这些方法可以帮助研究狼疮患者肾脏相关慢性炎症的进展。我们提供可靠且具有成本效益的替代方案，可用于监测狼疮的病程。通过喷洒 70% 乙醇开始对罩子进行消毒，并在表面上放置无菌塑料片。
然后准备吸头，1.5毫升管和移液管以收集约20微升尿液。取笼子并喷洒 70% 乙醇，然后将其放入引擎盖内。然后，用一只手握住鼠标，用另一只手从上到下轻轻按摩腹侧区域。
使用1.5毫升管或移液管，直接收集尿液。或者，如果样品滴从塑料片上收集它。然后将鼠标放回笼子里。
将解剖的肾脏切成颗粒大小，在含有胶原蛋白酶和 DNase 1 的 5 毫升消化缓冲液中在含有 HEPES 的 RPMI 1640 培养基中消化一小时，在 37 摄氏度下连续轻轻摇动。加入含有10毫摩尔EDTA的10毫升冰冷PBS，在冰上孵育10分钟。然后涡旋悬浮液两次。
之后，通过100微米过滤器过滤细胞悬液，并用10毫升HBSS满水洗涤。之后，在室温下以350倍G离心10分钟。准备30%、37%和70%储备等渗Percoll溶液，并在70%溶液上添加一层37%Percoll溶液。
将细胞重新悬浮在五毫升30%储备等渗Percoll中。使用巴斯德移液器缓慢加载顶部 37% 的 5 毫升和底部 70% 的 5 毫升，使库存等渗 Percoll 梯度。然后，在室温下以1000倍G离心9号和下零号离心30分钟。
之后，从37%至70%界面收集白细胞，并将它们重新悬浮在5毫升C 10中。再次，在 350 倍 G 下在 4 摄氏度下离心 10 分钟。随后将细胞沉淀重新悬浮在三毫升传真缓冲液中，并在 350 倍 G 下在 4 摄氏度下离心五分钟。
然后弃去上清液，留下约50微升的总体积。每管加入 50 微升 FC 受体阻滞剂。按照这种混合物，在黑暗中在冰上孵育10分钟。
之后，加入两毫升传真缓冲液进行洗涤。然后，在 350 倍 G 下在 4 摄氏度下离心五分钟，丢弃上清液，留下约 50 微升的总体积。接下来，加入20微升适当的荧光染料，让它在冰上静置15至30分钟。
每管加入 50 微升抗体混合物，含有 CD 138 亮紫七 11 和 CD 45 Alexa Fluor 700，并在黑暗中的冰上孵育 15 至 30 分钟。然后，加入三毫升传真缓冲液。在 350 倍 G 下在 4 摄氏度下离心五分钟。
通过真空除去上清液，留下约50微升的总体积。之后，将细胞沉淀重新悬浮在200微升PBS中。为了收集样品，将半个肾嵌入具有最佳切割温度化合物的小塑料冷冻机中。
然后将干冰加入聚苯乙烯泡沫盒中，并小心地将冷冻机放在干冰上。接下来，取出冷冻模具，用铝箔包裹并储存在零下 80 摄氏度直至进一步使用。然后用冷丙酮将干燥的四微米部分固定 10 分钟。
固定载玻片后，风干0.5至1小时，并在零下20摄氏度短时间或零下80摄氏度长时间存放。要染色样品，请将载玻片重新固定在冷丙酮中 5 到 10 分钟，并让切片加热至室温。然后，使用轻拍笔，在该部分周围画一个疏水圆圈并使其干燥。
然后将载玻片放入谷轮罐中的TBS中20分钟，然后将罐子放在摇床上轻轻摇晃。随后，倒出TBS，并用TBS 5%BSA和0.1%TW 20填充罐子。之后，通过在摇床上轻轻摇晃将罐子孵育 20 分钟。
然后，取出载玻片并擦拭载玻片的底部。向切片中加入100微升偶联抗体C3适合C和IgG2 APE，并在加湿室中室温孵育一小时。在摇床上用PBS 5%BSA和0.1%TW 20清洗切片3次10分钟，然后摇干载玻片。
用防褪色试剂安装切片，然后用盖玻片安装。然后将载玻片存放在四摄氏度，直到在显微镜下观察。对于使用图像J软件进行图像分析，请勾勒出所需区域。
之后，通过单击“分析”设置标准参数，然后设置测量和测量区域以获得结果。接下来，将从度量窗口获取的数据传输到电子表格。完成后，单击“分析”以测量区域并将数据再次传输到上一个电子表格。
随着时间的推移检测MRL LPR小鼠尿液中的蛋白质水平，其中用磷酸盐缓冲盐水作为对照组和罗伊氏乳杆菌作为治疗组进行处理。用罗伊氏乳杆菌治疗的小鼠组比对照组更积极地进行蛋白尿进展。对分离的肾白细胞进行传真分析以分析浆细胞。
此外，用万古霉素或万古霉素以及大肠杆菌双链DNA处理小鼠。尽管预计大肠杆菌双链DNA会触发肾脏浸润，但浆细胞的百分比没有发现显着差异。补体C3和IgG2a通过女性MRL IPR肾脏切片的免疫荧光染色进行检测。
比较了动物设施中内部小鼠面包和从供应商处购买的小鼠面包对肾脏沉积C3和IgG2a的有效环境因素。免疫组织化学分析未显示两组之间有任何差异。添加每层百分比库存ISO 20 Percoll溶液可能具有挑战性，如果它们混合，则必须重新开始。
该程序有助于流式细胞仪和玻璃体实验，因此您无法研究不同的肾细胞类型群体。这个过程使我们能够研究肾脏中浸润的B细胞，文献中没有很多信息。
