小鼠硬脑膜刺激和眶周冯弗雷测试作为头痛的临床前模型

在没有组织损伤的情况下，脑膜内发生哪些事件导致头痛？与先前在大鼠中使用硬脑膜刺激模型不同，它允许使用转基因小鼠的广泛目录。主要的斗争是通过用注射器触诊颅骨来定位兰氏体和矢状缝合线的交点。

首先，通过修改市售的内部套管和带有熔融石英塑料盖的注入器来创建小鼠注入器，该盖子可调节并插入28号导轨套管中。使用卡钳调整熔融石英塑料盖在注入器上，而无需弯曲注入器。将注入器调整为从注入器尖端到硅塑料盖边缘测量的6毫米长度。

对其他小鼠品系进行先导注射，并调整长度以精确注射硬脑膜。然后，将注入器的长端连接到八英寸或更大的塑料管上，以容纳五微升的体积。插入管子，同时确保完全覆盖金属部分和位于注入器上的塑料塞子的顶部，以防止气泡积聚在管路中。

接下来，填充微量注射器并将管子的另一端连接到10微升玻璃微量注射器上，确保注射器的金属部分紧密密封。然后，用五微升PBS或合成间质液或其他选择的载体回灌注射器，以防止气泡形成。如果需要，用车辆淹没线路以消散预成型气泡。

或者，预先填充注射器，连接后，将流体推过连接的管路。一旦车辆填充的生产线高效工作，将五微升溶液装入汉密尔顿注射器。一旦小鼠完全麻醉，将无菌眼药膏涂抹在眼睛上并剃掉动物的头部，然后用聚维酮碘和乙醇消毒皮肤。

用一只手稳定动物的头部，另一只手用装有药物的注射器握住注入器。然后，使用注入器，仔细探测，定位并验证小鼠颅骨上矢状缝合线和兰氏缝合线的交界处。一旦找到缝合线并且注入器就位，缓慢而轻轻地来回摆动注入器，直到注入器穿过皮肤并下降到连接处，一直到塑料塞子，确保将整个6毫米注入器尖端插入连接处。

然后，慢慢推动注射器的柱塞，将五微升液体排出到硬脑膜中。在测试当天，适应房间后，从相应的腔室中取出一只鼠标和杯子。将杯子保持在水平位置，使体重均匀分布，因为不相等的重量分布可能会改变或阻止动物的反应。

将装有鼠标的杯子放在测试架下方桌子上的吸收垫上。然后，对于眶周冯弗雷测试，将07克冯弗雷丝放在眼睛之间的面部中心，并对细丝施加足够的压力，使冯弗雷头发弯曲成C形。保持细丝接触约三到五秒钟，或直到鼠标使用头部或爪子滑动掉细丝。

要遵循Dixon上下方法，如果鼠标对灯丝有反应，请应用下一个重量较低的细丝，否则，应用重量较高的细丝。该手术用于检查硬膜催乳素对机械诱发的面部超敏反应的影响。该研究的结果表明，雌性ICR小鼠对五微克硬膜催乳素的反应显着降低了面部戒断阈值。

低十倍剂量的5微克催乳素也显示出面部戒断阈值降低，类似于高剂量催乳素。催乳素注射产生自发性疼痛相关行为，通过鬼脸进行评估。硬脑膜5微克催乳素在雌性小鼠中引起显着的鬼脸，并进一步证明了硬膜催乳素在雌性偏头痛样行为中的明确作用 行为测试使用von Frey丝或面部鬼脸来确定刺激在没有损伤的情况下是否引起头痛反应。

该技术现在可用于研究脑膜中基于炎症的机制，而不用担心由颅骨切开术和随后的炎症引起的警告。