Quels événements se produisent dans les méninges qui contribuent aux maux de tête en l’absence de lésion tissulaire? Contrairement à l’utilisation antérieure de modèles de stimulation durale chez le rat, il permet l’utilisation du vaste catalogue de souris génétiquement modifiées. La principale lutte serait de localiser l’intersection des sutures lambdoïdales et sagittales en palpant le crâne avec l’injecteur.
Pour commencer, créez les infuseurs de souris en modifiant une canule interne et un infuseur disponibles dans le commerce avec un capuchon en plastique de silice fondue réglable et inséré dans une canule guide de calibre 28. Utilisez un étrier pour ajuster le capuchon en plastique de silice fondue sur l’infuseur sans plier l’infuseur. Ajustez l’infuseur à une longueur de 6 millimètres mesurée de la pointe de l’infuseur au bord du capuchon en plastique de silice.
Effectuez des injections pilotes pour d’autres souches de souris et ajustez la longueur pour injecter avec précision dans la dure-mère. Ensuite, fixez l’extrémité longue de l’infuseur à un tube en plastique de huit pouces ou plus pour contenir cinq microlitres de volume. Insérez le tube tout en assurant une couverture complète de la partie métallique et du haut du bouchon en plastique situé sur l’infuseur pour empêcher les bulles d’air de s’accumuler dans la ligne.
Ensuite, remplissez le microsyringe et fixez l’autre extrémité du tube à un microsyringe en verre de 10 microlitres, en assurant une étanchéité étanche sur la partie métallique de la seringue. Ensuite, remplissez la seringue avec cinq microlitres de PBS ou de liquide interstitiel synthétique ou d’autres véhicules de votre choix pour empêcher la formation de bulles d’air. Si nécessaire, inondez la ligne avec le véhicule pour dissiper les bulles préformées.
Alternativement, pré-remplissez la seringue et, après la connexion, poussez le fluide à travers la ligne connectée. Une fois que la ligne remplie de véhicules fonctionne efficacement, chargez cinq microlitres de la solution dans la seringue Hamilton. Une fois la souris complètement anesthésiée, appliquez une pommade ophtalmique stérile sur les yeux et rasez la tête de l’animal, puis désinfectez la peau avec de l’iode povidone et de l’éthanol.
Fixez la tête de l’animal d’une main et tenez l’infuseur avec la seringue chargée de médicament dans l’autre. Ensuite, à l’aide d’un infuseur, sondez, localisez et vérifiez soigneusement la jonction des sutures sagittales et lambdoïdales sur le crâne de la souris. Une fois que la suture est située et que l’infuseur est en place, remuez lentement et doucement l’infuseur d’avant en arrière jusqu’à ce que l’infuseur intérieur perce la peau et tombe dans la jonction jusqu’au bouchon en plastique, assurant l’insertion de toute la pointe de l’infuseur de 6 millimètres dans la jonction.
Ensuite, poussez lentement le piston de la seringue pour expulser les cinq microlitres de liquide dans la dure-mère. Le jour du test, après l’acclimatation à la pièce, retirez une souris avec la tasse de la chambre respective. Maintenez la tasse en position horizontale pour un poids corporel uniformément réparti, car la répartition inégale du poids peut altérer ou empêcher la réponse des animaux.
Placez la tasse avec la souris sur un tampon absorbant conservé sur la table sous le rack de test. Ensuite, pour les tests de von Frey périorbitaires, placez le filament von Frey de 07 grammes au centre du visage entre les yeux et appliquez une pression suffisante sur le filament pour que les cheveux de von Frey se plient en une formation en forme de C. Maintenez le contact avec le filament pendant environ trois à cinq secondes ou jusqu’à ce que la souris balaye le filament à l’aide de la tête ou des pattes.
Pour suivre la méthode Dixon de haut en bas, appliquez le filament suivant de poids inférieur si la souris répond au filament, sinon, appliquez un filament de poids plus élevé. La procédure a été utilisée pour examiner les effets de la prolactine durale sur l’hypersensibilité faciale évoquée mécaniquement. Les résultats de l’étude ont démontré une réduction significative des seuils de retrait facial chez les souris ICR femelles en réponse à cinq microgrammes de prolactine durale.
Une dose dix fois plus faible de 5 microgrammes de prolactine a également montré des seuils de retrait facial réduits, similaires à une dose élevée de prolactine. Les injections de prolactine ont produit des comportements spontanés liés à la douleur, qui ont été évalués par grimace. Dural 5 microgrammes de prolactine a provoqué une grimace significative chez les souris femelles et a en outre démontré un rôle clair de la prolactine durale dans les comportements migraineux féminins Tests comportementaux utilisant des filaments de von Frey ou de la grimace faciale pour déterminer si le stimulus, en l’absence de blessure, provoque une réponse aux maux de tête.
Cette technique peut maintenant être utilisée pour étudier les mécanismes inflammatoires dans les méninges sans se soucier des mises en garde causées par les craniotomies et l’inflammation subséquente.
