression sur le site d’injection avec un morceau de gaze pour fournir une hémostase. Tout en maintenant le masque d’anesthésie ou le cône de nez sur le nez du lapin, soutenez le lapin sur ses quartiers arrière.
En passant, la collecte de lait peut également être effectuée avec l’animal en recumbency latérale, mais le laboratoire constate que la collecte est plus facile lorsque le lapin est appuyé sur sa croupe avec un assistant tenant le lapin debout avec le masque d’anesthésie. Ouvrez le tube stérile pour vous préparer à la collecte du lait et localisez le tissu mammaire et les trayons associés. Les lapins ont généralement quatre à cinq paires de glandes mammaires.
Les trayons sont généralement entourés de fourrure humide provenant d’allaitements récents et le tissu mammaire est facilement palpable lorsqu’il est plein de lait. Saisissez le tissu mammaire associé au trayon entre le pouce et l’index et appliquez une douce pression massante sur le tissu glandulaire dans la direction du trayon. Placez le tube de collecte sur le trayon pour recueillir le lait exprimé.
L’efficacité de l’ocytocine peut parfois prendre plusieurs minutes, et la production de lait semble varier d’une glande mammaire à l’autre. Si l’expression du lait n’est pas réussie, attendez plusieurs minutes ou tournez autour d’une glande mammaire supplémentaire. Le lait de toutes les tétines peut être collecté dans le même vile.
Typiquement, plusieurs millilitres de lait peuvent être facilement collectés à partir d’une bèce en lait. Une fois que le volume de lait souhaité a été collecté, éteignez l’isoflurane et l’oxygène et retirez le cône nasal du lapin et laissez le lapin récupérer tout en étant surveillé de près jusqu’à ce que l’animal soit en mesure de maintenir le recumbency sternal. Résultats représentatifs.
Figure un. Pour les études maternelles, il est utile de déterminer la grossesse le plus tôt possible pour confirmer que la bè quinz a pas besoin d’être reproduite. Les options pour la détection de grossesse incluent la palpation, l’ultrason, les radiographies, le gain de poids, et les techniques moléculaires telles que des mesures des facteurs de croissance d’insuline et de la progestérone.
Des niveaux adéquats de progestérone sont nécessaires pour le maintien de la grossesse chez le lapin. Par conséquent, plusieurs études ont également évalué les niveaux de progestérone chez les lapines gestantées et démontré des niveaux élevés par rapport aux lapines non gestantines, en particulier pendant l’organogenèse vers le milieu de la gestation. Comme le montre la figure un, des niveaux élevés de progestérone peuvent être détectés chez les lapines gestantes par rapport aux lapines non gestantes, même après que les accouplements par un mâle ont été confirmés pour tous les cas.
Des niveaux de progestérone de sérum ont été mesurés utilisant une analyse chemiluminescente automatisée. Figure deux. Les IgG spécifiques à l’antigène qui ont été transférés transplacentairement pendant la gestation peuvent être mesurées dans le sérum des kits par Elisa.
Le sang peut être prélevé à partir d’un petit nombre de trousses au moment de la naissance ou près de celle-ci afin d’évaluer les niveaux précoces d’anticorps spécifiques à l’antigène. La collecte de sang en série est techniquement beaucoup plus facile à mesure que les kits vieillissent et augmentent en taille. Comme le montre la figure deux, les concentrations sériques d’IgG spécifiques à l’antigène dans les trousses peuvent être mesurées et comparées aux concentrations maternelles.
Les taux d’IgG transférés par la mère sont plus élevés à la naissance et diminuent avec le temps. Figure trois. Le lait de lapin peut être collecté comme le montre cette vidéo et traité pour mesurer les niveaux d’anticorps totaux et spécifiques à l’antigène par Elisa.
Comme le montre cette figure, les IgA constituent une partie importante des anticorps totaux dans le lait maternel qui sont disponibles pour le transfert passif vers les trousses. Les niveaux d’IgA et d’IgG sont considérablement plus élevés que ceux d’IgM.Summary. Cet article vidéo décrit et démontre l’administration de vaccins intranasaux et la collecte de lait de lapins allaitants comme moyen d’évaluer l’immunité muqueuse dans un modèle translationnellement approprié d’immunisation maternelle.
On y voit une image sommaire d’une étude d’immunisation intranasale maternelle typique intégrant les immunisations, la reproduction, l’allaitement, la lactation et le transfert d’anticorps.
