兔子缺血和再灌注损伤模型

该协议提供了一种简单，可靠且可重复的方法，用于在兔模型中诱导原位急性区域心肌缺血和再灌注损伤，用于非生存和生存实验。该技术通过两种不同的手术方法具有最低的死亡率和发病率。该方法具有成本效益且技术要求低，因此无需手术专业知识即可由研究人员执行。

通过微型开胸手术暴露 LAD 可能具有挑战性。我们建议在胸骨旁前方做第四个肋间间隙，向外侧延伸 5 到 6 厘米，并事先进行此类暴露和兔尸检。要进行左侧迷你开胸手术以进行生存研究，请使用枕头将麻醉兔的左侧抬高约 30 度。

用毡尖标记笔触诊并勾勒出骨质地标。使用 10 号刀片，切开覆盖在第五根肋骨上的皮肤，从胸骨外侧缘附近延伸到横向 5 到 6 厘米。使用电烙术，将胸大肌内侧分开，然后将前锯肌外侧分开。

然后将肋间肌肉分开到第五肋骨上方，以保护神经血管束。使用锋利的解剖，用 Metzenbaum 剪刀切开顶层胸膜，小心地通过第四肋间隙进入胸膜腔，并在平行于肋骨的两个方向上延伸初始胸膜切口，直到可以插入肋骨扩张器或胸骨牵开器。在肋骨间隙内放置肋骨扩张器或胸骨牵开器，并将其加宽以观察心脏和心包囊。

使用 DeBakey 镊子抬起心包。用 Metzenbaum 剪刀将其打开，然后进行 LAD 动脉隔离。这将提供心脏前外侧表面的最佳可视化，并充分暴露于 LAD 及其分支。

为了隔离 LAD 动脉，用锥形针上的 3-0 聚丙烯缝合线包围其第三对角线分支，然后取出针头。在生存情况下，修剪用于隔离 LAD 的三根 3-0 聚丙烯线，并将末端松散地绑在一起。三根 3-0 聚丙烯线用于在采集心脏时识别有风险的区域和梗塞区域。

手术后，在肋骨周围绑上两针 2-0 Polyglactin 910 八字形缝线。用 3-0 聚二恶烷酮缝合线以跑步方式闭合肌肉层和皮下层。然后使用 5-0 单丝缝合线以皮下方式闭合皮肤。

最后，进行穿刺胸腔穿刺术以清除胸膜错误。对于非生存期研究，立即使用弯曲的妙佑医疗剪刀进行中线胸骨切开术。使用胸骨牵开器观察心脏和心包囊，如前所述打开心包。

可视化在先前进行的开胸手术部分放置的 3-0 聚丙烯螺纹环。为了隔离 LAD 动脉，用锥形针上的 3-0 聚丙烯缝合线包围其第三对角线分支。然后取出针，将聚丙烯长丝的两端穿过一个小乙烯基管，形成一个圈套。

使用 DeBakey 镊子，在两根聚丙烯长丝之间放置一个矩形 PTFE 基料，将其夹在隔离的 LAD 动脉和乙烯基管之间。通过按下乙烯基管并向上拉聚丙烯缝合线丝以阻塞冠状动脉来收紧此圈套。夹 clamp 使用蚊子夹子保持所需的密封性。

通过观察心外膜的局部发绀来确认心肌缺血。在缺血诱导 30 分钟后取下圈套器。在实验结束时，收获心脏进行生化和组织分析。

在缺血前期、缺血期间和再灌注期间记录的心电图显示心动过速、心律失常、传导系统缺陷、梗死相关 Q 波的发展和 ST 段偏差。二维回波读数显示，与缺血前相比，缺血期间和缺血后缩短分数减少。诱发局部心肌缺血 30 分钟后，观察到心肌坏死的证据。

最关键的方案步骤是在不损伤动脉或引起静脉出血的情况下小心地包围 LAD，适当放置 PTFE 承诺以防止血管痉挛，并包括 LAD 以创建一个一致的风险区域。该方法可用于血管损伤、慢性心肌缺血和急性心肌眩晕模型，以揭示心血管分子力学、病理生理机制和治疗靶点，证明可用性并开发诊断和治疗算法。