我们建立了一个同质的基于珠子的检测来研究伴奏-科查佩龙的相互作用。使用此技术，我们筛选抑制 Hsp90 和 FKDP51 或 FKBP52 之间相互作用的小分子，并识别有效和选择性的抑制剂。这种高通量筛选技术是强大和可靠的。
结果可以在一小时内获得，它只需要少量的珠子蛋白和化合物。Hsp90 与这种共茶酮的相互作用与人类疾病有关， 如阿尔茨海默氏症， 癌症， 自身免疫性疾病.该技术提供了筛选具有高度医学重要性的伴郎-可可酮抑制剂的机会。
以下是此检测的基本原则。当 Hsp90C-终端肽和可可酮 TPR 域之间的相互作用使供体和接受者珠子接近时，就会生成高度放大的信号。添加相互作用抑制剂时，供体和接受珠无法接近，也不会产生可检测信号。
首先以每毫升浓度一毫克稀释PBS中的Hsp90肽。稀释 PBS 中未合并的接受珠，并将珠子转移到 1.5 毫升管中。将稀释的珠子离心清洗，然后小心地取出超高那。
对于结合，将接受珠设定为肽中的接受珠，比例为 10 比 1。对PBS稀释肽、Tween 20和氰化钠溶液中的古肽珠，在旋转摇床上孵育末端搅拌。为了阻挡未激活的部位，在珠子中加入20微升pH 8.0的盐酸摩尔三酯溶液，并在37摄氏度下孵育一小时，以抑制反应。
在孵化结束时，通过离心清洗珠子，并将珠粒重新悬浮在一毫升盐酸三酯溶液中。再重复洗两次。最后一次洗涤后，将珠子以每毫升浓度一毫克重新悬挂在存储缓冲器中，并将结合的接受珠溶液存放在 4 摄氏度的光线下。
在 PBS 中加入谷胱甘肽捐赠者珠，每毫升浓度为 10 微克。将 GSTFKBP51 添加到每毫升 10 微克的最终浓度中，并在黑暗中在 25 摄氏度下孵育反应 10 分钟。对 DMSO 中的测试化合物进行串行稀释。
在 384 井板的每口井的一角加入 0.25 微升的测试复合稀释剂和三重。对于负控制，在井中加入0.25微升DMSO和正控制，在井中加入0.25微升Hsp90 C-终端肽。在每口油井中加入含有谷胱甘肽供体珠的22.5微升含有GST标记蛋白的溶液。
用手彻底摇动盘子，在25摄氏度的黑暗中孵育15分钟。将附着的 Hsp90C-终端肽稀释接收珠，每毫升浓度为 100 微克，是 PBS 的 0.5 倍。在每口井中加入2.25微升稀释的接受珠。
如前所示，在黑暗中摇动并孵育盘子15分钟。打开板读取器仪器，测量板的信号并分析文本手稿中描述的数据。在欢迎对话中创建 X-Y 数据表，选择 X 数字、Y 并在并排列中输入三个复制值。
将浓度值导入 X 列，将信号值导入 Y 列。单击分析，选择转换浓度 X，然后选择转换为对数。单击 X-Y 分析下的单击分析并选择非线性回归。
打开剂量响应抑制选项，选择日志与响应可变坡度方程。单击"可以"查看包含 IC50 值和图形的结果。此检测用于筛选小分子，抑制 Hsp90 和 FKBP51 或 FKBP52 之间的相互作用。
Z 分数超过 0.8，信号与背景比为 13.35，显示了高吞吐量筛选的稳健性和可靠性。小分子量测试化合物D10对伴奏-协茶酮相互作用的抑制作用进行了评估，并计算了IC50值，其中D10显示剂量依赖抑制。Hsp90 GSTFKBP51 相互作用的 IC50 值为 65 纳米摩尔。
而对于Hsp90，GSTFKBP52相互作用，完全抑制没有达到最高的化合物浓度表明，蛋白质与小分子相互作用的选择性抑制可以实现。关键步骤是添加顺序。我们首先在小分子和TPR目标之间形成一个复合体。
否则需要更长的孵化和更高的复合浓度。我们可以使用这种技术来筛选破坏Hsp90和FKB51或Hsp90和FKB52之间的相互作用的小分子。它也可以扩展到 Hsp90， Hsp70 和包含可可龙筛选选择性抑制剂的 TPR 主题之间的任何相互作用。
