小鼠完全转型脊髓损伤的诱导

该协议提供精确的手术控制损伤，诱导小鼠完全脊髓转染，具有高可重复性和非常高的存活率。使用细钻对骨损伤最大限度地减少对周围组织的损伤，使损伤和治疗反应得到更准确的建模。为了进行拉明切除术，在确认麻醉的8至10周大雌性C57黑色6小鼠对踏板反射反应不足后，剃光背部毛皮，将手术区域暴露在背脊椎上，用浸泡在波维酮碘防腐液和手术精神中的无菌棉签拭子对剃光区域进行消毒。

使用手术刀，在T10椎骨水平上进行垂直中线切口，并使用直钳将皮肤从底层筋膜上抬起来，以方便缩回器放置。要暴露T9到T11椎骨的脊椎，使用手术刀的钝边在皮下组织和下皮筋膜上做一个小中线切口，并使用细尖非锋利的钳子钝解剖和反射筋膜。要暴露肌酸，使用手术刀的钝尖分裂背部躯干和准针肌肉沿T9的脊椎到T11椎骨，并使用钝细尖钳钝解剖肌肉层，以暴露椎骨的肌骨。

使用相同的钳子在 T10 椎骨的横向过程周围制作小口袋，并在创建的口袋内的横向过程下钩住弯曲钳子的爪，以稳定 T10 椎体。用温暖的盐水彻底冲洗T10层，并使用棉签轻轻擦拭骨质表面，注意侧表面没有肌肉或韧带附件。要双边间打破层，请使用直径 0.55 毫米、7 毫米长度的钻头尖端，沿着钻头沿 T10/T11 椎间空间跟踪从 T9/T10 椎间空间到 T10/T11 椎间空间的垂直路径。

追踪路径后，打开钻头，缓慢而小心地在 T10 椎骨的右层上制作一个垂直沟槽，使用弯曲的钳子保持椎骨稳定。在层压左侧重复此过程后，用温暖的盐水灌溉组织，以洗去剩余的骨碎片。用一只手保持良好的脊柱抓地力对于这一步至关重要。

使用钻头变得舒适和自信也很重要。接下来，使用倾斜细尖钳抓住旋转过程，并拆下由双边钻孔分隔的层压的整个支脚段。然后，灌溉和拭子，以允许脊髓在拉明切除术窗口内清晰可视化。

要诱导外露脊髓内的脊髓损伤，请使用窄圆切边刀片切开脊髓中心拉明切除术窗口的中心，注意扫描脊柱的横向凹槽，以诱发完全的转膜损伤。要确认转节损伤的完整性，请使用钝细尖端钳子移除转流位点上剩余的连接。一旦在转口站点上实现了血侧，释放弯曲的力p对T10椎骨的抓地力，并沿中线将解剖肌肉的边缘聚集在一起，以达到良好的定位。

使用 5 / 0 多糖蛋白 910 可吸收缝合线，将肌合在层中，确保脊柱的自然曲率不会导致缝合线的任何张力或打开缝合线。然后，使用5/0不可吸收的丝质缝合来关闭皮下组织和皮肤，注意在关闭之前皮肤下没有出血、血块或碎屑。为了评估这种诱导小鼠转切型脊髓损伤的方法是否可重复和一致，可以通过免疫理论分析损伤脊髓，并可对小鼠进行行为测试。

对星细胞标记的免疫标记，胶质纤维酸蛋白，有利于划定完整的脊髓的边界。在此纵向部分中，可以如预期的那样在线桩之间可视化位于的伤害点。在平均最小距离为 550.4、正负 17.3 微米时，可以在转流位点诱导一致的大小缺陷。

部署开放场测试的巴索小鼠量表的行为数据显示，受伤的小鼠在受伤后没有表现出后肢运动。因此，该协议产生一个完整和可靠的转节类型损伤，导致完全丧失功能低于伤害水平，不会导致自发逆转的瘫痪。注意用稳定的手在直线上钻孔，因为一旦钻错了，修复拉明切除术窗口可能非常棘手。

脊髓损伤诱导后，可以应用各种治疗方案，包括药物输送和细胞移植，以确定改善脊髓损伤恢复的潜在疗法。