小鼠患者来源的癌细胞原位植入概括了晚期结直肠癌

该方案描述了在免疫缺陷小鼠盲肠壁中将患者来源的癌细胞原位植入。该模型概括了晚期结直肠癌转移性疾病。这里介绍的原位结直肠癌模型概括了结直肠癌患者晚期肠道肿瘤和转移性疾病的临床情况，这些情况无法使用患者来源的类器官或患者来源的异种移植模型进行研究。

从安乐死的小鼠中，使用剪刀和镊子小心地将其从皮肤和周围的非肿瘤组织中取出肿瘤。将收获的肿瘤置于PBS中，温度为4摄氏度。使用刀片，在含有1毫米培养基的10厘米培养板中解离肿瘤。

将均匀的解离样品放入 15 毫升锥形管中。然后，将培养基加入到最终体积为 5 毫升。然后，将消化培养基添加到试管中。

将试管置于细胞培养箱内的 45 度位置，在 37 摄氏度下放置一小时。在一小时的孵育期间，每 15 分钟用 5 毫升移液管混合一次溶液。孵育后，加入 5 毫升培养基并充分混合。

然后，使用无菌 100 毫升管用 50 微米细胞过滤器对溶液进行分选。在室温下以 500g 离心分选的细胞 10 分钟。吸出上清液并将沉淀重悬于三毫升1x RBC裂解缓冲液中。

在室温下孵育 10 分钟。然后，加入三毫升培养基并混合样品。在室温下以 500g 离心 10 分钟并吸出上清液。

用 5 至 10 毫升培养基重悬沉淀，并使用细胞计数器计算细胞总数。在室温下以 500g 离心细胞 10 分钟后，重悬于 10 毫升 PBS 中。重复离心并用10毫升PBS洗涤。

重悬沉淀以获得每毫升 6 个细胞的 20 乘以 10 至 6 个细胞的浓度，并充分混合以获得均匀的细胞悬液。接下来，准备一个29g注射器进行盲肠注射。将 50 微升肿瘤细胞悬液装入注射器中，并确保注射器中没有气泡残留。

将注射器放在冰上。首先，通过喷洒消毒清洁剂并擦拭对手术部位进行消毒。然后，使用鼠标脱毛机对腹部进行脱毛。

将鼠标置于仰卧位，并用洗必泰或聚维酮碘擦洗腹部。使用手术剪刀在下腹部做一个一厘米的纵向切口。小心地将皮肤分开到两侧，露出腹膜。

然后，在腹膜上做一个 0.5 到 1 厘米的切口，足以使盲肠外化。使用预先切割的无菌纱布，小心地将盲肠与小鼠隔离。在整个手术过程中用生理盐水润湿盲肠。

用镊子小心地握住盲肠，固定盲肠，然后将针头浅浅地引入盲肠壁。慢慢地，注射整个50微升体积的肿瘤细胞悬液。此过程大约需要 10 秒。

注射后，慢慢将针头从盲肠中取出，并用棉尖涂抹器轻轻按压注射部位。用生理盐水清洁盲肠以去除任何碎屑，并将盲肠放回动物的腹部。使用 5/0 缝合线闭合腹膜，然后使用 5/0 缝合线闭合腹部皮肤。

在植入患者来源的癌细胞的小鼠肠道中观察到原位 CRC-PDX 肿瘤。通过苏木精和盲肠上的伊红染色进行组织学分析显示存在肿瘤细胞。组织学分析还显示植入小鼠存在肺转移和肝转移。

携带原位肿瘤的小鼠用载体、测试药物或化疗药物伊立替康治疗。显微CT扫描图像分析表明，与载体相比，试验药物诱导肿瘤体积减少，与伊立替康治疗联合治疗进一步减少。该模型将有助于研究结直肠癌肿瘤转移的生物学。