连接端口以与带有管道的注射器配合至关重要,因为如果操作正确,则不会泄漏,流通池中没有气泡,并且可以重复使用同一流通池在一年内反复进行实验。在这里,将介绍两种简单的方法来将连接器连接到流通池。这些都很简单,它们是可重复的,并且允许研究人员轻松地使流通池适应他们的需求,而不会有太多麻烦。
这些流通池的使用是在考虑单分子实验的情况下完成的。特别是,我们称之为视觉生物化学,但它们可用于任何需要微流体的研究以及使用叶片流体流动的情况。因此,为了避免错误,我建议先在载玻片或盖玻片上练习,而不是使用有价值的流通池来建立技术。
这将使人们能够感受到玻璃或PDMS材料,知道如何处理它们以及在插入管道或粘合连接器时施加多大的力。这将需要牺牲一些连接器,但它们比流通池便宜得多。首先将流通池放在干净的平坦表面上。
用镊子将PTFE管从自由端握住三毫米,然后将管子推入端口。对其余每个端口重复此过程。将入口端口连接到注射泵,将出口连接到废液瓶。
用一毫升分光光度法填充每个玻璃注射器,分级甲醇并将它们连接到切换阀上。确保阀门的出口指向废物,并用 50 微升甲醇吹扫每条管路。将出口位置切换到流通池,以每小时100微升的流速将800微升甲醇泵入流通池,以润湿表面并消除气泡。
第二天,使用800微升超纯水重复此过程。流通池现已准备就绪,可供使用。如果要使用压接管接头,请小心地从接头的一侧取下胶带,并将其放在显微镜载玻片的孔上。
按下几秒钟。对其余连接器重复此过程。然后将流通池放在干净的平坦表面上。
将 PTFE 管从自由端握住 3 毫米,然后将管子推入端口上的孔中。对其余每个端口重复此过程。将管道从入口连接到切换阀。
将附件放在干净、平坦的表面上或定制的歧管上,以便在粘合时将流通池和连接器固定到位。将流通池放在歧管的凹陷部分,然后在组件底部放置少量玻璃胶并插入密封件。将纳米端口定位在显微镜载玻片上的一个入口孔上。
轻轻向下推并保持到位,不要横向移动。对其余端口重复此过程。在歧管中干燥或夹紧到位。
轻轻地从歧管中取出流通池,并确保组件与流通池中的入口端口正确对齐。将流通池放在显微镜载物台上,并使用手指紧固的连接器连接管道。用一毫升分光光度级甲醇填充每个玻璃注射器。
将每个注射器连接到切换阀。确保阀门的出口指向废物,并用 50 微升甲醇吹扫每条管路。将出口位置切换到流通池,并以每小时 100 微升的流速泵送 800 微升甲醇通过流通池。
第二天,使用800微升超纯水重复此过程。此处显示了功率输出的测量值。在将激光头安装到光学布局之前测量激光器的功率输出。
陷阱对准完成后,在每个陷阱的100 x物镜之后测量光束功率。这些图像展示了一个微米荧光珠的稳定光学捕获。这里F是固定的陷阱,M是移动的陷阱。
移动陷阱在扫描模式下以 30 赫兹的速度穿过一个小圆圈或大圆圈。流通池内的流体流动是层流的。示意图从顶部显示了流通池,以证明通道间扩散是相邻流体流之间混合的主要来源。
蓝色箭头表示流向,各个流为彩色、白色、浅灰色和白色。通道之间横向扩散的加宽区域以红色表示。插图显示了相邻流体流的荧光图像,放大倍数为10倍,荧光标记的DNA珠复合物在下游,仅在上游流中缓冲液。
上游的白点是CCD相机的散粒噪声。流动曲线和层流池是抛物线状的。从侧面观察流通池,并在每个流通池上方指示流动方向。
线珠速度受泵速和蔗糖浓度的影响。磁珠上的反作用力受溶液粘度的影响。磁珠直径会影响珠子在流动下的力。
尝试此过程时,请确保您正在工作的区域是干净的,并且您已使用光谱级甲醇或丙酮清洁玻璃表面。在这个阶段,您应该有一个流通池,它被制作到您的注射泵上,您现在准备介绍您的解决方案并开始光学镊子实验。流通池的使用可以长时间使用,使研究人员能够研究各种单分子反应,其中测量任一力,通过荧光或两者的组合可视化反应。