这种方法为畏光症提供了临床前行为替代药物,这是偏头痛患者的主要抱怨。这种技术的主要优点是检测是自动的,因此非常方便。此外,通过进行这些测试可以区分轻度厌恶和焦虑。
第一天,打开明暗检测设备。将光强度设置为 27, 000 勒克斯。将深色插入物放入明亮/黑暗的腔室中。
打开跟踪软件并设置新协议。在新协议设置中,将持续时间设置为 30 分钟。在新的分析设置中,按持续时间将数据箱设置为 300 秒。
在新区域设置中,选择预定义区域。选择两个,然后选择水平。检查腔室是否水平分为两个大小相等的区域以进行记录。
在测试之前,将小鼠习惯到测试室一小时,保持房间灯亮,以免干扰小鼠的昼夜节律。确保用于光/暗分析的所有设备都已打开,以使小鼠完全适应测试室环境。选择获取数据,输入鼠标 ID 并启动协议。
将抽屉拉出声音衰减隔间,以进入明亮/黑暗室和黑暗插件。轻轻地将鼠标放在腔室的光照区域,然后将抽屉推入隔间内。确保软件立即检测到鼠标并开始记录活动。
等待录制在 30 分钟后自动停止。将鼠标放回其家庭笼子。使用酒精气味杀菌一次性湿巾清洁腔室和深色插入物,以消除前一只鼠标留下的任何嗅觉线索。
在第四天,重复第一天执行的所有步骤。在第七天,重复第一天执行的步骤,但只能直到小鼠习惯。习惯化后,用CGRP腹膜内施用小鼠。
然后将老鼠放回家笼。30分钟后,恢复实验方案,如前所述,在亮/暗室中运行鼠标。如前所述清洁腔室和深色插入物。
在第 10 天,重复第一天执行的所有步骤。打开设备并将光强度设置为27, 000勒克斯。打开跟踪软件并设置新协议,如前所述。
在新区域设置中,选择一个区域,然后选择一个中心。将外围设置为 3.97 厘米,将中心设置为 19.05 x 19.05 厘米。如前所述,将小鼠习惯到测试室。
用CGRP腹膜内给小鼠施用。将老鼠放回家笼。30 分钟后,启动实验方案。
将拉出式抽屉拉出声音衰减隔间外,轻轻地将鼠标放在开放式腔室的中间。将抽屉推入隔间内。跟踪鼠标的行为30分钟,然后将小鼠送回家笼。
如前所述清洁设备。结果显示,腹膜内注射CGRP显著降低了CD1和C57黑6J小鼠在明暗测定中在光区停留的时间,但对CD1和C57黑6J小鼠在开放场地测定中小鼠在中心停留的时间没有影响。用CGRP治疗也增加了小鼠在黑暗区域休息的时间,但在CD1和C57黑6J小鼠中都没有在光区休息。
与对照注射的病毒小鼠相比,丘脑后核中神经元的光学刺激导致在通道视紫红质-2注射小鼠的明/暗测定中小鼠在浅色区度过的持续时间相应减少。与对照注射病毒的小鼠相比,在通道视紫红质-2注射小鼠的情况下,在黑暗区域而不是在光区中观察到休息时间的增加。重要的是要记住,将鼠标放入明暗室时,应轻轻处理鼠标,以尽可能避免压力。
这项技术将为探索偏头痛和其他畏光相关疾病的机制铺平道路,并测试潜在治疗方法的临床前疗效。