胫骨肉瘤细胞注射生成原位骨肉瘤和肺转移小鼠模型

该协议描述了生成具有原发性骨肉瘤和肺转移病变的小鼠模型的技术。通过庭内注射骨肉瘤细胞，该模型最能模拟肿瘤骨肉瘤的临床发展特征。使用微量注射器将准确数量的骨肉瘤细胞直接注射到胫骨中，允许相同的肿瘤形成率和肿瘤体积。

在骨肉瘤细胞注射当天，用PBS清洗细胞两次。胰蛋白酶消化细胞与1.5毫升0.25%胰蛋白酶三分钟。然后加入六毫升含10%血清的MEM培养基。

将细胞收集在15毫升离心管中。将20微升细胞悬浮液吸入细胞计数板的腔室中，并使用自动细胞计数器计算细胞浓度。在室温下以800倍g离心细胞五分钟。

用移液管吸出上清液，将细胞沉淀重悬于每毫升8.5毫克基底膜基质中，并将其置于冰上。将鼠标置于仰卧位。用拇指和食指握住小鼠的脚踝，用70%乙醇棉签消毒胫骨注射部位。

向外旋转每只小鼠的踝关节以移动胫骨和腓骨，并将膝关节弯曲到合适的位置，直到通过皮肤可以看到胫骨近端平台。将针头连接到一毫升注射器上，并将针尖指向与胫骨轴平行的注射部位。经皮插入针头，穿过胫骨平台向胫骨远端钻一个孔。

将先前放置在冰上的骨肉瘤细胞悬浮液加载到微量注射器中，并用骨肉瘤细胞加载的微量注射器替换胫骨中的一毫升注射器。缓慢地将大约10微升的骨肉瘤细胞悬浮液注射到每只无胸腺小鼠的胫骨中，而不施加太大的压力。然后从注射部位取出微量注射器，并用棉签按压该部位约30秒。

将鼠标放回干净的笼子中，观察其恢复10分钟。该图描绘了由胫骨肉瘤细胞注射及其分离形式发展而来的具有原位骨肉瘤的小鼠模型。每周观察到肿瘤体积的逐渐增加。

从注射荧光素酶标记的骨肉瘤细胞后的第一周到第六周获得的X射线图像显示体积逐渐增加。此外，将注射到小鼠胫骨后获得的图像显示原位骨肉瘤在体内生长。使用生物发光实时成像系统在体内成功跟踪由胫骨内注射骨肉瘤细胞引起的肺转移。

在立体显微镜下观察显示分离的肺组织中的转移集落。石蜡包埋肺组织的 HE 染色显示转移性病变。针头应通过髌韧带经皮插入关节囊中，通过旋转注射器通过胫骨平台向胫骨手指钻一个孔。