Questo protocollo fornisce una metodologia semplice, affidabile e riproducibile per indurre in situ l'ischemia miocardica regionale acuta e il danno da riperfusione in un modello di coniglio per esperimenti di non sopravvivenza e sopravvivenza. Questa tecnica ha una mortalità e una morbilità minime grazie a due diversi approcci chirurgici. La metodologia è conveniente e ha una bassa richiesta tecnica e quindi può essere eseguita da ricercatori senza esperienza chirurgica.
Esporre il LAD attraverso una mini-toracotomia può essere difficile. Si consiglia di eseguire una quarta incisione parasternale anteriore dello spazio intercostale che si estende da cinque a sei centimetri lateralmente e di praticare tale esposizione e necroscopia del coniglio prima. Per eseguire una mini-toracotomia sinistra per gli studi di sopravvivenza, sollevare il lato sinistro del coniglio anestetizzato di circa 30 gradi utilizzando un cuscino.
Palpa e delinea i punti di riferimento ossei con un pennarello. Utilizzando una lama numero 10, incidere la pelle sovrastante la quinta costola, che si estende da adiacente al bordo laterale dello sterno a cinque-sei centimetri lateralmente. Utilizzando l'elettrocauterizzazione, dividere il muscolo grande pettorale medialmente, seguito lateralmente dal muscolo dentato anteriore.
Quindi dividere i muscoli intercostali sopra la quinta costola per preservare il fascio neurovascolare. Utilizzando una dissezione netta, incidere la pleura parietale con le forbici Metzenbaum, entrare con cautela nello spazio pleurico attraverso il quarto spazio intercostale ed estendere l'incisione pleurica iniziale in entrambe le direzioni parallele alla costola fino a quando non è possibile inserire un divaricatore per costole o un divaricatore sternale. Posizionare un divaricatore delle costole o un divaricatore sternale all'interno dello spazio delle costole e allargarlo per visualizzare il cuore e il sacco pericardico.
Usa la pinza DeBakey per sollevare il pericardio. Aprirlo con le forbici Metzenbaum e procedere con l'isolamento dell'arteria LAD. Ciò fornirà una visualizzazione ottimale della superficie anterolaterale del cuore con un'adeguata esposizione al LAD e ai suoi rami.
Per isolare l'arteria LAD, circondare il suo terzo ramo diagonale con una sutura in polipropilene 3-0 su un ago conico, quindi rimuovere l'ago. Nei casi di sopravvivenza, tagliare i tre fili di polipropilene 3-0 utilizzati per isolare il LAD e legare insieme le estremità senza stringere. I tre fili in polipropilene 3-0 vengono utilizzati per identificare l'area a rischio e la zona dell'infarto al momento del prelievo del cuore.
Dopo l'intervento, legare due punti di sutura 2-0 Polyglactin 910 a forma di otto intorno alle costole. Chiudere gli strati muscolari e sottocutanei con una sutura in polidiossanone 3-0 in modo continuo. Quindi chiudere la pelle in modo sottocuticolare utilizzando una sutura monofilamento 5-0.
Infine, eseguire una toracentesi con ago per evacuare l'errore pleurico. Per gli studi di non sopravvivenza, procedere immediatamente con la sternotomia della linea mediana utilizzando forbici Mayo curve. Utilizzando un divaricatore sternale per visualizzare il cuore e il sacco pericardico, aprire il pericardio come dimostrato in precedenza.
Visualizza l'anello del filo in polipropilene 3-0 posizionato durante la parte di toracotomia della procedura eseguita in precedenza. Per isolare l'arteria LAD, circondare il suo terzo ramo diagonale con una sutura in polipropilene 3-0 su un ago conico. Quindi rimuovere l'ago e infilare entrambe le estremità del filamento di polipropilene attraverso un piccolo tubo di vinile per formare un laccio.
Utilizzando una pinza DeBakey, posizionare un pegno rettangolare in PTFE tra i due filamenti di polipropilene, inserendolo tra l'arteria LAD isolata e il tubo in vinile. Stringere questa trappola premendo sul tubo in vinile e tirando verso l'alto i filamenti di sutura in polipropilene per occludere l'arteria coronale. Clamp il tubo utilizzando una fascetta per zanzare per mantenere la tenuta desiderata.
Confermare l'ischemia miocardica osservando la cianosi regionale dell'epicardio. Rimuovere il laccio dopo 30 minuti di induzione dell'ischemia. Alla fine dell'esperimento, prelevare il cuore per l'analisi biochimica e tissutale.
Gli ECG registrati alla pre-ischemia, durante l'ischemia e la riperfusione hanno dimostrato tachicardia, aritmie, difetti del sistema di conduzione, lo sviluppo di onde Q correlate all'infarto e deviazione del segmento ST. Le letture dell'eco 2D hanno mostrato che l'accorciamento frazionario è diminuito durante l'ischemia e la post-ischemia rispetto alla pre-ischemia. Dopo 30 minuti di ischemia miocardica regionale indotta, è stata osservata evidenza di necrosi miocardica.
Le fasi più critiche del protocollo sono circondare attentamente il LAD senza danneggiare l'arteria o causare sanguinamento venoso, posizionare in modo appropriato il PTFE impegnato a prevenire il vasospasmo e includere il LAD per creare un'area coerente a rischio. Questa metodologia è utile nei modelli di danno vascolare, ischemia miocardica cronica e stordimento miocardico acuto per svelare la meccanica molecolare cardiovascolare, i meccanismi fisiopatologici e i bersagli terapeutici, dimostrando l'usabilità e sviluppando algoritmi diagnostici e terapeutici.
