通过将CBir1 TCR转基因CD4 ⁺ T细胞过继转移到免疫缺陷小鼠来诱导肠道炎症

炎症性肠病（IBD）给个人和社会带来了相当大的健康和经济负担。该结肠炎模型有助于研究IBD的机制并评估IBD的治疗方法。这种免疫优势性Cbir鞭毛蛋白T细胞特异性过继性转移结肠炎模型提供了对肠道细菌抗原如何诱导T细胞反应以诱导结肠炎的见解。

对小鼠实施安乐死后，做一个大约一厘米的左腹部切口，并将皮肤从腹部肌肉组织中拉开。然后，在腹部肌肉组织中做一个大约三厘米的切口。接下来，用无菌剪刀和镊子去除脾脏。

将脾脏置于含有五毫升预冷洗涤缓冲液的培养皿中。用两个无菌载玻片的粗糙表面研磨脾脏。通过将细胞悬浮液通过100微米细胞过滤器，将其转移到50毫升离心管中。

用五毫升预冷的洗涤缓冲液冲洗载玻片和培养皿，并将洗涤缓冲液转移到管中。离心细胞悬浮液，丢弃上清液，并在每个脾脏中用五毫升预热的Tris氯化铵裂解缓冲液重悬细胞。在室温下孵育10分钟。

向管中加入10毫升预冷的洗涤缓冲液。然后，离心细胞悬浮液，弃去上清液，并用10毫升预冷的分离缓冲液重悬细胞。要计数细胞，将细胞悬浮液和台盼蓝充分混合10微升，并将10微升加载到载玻片上。

然后，将载玻片插入自动细胞计数器以获得活细胞数。离心剩余的细胞悬浮液并丢弃所有上清液。涡旋抗小鼠CD4磁性颗粒，每1000万个细胞直接加入50微升颗粒，并与细胞沉淀充分混合。

将混合物在4摄氏度下孵育30分钟。将细胞颗粒悬浮液转移到无菌收集管中。将3.5毫升预冷的隔离缓冲液加入管中。

将管子放在室温下的细胞分离磁铁上八分钟。然后，用三毫升转印移液管小心地吸出上清液。从电池分离磁铁中取出管子。

然后，用3.5毫升预冷的分离缓冲液重悬细胞，并将管子在室温下在磁铁上放置四分钟。用3毫升移液管小心地吸出上清液。最后，将细胞重悬于一毫升预冷的FACS缓冲液中。

为了将细胞转移到受体小鼠中，将Cbir1 TCR转基因初生CD4阳性T细胞重悬到1x PBS中每毫升500万个细胞。在加热灯下加热小鼠，并使用小鼠约束器约束小鼠。静脉注射200微升细胞悬浮液到小鼠的尾静脉中。

对小鼠实施安乐死后，做一个约一厘米的腹侧中线皮肤切口。将皮肤从腹部肌肉组织中拉开。然后，在腹部肌肉组织中做一个三厘米的切口。

接下来，识别后部并用无菌剪刀和镊子切除整个结肠。在培养皿中用预冷却的PBS润湿结肠。纵向切开结肠，然后用预冷的PBS冲洗。

纵向切除1/3的结肠。将结肠条放在纸巾中，内腔面朝上。使用牙签进行瑞士滚动。

将结肠瑞士放入盒中，并将盒放入10%缓冲的福尔马林中24小时。脱水和石蜡包埋结肠与自动处理器。然后，在切片机上切割五微米的组织切片。

将组织安装在载玻片上，并进行苏木精和曙红染色。Rag敲除小鼠在细胞转移后三周左右开始减肥，它们的体重在细胞转移后六周达到原始体重的80%至85%左右。受体小鼠在细胞转移后六周显示出较短的结肠长度。

受体小鼠在细胞转移后四周在肠道固有层中表现出更多的细胞浸润。他们在细胞转移后五周显示杯状细胞丢失和肠上皮细胞增生，以及细胞转移后六周结肠粘膜下层的粘膜侵蚀和炎性细胞浸润。组织病理学评分从4周大幅增加至6周。

同时，单独接受PBS的Rag敲除小鼠没有炎症。使用该程序，结肠细胞因子水平可以通过ELISA和qPCR确定。