脊髓中心综合征的动物模型随后可能有益于临床前研究。本研究中的策略是有利的,因为它能够通过产生一致的结果来研究损伤机制。目前模拟小鼠中枢脊髓综合征的方案提高了可重复性,并最大限度地减少了对实验动物的操作损害。
避免破坏其解剖结构。首先组织手术器械和脊髓损伤同轴平台。一旦小鼠被正确麻醉,识别沿着动物脖子后面的中线的小突起,这是第二胸椎或T2的棘突。剃掉脖子后面 T2 棘突周围的毛发,并用三轮交替的 Iota 4 溶液和 75% 乙醇对皮肤进行消毒。
然后,将鼠标置于手术台上的俯卧位。涂抹眼药膏以保护眼睛。在动物胸部下方放置一个 3 到 4 毫米厚的垫子,以促进颈椎曲线的拱形,从而在手术过程中暴露层间空间和畅通无阻的空气通道。
接下来,在显微镜下工作时,用手术刀以 T2 棘突为中心做一个 1 至 1.5 厘米的纵向切口,并暴露筋膜层。在微型剪刀的帮助下,去除 T2 上方的部分脂肪组织,以清楚地暴露 T2 棘突。使用微型剪刀,沿中线将双侧斜方肌和菱形肌从 C5 分离到 T2。
然后,将 C5 椎板上的肌肉分离到 T2 椎骨,并使用微型牵开器将肌肉层缩回两侧。切开椎骨表面存在的多裂肌和颈椎肌肉。通过识别棘突的最高点来定位 T2 椎骨。
然后,继续从T2开始连续探测棘突,向喙端移动,直到找到第六颈椎或C6。使用镊子,在切断椎板之前,提起 C6 椎板以露出脊髓。用椎体稳定器夹住 C6 至 C7 小关节,并将其锁定。
将砝码尖端与裸露的脊髓对齐,确保尖端底部平行于脊髓背面。调整袖子,让重量压迫脊髓。当重量与脊髓保持恒定的相对位置时,停止调整。
按压五分钟后取下重物和椎体稳定器。在显微镜下,观察因压迫而导致的脊髓颜色变化。使用无菌磷酸盐缓冲盐水冲洗手术部位。
之后,使用吸力清洁该区域。使用聚丙烯不可吸收的 6-0 缝合线将肌肉和皮肤分层缝合。对手术区域进行消毒后,将鼠标放在温暖的垫子上,直到它恢复完全意识,然后再将其放回笼子。
苏木精和伊红或脊髓矢状切段H&E染色表明,重度损伤组灰质损伤面积比轻度损伤组宽。冠状HE切片显示,两组病灶均主要存在于灰质中。在重度组中,虽然灰质周围的白质结构受到的影响更大,但其轮廓仍然保持不变。
免疫荧光染色还显示,尽管重度组灰质周围的白质受到影响,但仍相对完整。在轻度或重度组受伤后 7 天,矢状 HE 切片中均未发现红细胞。普鲁士蓝染色仅显示重症组含铁血黄素沉着症。
免疫荧光显示轻度和重度损伤中GFAP和Iba1表达升高的区域,提示炎症反应和神经胶质瘢痕的形成。此外,重度组的病变面积比轻度组大。磁共振成像提示两组病灶均存在低强度信号变化,信号轮廓较高。
重度组表现出明显更大的低强度信号区域。尽可能去除椎板前后的软组织有助于椎板松弛,并在平行切割时对跨度切口造成损坏。本方案的相位体积模拟了中枢脊髓综合征,并能够进一步理解和探索信号。