Этот протокол предоставляет простую, надежную и воспроизводимую методологию индуцирования in situ острой регионарной ишемии миокарда и реперфузионного повреждения на кроличьей модели для экспериментов без выживания и выживания. Этот метод имеет минимальную смертность и заболеваемость благодаря двум различным хирургическим подходам. Методика является экономически эффективной и имеет низкую техническую потребность и, таким образом, может быть выполнена исследователями без хирургического опыта.
Обнажение LAD с помощью мини-торакотомии может быть сложной задачей. Мы рекомендуем сделать четвертый передний парастернальный разрез межреберного пространства, простирающийся на пять-шесть сантиметров латерально, и предварительно отработать такое воздействие и вскрытие кролика. Чтобы выполнить левую мини-торакотомию для исследования выживаемости, приподнимите левую сторону кролика под наркозом примерно на 30 градусов с помощью подушки.
Прощупайте и обведите костные ориентиры фломастером. Лезвием под номером 10 надрезают кожу, лежащую над пятым ребром, простирающуюся от прилегающей к боковой границе грудины до пяти-шести сантиметров латерально. С помощью электрокоагуляции разделите большую грудную мышцу медиально, а затем переднюю зубчатую мышцу латерально.
Затем разделите межреберные мышцы выше пятого ребра, чтобы сохранить сосудисто-нервный пучок. Используя острое рассечение, надрежьте теменную плевру ножницами Метценбаума, осторожно введите в плевральную полость через четвертое межреберье и расширьте начальный плевральный разрез в обоих направлениях параллельно ребру до тех пор, пока не будет введен расширитель ребер или стернальный ретрактор. Поместите разбрасыватель ребер или стернальный ретрактор в реберное пространство и расширите его, чтобы визуализировать сердце и перикардиальный мешок.
Используйте щипцы Дебейки, чтобы приподнять перикард. Откройте его ножницами Метценбаума и приступайте к изоляции артерии LAD. Это обеспечит оптимальную визуализацию переднебоковой поверхности сердца при адекватном воздействии на LAD и его ветви.
Чтобы изолировать артерию LAD, обведите ее третью диагональную ветвь полипропиленовым швом 3-0 на конической игле, затем извлеките иглу. В случае выживания обрежьте три полипропиленовые нити 3-0, используемые для изоляции LAD, и неплотно свяжите концы вместе. Три полипропиленовые нити 3-0 используются для определения зоны риска и зоны инфаркта при заборе сердца.
После операции завяжите два шва 2-0 Polyglactin 910 в форме восьмерки вокруг ребер. Закройте мышечный и подкожный слои полидиоксаноновым швом 3-0 на ходу. Затем закройте кожу подкожно с помощью монофиламентного шва 5-0.
Наконец, выполните игольчатый торакоцентез, чтобы удалить плевральную ошибку. Для исследований, не связанных с выживаемостью, немедленно приступайте к срединной стернотомии с использованием изогнутых ножниц Майо. Используя стернальный ретрактор для визуализации сердца и перикардиального мешка, откройте перикард, как показано ранее.
Визуализируйте петлю из полипропиленовой нити 3-0, установленную во время ранее выполненной части процедуры торакотомии. Чтобы изолировать артерию LAD, обведите ее третью диагональную ветвь полипропиленовым швом 3-0 на конической игле. Затем извлеките иглу и проденьте оба конца полипропиленовой нити через небольшую виниловую трубку, чтобы образовалась петля.
С помощью щипцов Дебейки поместите прямоугольный фторопластовый слой между двумя полипропиленовыми нитями, поместив его между изолированной артерией LAD и виниловой трубкой. Затяните эту петлю, надавливая на виниловую трубку и натягивая полипропиленовые шовные нити, чтобы окклюзировать корональную артерию. Зажмите трубку с помощью зажима от комаров, чтобы сохранить желаемую герметичность.
Подтверждают ишемию миокарда, наблюдая регионарный цианоз эпикарда. Снять петлю через 30 минут после индукции ишемии. В конце эксперимента соберите сердце для биохимического и тканевого анализа.
На зарегистрированных ЭКГ в предишемию, во время ишемии и реперфузии выявлены тахикардия, аритмии, дефекты проводимой системы, развитие инфаркт-ассоциированных зубцов Q, девиация сегмента ST. Показания 2D-эхо показали, что фракционное укорочение уменьшилось во время ишемии и постишемии по сравнению с предишемией. Через 30 минут индуцированной регионарной ишемии миокарда наблюдались признаки некроза миокарда.
Наиболее важными этапами протокола являются тщательное окружение LAD, не повреждая артерию и не вызывая венозного кровотечения, надлежащее размещение ПТФЭ для предотвращения спазма сосудов и включение LAD для создания постоянной зоны риска. Эта методология полезна при сосудистых повреждениях, хронической ишемии миокарда и моделях острого оглушения миокарда для выявления сердечно-сосудистой молекулярной механики, патофизиологических механизмов и терапевтических мишеней, демонстрируя удобство использования и разрабатывая алгоритмы диагностики и лечения.
