聚酐IL-1α纳米颗粒 体内抗肿瘤 活性评价

这些方案为研究免疫调节剂攻击的抗肿瘤活性提供了一种有效的方法。此外，可以使用这些提出的方法分析循环细胞因子和免疫细胞群中的相关机会。该协议的主要优点是它简单而直接地植入肿瘤并监测其生长。该技术的直接含义是评估抗癌研究中某些疗法或挑战的疗效。此外，这些技术的某些方面适用于毒性研究。首先，在37摄氏度的预热水浴中解冻冷冻的小鼠EERL细胞，并将它们转移到含有温热培养基的15毫升锥形管中。将锥形管在25摄氏度下以277倍G离心5分钟以除去培养基。然后将细胞腭重悬于三至五毫升新鲜培养基中，并将其转移到 T25 细胞培养瓶中。让细胞在37摄氏度和5%二氧化碳的湿润培养箱中生长，扩充至更大的烧瓶，每三天传代一次。当有足够的细胞将所需的植入所有小鼠中时，取出烧瓶，丢弃培养基并轻轻冲洗细胞PBS。然后加入4毫升0.25%胰蛋白酶EDTA，在37摄氏度下孵育两分钟。加入新鲜培养基以停止胰蛋白酶反应，并将细胞悬液收集在50毫升锥形管中。将细胞重悬于新鲜培养基中并计数细胞。再次离心，然后向细胞中加入冷PBS，使最终浓度为每毫升1000万个细胞。注射前将细胞悬浮液保持在冰上。用乙醇垫对侧面区域进行消毒。为了将细胞悬浮液注射到小鼠体内，将100微升细胞悬液吸入注射器中，并从顶部除去所有气泡和死腔。然后以缓慢而稳定的方式将细胞悬液皮下注射到麻醉的小鼠中。将动物放在各自的笼子里并监测它们，直到它们从麻醉中恢复过来。要收集血液，请用非惯用手抓住肩膀上松弛的皮肤，然后用 18 号针或柳叶刀刺穿下颌下静脉。将 200 至 300 μL 血液收集到 1.5 mL 聚丙烯微量离心管或血清分离管中。采血后，对穿刺部位施加轻轻的压力，直到出血停止。将小鼠放回各自的笼子并观察，直到它们从麻醉中恢复。让收集的血液在室温下凝结 20 至 30 分钟。然后将试管放在冰上，直到它们准备好离心。将凝固的血液以1,540倍G在4摄氏度下离心15分钟，并从顶部小心收集血清层。解冻血清或血浆样品，同时将其放在冰上。然后，将样品以 1， 540 倍 G 在 4 摄氏度下离心 5 分钟，沉淀任何细胞碎片并从顶部小心地收集血清层。将多重试剂盒置于室温下，并根据制造商的方案进行测定。将每只小鼠仰卧，在腹部皮肤上喷洒70%乙醇。用镊子和剪刀从小鼠右侧切开淋巴结，从左侧切出肿瘤。如果肿瘤很大，将其切成小块，并从组织上取下约 500 至 600 毫克。将组织放在含有三至五毫升RPMI培养基的相应解离管上。使用自动解离器使组织均质化。均质化后，将细胞悬液通过70微米过滤器过滤到50毫升锥形管中。在25摄氏度下以277倍G离心5分钟以除去培养基。在一至两毫升冷PBS中洗涤并重新悬浮细胞。使用0.4%胰蛋白酶蓝染色，在血细胞计数器中计数活细胞。计算获得 2 到 300 万个细胞并将它们转移到相应的传真管所需的体积。在25摄氏度下以277倍G离心计数细胞5分钟，倒出上清液并将细胞重新悬浮到300微升PBS中。每管加入 0.5 至 1 微升僵尸染料，并在室温下在黑暗中孵育 20 分钟。离心细胞 用一至两毫升传真缓冲液洗涤它们，并将它们重新悬浮到 200 微升的传真缓冲液中。根据制造商的方案加入 FC 受体阻滞剂，并将细胞孵育 10 分钟。在先前描述的设置下再次离心，并用一至两毫升传真缓冲液洗涤细胞。加入抗体混合物，在 4 摄氏度的黑暗中孵育 30 分钟。孵育后，离心并用一至两毫升传真缓冲液洗涤细胞。加入 300 至 400 μL 2% 多聚甲醛溶液，重新悬浮固定。将细胞在4摄氏度下储存几天，或立即用多色流式细胞仪进行分析。在这项研究中，聚酸酐IL-1的抗肿瘤活性