在几种肾脏疾病小鼠模型中使用聚乙烯亚胺纳米颗粒将外源人工合成的miRNA模拟物递送到肾脏

这种方法可以帮助回答治疗肾脏microRNA的关键问题，这仍然是一个挑战。这种技术的主要优点是，它能够模拟肾脏的microRNA治疗，而不会引起干扰素反应或遗传不稳定。首先将10微升PEI-NPs溶解在1.5毫升微量离心管中的90微升5%葡萄糖溶液中。

然后轻轻涡旋管子并向下旋转。将溶解在100微摩尔无核酸酶水中的50微升人工合成的miRNA与1.5毫升微量离心管中的50微摩尔10%葡萄糖溶液混合。轻轻涡旋管并向下旋转。

该过程产生溶解在5%葡萄糖溶液中的miRNA。然后将100微升PEI-NPs与5%葡萄糖溶液混合，将100微升miRNA模拟物与5%葡萄糖溶液混合。轻轻涡旋管并向下旋转。

将混合物在室温下孵育15分钟，以制备稳定的PEI-NPs miRNA模拟物复合物。将两微升PEI-NPs溶解在1.5毫升微量离心管中的98微升10%葡萄糖溶液中。轻轻涡旋管并向下旋转。

然后将100微升Cy3标记的miRNA模拟物加入10%葡萄糖溶液中的100微升PEI-NPs中，并轻轻涡旋试管。将混合物在室温下孵育15分钟，以制备稳定的PEI-NPs-Cy3标记的miRNA模拟物复合物。将UUO小鼠头先放入50毫升离心管中，无需麻醉，然后将尾巴穿过盖子上准备好的孔。

用30号针头填充1毫升注射器，用200微升PEI-NPs-Cy3标记的miRNA模拟复合物填充复合物，并通过小鼠尾静脉注射复合物。接下来，用手术剪刀和镊子切开皮肤、肌肉和肋骨，露出心脏。在右心房切开后，将PBS注射到左心室，直到肾脏颜色变为淡黄色。

这表明整个鼠标主体都注入了 PBS。收集肾脏后，取出肾囊，并用PBS清洗两次。将肾组织样品嵌入OCT化合物中，并在液氮中冷冻。

使用低温恒温器制备切片并将切片安装到硅烷涂层载玻片上。用4%多聚甲醛固定它们，并用PBS轻轻清洗载玻片两次。最后，通过荧光显微镜在100x和400x放大倍率下以及适当的成像软件可视化荧光染色。

代表性图像显示了PEI-NPs-miRNA模拟复合物的结构。这些图像描述了使用PEI-NPs的miRNA-146a-5p-模拟物在肾纤维化中的递送和作用。荧光显微镜分析表明，尾静脉注射PEI-NPs可将miRNA模拟物递送至肾小管间质间隙。

在UUO产生的肾纤维化小鼠中，这包括肾小管细胞，其在肾脏和肾小球中没有规则形式。qRT-PCR分析显示，注射PEI-NPs-miRNA-146a-5p-模拟物诱导miRNA-146a-5p在肾脏中显著过表达。此处显示了天狼星红色染色的组织学分析。

荧光显微镜分析表明，尾静脉注射PEI-NPs可将miRNA模拟物递送至糖尿病肾模型小鼠体内肾脏的肾小球和肾小管间质间隙。此外，qRT-PCR分析显示，注射PEI-NPs-miRNA-181b-5p-模拟物诱导肾脏中miRNA-181b-5p的显着过表达。高碘酸-希夫染色的组织学分析表明，从10至20周龄每周注射一次PEI-NPs-miRNA-181b-5p-模拟物可抑制小鼠糖尿病肾病的进展。

此处显示了PEI-NPs-miRNA-5100-模拟物在缺血再灌注损伤产生的急性肾损伤模型小鼠中的递送和作用。这些图像描述了荧光显微镜分析qRT-PCR分析的数据，以评估注射PEI-NPs-miRNA-5100-模拟物后miRNA-5100的过表达效应，以及苏木精-伊红染色肾脏的组织学分析。在缺血再灌注损伤（IRI）手术前两天通过尾静脉注射PEI-NPs可防止IRI诱导的急性肾损伤进展。

执行此技术时，准备五微米厚的切片，其中包括尽可能多的肾组织。您还可以准备七微米厚的切片。