使用双光镊和微流体进行单分子研究

连接端口以与带有管道的注射器配合至关重要，因为如果操作正确，则不会泄漏，流通池中没有气泡，并且可以重复使用同一流通池在一年内反复进行实验。在这里，将介绍两种简单的方法来将连接器连接到流通池。这些都很简单，它们是可重复的，并且允许研究人员轻松地使流通池适应他们的需求，而不会有太多麻烦。

这些流通池的使用是在考虑单分子实验的情况下完成的。特别是，我们称之为视觉生物化学，但它们可用于任何需要微流体的研究以及使用叶片流体流动的情况。因此，为了避免错误，我建议先在载玻片或盖玻片上练习，而不是使用有价值的流通池来建立技术。

这将使人们能够感受到玻璃或PDMS材料，知道如何处理它们以及在插入管道或粘合连接器时施加多大的力。这将需要牺牲一些连接器，但它们比流通池便宜得多。首先将流通池放在干净的平坦表面上。

用镊子将PTFE管从自由端握住三毫米，然后将管子推入端口。对其余每个端口重复此过程。将入口端口连接到注射泵，将出口连接到废液瓶。

用一毫升分光光度法填充每个玻璃注射器，分级甲醇并将它们连接到切换阀上。确保阀门的出口指向废物，并用 50 微升甲醇吹扫每条管路。将出口位置切换到流通池，以每小时100微升的流速将800微升甲醇泵入流通池，以润湿表面并消除气泡。

第二天，使用800微升超纯水重复此过程。流通池现已准备就绪，可供使用。如果要使用压接管接头，请小心地从接头的一侧取下胶带，并将其放在显微镜载玻片的孔上。

按下几秒钟。对其余连接器重复此过程。然后将流通池放在干净的平坦表面上。

将 PTFE 管从自由端握住 3 毫米，然后将管子推入端口上的孔中。对其余每个端口重复此过程。将管道从入口连接到切换阀。

将附件放在干净、平坦的表面上或定制的歧管上，以便在粘合时将流通池和连接器固定到位。将流通池放在歧管的凹陷部分，然后在组件底部放置少量玻璃胶并插入密封件。将纳米端口定位在显微镜载玻片上的一个入口孔上。

轻轻向下推并保持到位，不要横向移动。对其余端口重复此过程。在歧管中干燥或夹紧到位。

轻轻地从歧管中取出流通池，并确保组件与流通池中的入口端口正确对齐。将流通池放在显微镜载物台上，并使用手指紧固的连接器连接管道。用一毫升分光光度级甲醇填充每个玻璃注射器。

将每个注射器连接到切换阀。确保阀门的出口指向废物，并用 50 微升甲醇吹扫每条管路。将出口位置切换到流通池，并以每小时 100 微升的流速泵送 800 微升甲醇通过流通池。

第二天，使用800微升超纯水重复此过程。此处显示了功率输出的测量值。在将激光头安装到光学布局之前测量激光器的功率输出。

陷阱对准完成后，在每个陷阱的100 x物镜之后测量光束功率。这些图像展示了一个微米荧光珠的稳定光学捕获。这里F是固定的陷阱，M是移动的陷阱。

移动陷阱在扫描模式下以 30 赫兹的速度穿过一个小圆圈或大圆圈。流通池内的流体流动是层流的。示意图从顶部显示了流通池，以证明通道间扩散是相邻流体流之间混合的主要来源。

蓝色箭头表示流向，各个流为彩色、白色、浅灰色和白色。通道之间横向扩散的加宽区域以红色表示。插图显示了相邻流体流的荧光图像，放大倍数为10倍，荧光标记的DNA珠复合物在下游，仅在上游流中缓冲液。

上游的白点是CCD相机的散粒噪声。流动曲线和层流池是抛物线状的。从侧面观察流通池，并在每个流通池上方指示流动方向。

线珠速度受泵速和蔗糖浓度的影响。磁珠上的反作用力受溶液粘度的影响。磁珠直径会影响珠子在流动下的力。

尝试此过程时，请确保您正在工作的区域是干净的，并且您已使用光谱级甲醇或丙酮清洁玻璃表面。在这个阶段，您应该有一个流通池，它被制作到您的注射泵上，您现在准备介绍您的解决方案并开始光学镊子实验。流通池的使用可以长时间使用，使研究人员能够研究各种单分子反应，其中测量任一力，通过荧光或两者的组合可视化反应。