Yenidoğanlarda ve bebeklerde bağışıklık transferinin ve daha sonra patojenlerden ve hastalıklardan korunmanın ilk yolu olduğu için anne bağışıklama ve antikor transferi çalışmaları birçok nedenden dolayı paha biçilmezdir. Plasentasyon ve insanlarla antikor transferinde benzerlikler nedeniyle, tavşanlar mükemmel bir anne bağışıklama modelidir. Bu video makalesinde laboratuvarımızın Yeni Zelanda Beyaz Tavşanlarında anne bağışıklama çalışmalarında kullandığı teknikleri gösteriyoruz, intranazal bağışıklama ve süt toplama dahil.
İlk olarak Yeni Zelanda Beyaz Tavşanları'nda bir mukozal maternal bağışıklama çalışması için örnek bir zaman çizelgesi ve olaylar serisini açıklayacağız. Dişi tavşanlar, bu videoda gösterildiği gibi intranazal rota ile bağışıklanır. Çalışmaya bağlı olarak, aşı bir takviye gerektirebilir veya kas içi bağışıklama gibi ek bir yoldan verilmesi gerekebilir.
Tasvir olmamakla birlikte, temel ölçümler için ilk bağışıklamadan önce ve çalışmanın geri kalanı boyunca düzenli aralıklarla kan toplanmalıdır. Kan, hafif sedasyon ve topikal analjezik bir ajan ile merkezi kulak atardamarı tarafından kolayca elde edilir. Bu örneklerde antijene özgü IgG seviyelerinin varlığı ölçülebilir.
Tavşanlar daha sonra yetiştirilir. Bu çalışmalar için daha yüksek bir gebelik oranı sağlamak için satıcılardan kanıtlanmış yetiştiriciler satın almayı tercih ediyoruz. Bağışıklama zaman çizelgesine bağlı olarak, tavşanlar hamilelik boyunca ek bağışıklamalar alabilir.
Antijene özgü IgG, kitlere transentsel olarak aktarılır. Yaklaşık 30 ila 32 gün sonra üreme sonrası hamileler kindle olacaktır. İlk birkaç gün boyunca kitlerin kullanımını sınırlandırmanızı öneririz.
Transenktif olarak aktarılan antijene özgü IgG seviyelerini değerlendirmek için kitlerden kan örnekleri toplanabilir. Erken antijene özgü antikor seviyelerini değerlendirmek için doğum anında veya doğum zamanına yakın az sayıda kitten kan toplanabilir. Çok çeşitli besinlere ek olarak, kitler emzirirken emziren doe'dan antijene özgü IgA alır.
Kitler tipik olarak dört ila sekiz haftalıkken tozlanır. Sütten sütten önce, bu videoda gösterildiği gibi emzirmeden kolayca toplanabilir. Toplanan süt numuneleri daha sonra antijene özgü IgA'nın tespiti için işlenir.
Çalışmaya bağlı olarak, kitlere aşılar ve bir takviye uygulanabilir ve çok erken yaşlarda kitlerden lateral saphenöz damar kullanılarak seri kan örnekleri toplanabilir. Şimdi Yeni Zelanda Beyaz Tavşanlar Protokolü'nde intranazal bağışıklama ve süt toplamayı göstereceğiz. Tüm prosedürler Duke Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi politikalarına uygun olarak onaylanmış ve gerçek gerçekleştirildi.
İntranazal Bağışıklama. Gerekli Malzemeler: Asepromazin, şırınga ve iğne, oftalmik yağlayıcı, Isoflurane, burun konisi, pipet ve pipet uçları, mukozal aşı. Hayvan elleçlemeden önce bağışıklama çözeltisini hazırlayın.
Tavşanlar intramüsküler olarak kilogram başına bir miligram Aseterin ile yatıştırılır ve burun konisi kullanılarak Isoflurane ile uyuşturulur. Göz kapağı refleksi ile değerlendirildiği gibi tamamen uyuşturulduktan sonra, gözlerin kurumasını ve ardından kornea ülserasyonunu önlemek için her göze bir oftalmik yağlayıcı eklenir. Laboratuvar üyesi aşıyı vermeye hazır olduğunda ve tavşan yeterli bir anestezi düzlemine girdiğinde, izofluran ve oksijeni kapatın ve burun konisini çıkarın.
Tavşanı dorsal reumbency'ye yerleştirin ve boynu ve başı, aşıyı uygulayan laboratuvar üyesi tarafından her iki alar'ın kolay erişmesini ve görselleştirilmesini sağlayan yaklaşık 45 derecelik bir açıyla destekleyin. Pipetleri aşı çözeltisinin 100 mikrolitresinden fazla olmadan yükleyin ve çözeltiyi hızlı bir şekilde bir burun deliğine uygulayın ve ikinci burun deliği prosedürünü tekrarlayın. Pipet yaklaşık 45 derecelik bir açıyla tutulmalıdır.
Burun pasajının medial yönüne doğru açı. Bağışıklamanın amacı, çözeltinin narların mukozal zarlarına temas etmesidir. Bu nedenle, mukozal dokuların aşınmasına veya tahrişine neden olabileceğinden ve nazal olarak uygulanan aşının immünojenikliğini potansiyel olarak etkileyebileceğinden, uç narların içine yerlendirilmemelidir.
Aşı hızlı bir şekilde uygulanmalı ve diğer burun deliğinde aynı şekilde yapılmalıdır. Her iki burun pasajında da uygulamadan sonra, tavşan aşı çözeltisinin sızıntısını en aza indirmek için 30 saniye boyunca dorsal rekumbency tutulur. Laboratuvar genellikle burun deliği başına aynı anda en fazla 100 mikrolitre uygular.
Maksimum toplam hacim 500 mikrolitre ile daha büyük bir hacim uygulanacaksa, aşı bağışıklamalar arasında 30 saniye dinlenme süresi ile 100 mikrolitre aliquots olarak verilebilir. Ve aşının ek uygulamaları, toplam aşı hacmi teslim edilene kadar her uygulama arasında 30 saniye dinlenme ile tekrarlanır. Bağışıklamadan sonra, tavşanı iyileşme için ventrum üzerine yerleştirin ve sternal recumbency'yi koruyabilene kadar hayvanı yakından izleyin.
Bazı durumlarda, aşı formülasyonu burun boşluğuna tamamen teslim edilmeyebilir ve aşı formülasyonunun bir kısmı narların dış kısmında kalabilir. Bu durumda, burun boşluğuna düzgün bir şekilde teslim edilen aşının tam hacmi açık olmadığından, deneye tanımlanmamış bir değişken ekleyeceğinden ek aşı materyalinin yeniden kullanılmasını önermeyin. Aşı formülasyonunun nares'e eksiksiz ve tutarlı bir şekilde ulaştırılmasını sağlayan bir aşı dağıtım tekniği kullanmak önemlidir.
Süt toplama. Gerekli malzemeler: Asepromazin, şırıngalar ve iğneler, alkol çubuğu, gazlı bez, oftalmik yağlayıcı, Isoflurane, burun konisi, oksitosin ve bir koleksiyon şişesi. Tavşanlar intramüsküler olarak kilogram başına bir miligram Aseterin ile yatıştırılır ve burun konisi kullanılarak Isoflurane ile uyuşturulur.
Göz kapağı refleksi ile değerlendirildiği gibi tamamen uyuşturulduktan sonra, gözlerin kurumasını ve ardından kornea ülserasyonunu önlemek için her göze bir oftalmik yağlayıcı uygulanır. Alkol çubuğu ile marjinal kulak damarı üzerindeki cildi temizleyin. Bir mil şırınga ve 25 kalibre iğne kullanarak, sütün hayal kırıklığına uğratılmasını sağlamak için marjinal kulak damarı tarafından intravenöz olarak yaklaşık bir ila iki uluslararası oksitosin ünitesi verin.
Düz kas gevşemesi nedeniyle, tavşanın oksitosin yönetimini takiben idrar yapması veya dışkılaması yaygındır. Oksitosin uygulamasını takiben, hemostaz sağlamak için enjeksiyon bölgesine bir parça gazlı bezle basınç uygulayın. Anestezi maskesini veya burun konisini tavşanın burnu üzerinde tutarken, tavşanı arka mahallelerine destekleyin.
Yan not olarak, süt toplama hayvanla yanal rekumbens olarak da yapılabilir, ancak laboratuvar, tavşanın üzerine, tavşanı anestezi maskesiyle dik tutan bir asistanla desteklendiğinde toplamanın daha kolay olduğunu bulur. Süt toplamaya hazırlanmak için steril tüpü açın ve meme dokusunu ve ilgili memeleri bulun. Tavşanlar genellikle dört ila beş çift meme bezine sahiptir.
Meme uçları tipik olarak son hemşirelikten kaynaklanan ıslak kürklerle çevrilidir ve meme dokusu sütle dolduğunda kolayca hissedilebilir. Başparmak ve işaret parmağı arasındaki meme ucu ile ilişkili meme dokusunu kavrayın ve meme ucu yönünde glandüler dokuya hafif bir masaj basıncı uygulayın. İfade edilen sütü toplamak için toplama tüpünü meme ucunun üzerine yerleştirin.
Oksitosinin etkili olması bazen birkaç dakika sürebilir ve süt üretiminin meme bezleri arasında değiştiği görülmektedir. Süt ifadesi başarılı olmazsa, birkaç dakika bekleyin veya ek bir meme bezine dönün. Tüm tüttürüllerden süt aynı aşağılıkta toplanabilir.
Tipik olarak birkaç mililitre süt emziren bir doe'dan kolayca toplanabilir. İstenilen süt hacmi toplandıktan sonra, Isoflurane ve oksijeni kapatın ve burun konisini tavşandan çıkarın ve hayvan sternal rekumbensi koruyabilene kadar yakından izlenirken tavşanın iyileşmesine izin verin. Temsili Sonuçlar.
Şekil bir. Anne çalışmaları için, hamileliğin mümkün olduğunca erken belirlenmesi, doe'nun yeniden yetiştirilmesine gerek olmadığını doğrulamak için yararlıdır. Gebelik tespiti için seçenekler arasında palpasyon, ultrason, radyografi, kilo alımı ve insülin büyüme faktörlerinin ve progesteron ölçümleri gibi moleküler teknikler bulunur.
Tavşanlarda hamileliğin sürdürülmesi için yeterli progesteron seviyeleri gereklidir. Bu nedenle, çeşitli çalışmalar hamile tavşanlarda progesteron seviyelerini de değerlendirmiş ve özellikle orta gebelik çevresindeki organogenez sırasında hamile olmayan tavşanlara göre yüksek seviyeler göstermiştir. Şekil 1'de gösterildiği gibi, hamile tavşanlarda, bir dolar ile çiftleşmeler doğrulandıktan sonra bile hamile olmayan tavşanlara kıyasla yüksek progesteron seviyeleri tespit edilebilir.
Serum progesteron düzeyleri otomatik bir chemiluminescent tahlili kullanılarak ölçüldü. Şekil 2. Gebelik sırasında transentasyonel olarak transfer edilen antijene özgü IgG, Elisa tarafından kitlerin serumunda ölçülebilir.
Erken antijene özgü antikor seviyelerini değerlendirmek için doğum anında veya doğum zamanına yakın az sayıda kitten kan toplanabilir. Kitler yaşlandıkça ve boyut arttıkça seri kan toplama teknik olarak çok daha kolaydır. Şekil 2'de gösterildiği gibi, kitlerdeki antijene özgü IgG'nin serum seviyeleri ölçülebilir ve anne seviyeleriyle karşılaştırılabilir.
Doğumla transfer edilen IgG seviyeleri doğumda daha yüksektir ve zamanla azalır. Şekil Üç. Tavşan sütü bu videoda gösterildiği gibi toplanabilir ve Elisa tarafından toplam ve antijene özgü antikor seviyelerini ölçmek için işlenebilir.
Bu şekilde gösterildiği gibi, IgA, anne sütü içindeki kitlere pasif transfer için mevcut olan toplam antikorların önemli bir kısmını oluşturur. Hem IgA hem de IgG seviyeleri IgM.Summary'den oldukça yüksektir. Bu video makalesi, intranazal aşıların ve emziren tavşanlardan süt toplanmasının, dil içi olarak uygun bir anne bağışıklama modelinde mukozal bağışıklığı değerlendirmenin bir yolu olarak tanımlanmaktadır ve göstermektedir.
Tasvir edilen, bağışıklamalar, üreme, kindling, emzirme ve antikor transferini içeren tipik bir anne intranazal bağışıklama çalışma tasarımı için özet bir görüntüdür.
