הזרקת תאי אוסטאוסרקומה אינטראטיביאלית להפקת אוסטאוסרקומה אורתוטופית ומודלים של עכבר גרורות ריאות

פרוטוקול זה מתאר את הטכניקה ליצירת מודלים של עכבר הנושאים אוסטאוסרקומה ראשונית ואת נגעי גרורות ריאתי. על ידי הזרקה intratibial של תאי osteosarcoma, מודל זה מחקה בצורה הטובה ביותר את מאפייני ההתפתחות הקלינית של אוסטאוסרקומה הגידול. מספרים מדויקים של תאי אוסטאוסרקומה מוזרקים ישירות לשוקה באמצעות מזרק מיקרו-וולום, המאפשר שיעורי היווצרות גידולים זהים ונפחי גידולים זהים.

ביום של הזרקת תאי osteosarcoma, לשטוף את התאים פעמיים עם PBS. נסה את התאים עם 1.5 מיליליטר של 0.25% טריפסין במשך שלוש דקות. לאחר מכן הוסיפו שישה מיליליטרים של 10% מדיה המכילה סרום MEM.

לאסוף את התאים בצינור צנטריפוגה 15 מיליליטר. שאפו 20 מיקרוליטרים של השעיית תאים לתוך החדר של צלחת ספירת התאים, וחשבו את ריכוז התא באמצעות מונה תאים אוטומטי. צנטריפוגה התאים ב 800 פעמים g במשך חמש דקות בטמפרטורת החדר.

לשאוף את supernatant עם פיפטה, resuspend גלולה התא במטריצת קרום מרתף 8.5 מיליגרם למיליליטר, ולהניח אותם על קרח. מקם את העכבר בתנוחה הסופית. החזק את הקרסול של העכבר באמצעות האגודל והאצבע המורה, ולחטא את אתר ההזרקה של השוקה עם 70% ספוגית אתנול.

לסובב את מפרק הקרסול של כל עכבר כלפי חוץ כדי להזיז את השוקה ואת השוקית, ולכופף את מפרק הברך למצב מתאים עד רמת השוקה הפרוקסימלי גלוי דרך העור. חבר את המחט למזרק של מיליליטר אחד, וכוון את קצה המחט לכיוון אתר ההזרקה, במקביל לציר השוקה. הכנס את המחט באופן מלעורי כדי לקדוח חור דרך פלטפורמת השוקה לכיוון הקצה הדיסטלי של השוקה.

לטעון את ההשעיה תאי osteosarcoma שהונח בעבר על קרח לתוך מזרק microvolume, ולהחליף את מזרק מיליליטר אחד בשוקה עם מזרק microvolume תא osteosarcoma טעון. לאט להזריק כ 10 מיקרוליטרים של השעיית תא osteosarcoma לתוך השוקה של כל עכבר אתימי מבלי להפעיל לחץ רב. לאחר מכן להסיר את מזרק microvolume מאתר ההזרקה, ולחץ על האתר עם צמר גפן במשך כ 30 שניות.

מניחים את העכבר בחזרה לתוך כלוב נקי, ולראות את ההתאוששות שלה במשך 10 דקות. איור זה מתאר את מודל העכבר עם אוסטאוסרקומה אורתוטופית שפותחה מהזרקת תאי אוסטאוסרקומה תוך-איטיים ואת צורתה המבודדת. עלייה הדרגתית בנפח הגידול נצפתה מדי שבוע.

תמונות הרנטגן שהתקבלו מהשבוע הראשון עד השישי לאחר הזרקת תאי אוסטאוסרקומה המסומנים בלוציפראז הראו עלייה הדרגתית בנפח. יתר על כן, התמונה שהושגה לאחר ההזרקה לתוך שוקת העכבר הראתה צמיחה אוסטאוסרקומה אורתוטופית ב vivo. גרורות הריאות הנגרמות על ידי הזרקה תוך-תאיים של תאי האוסטאוסרקומה אותרודרום אותרומה אותרו בהצלחה ב- vivo באמצעות מערכת הדמיה חיה ביולומינציה.

תצפית תחת סטריאומיקרוסקופ חשפה מושבות גרורתיות ברקמות הריאה המבודדות. הוא מכתים על רקמות ריאה מוטבעות פרפין הראו נגעים גרורתיים. המחט צריכה להיות מוכנסת באופן מלעור לתוך הקפסולה המשותפת דרך הרצועה הברך כדי לקדוח חור דרך פלטפורמת השוקה לכיוון השוקה הדיגיטלית על ידי סיבוב המזרק.