Какие события происходят внутри мозговых оболочек, которые способствуют головной боли при отсутствии повреждения тканей? В отличие от предыдущего использования моделей дуральной стимуляции у крыс, он позволяет использовать обширный каталог генетически модифицированных мышей. Основная борьба будет заключаться в обнаружении пересечения лямбдоидальных и сагиттальных швов путем пальпирования черепа с помощью инжектора.
Для начала создайте мышиные инфузоры, модифицировав коммерчески доступную внутреннюю канюлю и инфузор с плавленым кремнеземным пластиковым колпачком, который регулируется и вставляется в направляющую канюлю 28-го калибра. Используйте суппорт для регулировки расплавленного кремнеземного пластикового колпачка на инфузоре без изгиба инфузора. Отрегулируйте инфузор до длины 6 миллиметров, измеренной от кончика инфузиона до края кварцевого пластикового колпачка.
Выполняйте пилотные инъекции для других штаммов мыши и регулируйте длину для точного введения твердой мозговой оболочки. Затем прикрепите длинный конец инфузора к пластиковой трубке размером восемь дюймов или более, чтобы удерживать объем в пять микролитров. Вставьте трубку, обеспечив при этом полное покрытие металлической части и верхней части пластиковой пробки, расположенной на инфузоре, чтобы предотвратить накопление пузырьков воздуха в линии.
Затем заполните микрошприц и прикрепите другой конец трубки к 10-микролитровому стеклянному микрошприцу, обеспечив плотное уплотнение над металлической частью шприца. Затем засыпьте шприц пятью микролитрами PBS или синтетической интерстициальной жидкости или другими транспортными средствами по выбору, чтобы предотвратить образование пузырьков воздуха. При необходимости затопите линию транспортным средством, чтобы рассеять предварительно сформированные пузырьки.
В качестве альтернативы, предварительно заполните шприц, а после подключения протолкните жидкость через подключенную линию. Как только заполненная транспортным средством линия заработает эффективно, загрузите пять микролитров раствора в шприц Hamilton. Как только мышь будет полностью обезболена, нанесите на глаза стерильную офтальмологическую мазь и побрейте голову животного, затем продезинфицируйте кожу повидон-йодом и этанолом.
Одной рукой уравновешивайте голову животного, а другой держите инфузию шприцем, нагруженным препаратом. Затем, используя инфузию, тщательно прощупайте, найдите и проверьте соединение сагиттального и лямбдоидального швов на черепе мыши. Как только шов будет локализован и инфузия будет на месте, медленно и осторожно пошевелите инфузором вперед и назад, пока инфузор не проткнет кожу и не опустится вниз в соединение вплоть до пластиковой пробки, обеспечивая вставку всего 6-миллиметрового наконечника инфузии в соединение.
Затем медленно нажмите на поршень шприца, чтобы вытеснить пять микролитров жидкости в твердую мозговую оболочку. В день тестирования, после акклиматизации в комнате, извлеките одну мышь вместе с чашкой из соответствующей камеры. Поддерживайте чашку в горизонтальном положении для равномерно распределенной массы тела, так как неравное распределение веса может изменить или предотвратить реакцию животных.
Поместите чашку с мышью на абсорбирующую прокладку, находящуюся на столе под испытательной стойкой. Затем, для периорбитального тестирования фон Фрея, поместите 07-граммовую нить фон Фрея в центр лица между глазами и приложите достаточное давление на нить, чтобы заставить волосы фон Фрея согнуться в С-образное образование. Поддерживайте контакт нити накаливания в течение примерно трех-пяти секунд или до тех пор, пока мышь не смахнет нить с помощью головы или лап.
Чтобы следовать методу Диксона вверх-вниз, примените следующую нить с меньшим весом, если мышь реагирует на нить, в противном случае примените нить с более высоким весом. Процедура была использована для изучения влияния дурального пролактина на механически вызванную гиперчувствительность лица. Результаты исследования продемонстрировали значительное снижение порогов отмены лица у самок мышей ICR в ответ на пять микрограммов дурального пролактина.
Десятикратная более низкая доза пролактина в 5 мкг также показала снижение порогов отмены лица, аналогично высокой дозе пролактина. Инъекции пролактина вызывали спонтанное поведение, связанное с болью, которое оценивалось с помощью гримасы. Dural 5 микрограммов пролактина вызвали значительное гримасничание у самок мышей и дополнительно продемонстрировали четкую роль дюралевого пролактина в женском мигренеподобном поведении Поведенческое тестирование с использованием нитей фон Фрея или лицевой гримасы, чтобы определить, вызывает ли стимул, при отсутствии травмы, реакцию головной боли.
Этот метод теперь может быть использован для исследования воспалительных механизмов в мозговых оболочках, не беспокоясь о предостережениях, которые вызваны трепанациями черепа и последующим воспалением.
