Les modèles animaux du syndrome du cordon ombilical central pourraient par la suite bénéficier à la recherche préclinique. La stratégie de cette étude est avantageuse car elle a permis d’étudier les mécanismes de blessure en produisant des résultats cohérents. Le protocole actuel de simulation du syndrome du cordon ombilical central chez la souris a permis d’améliorer la répétabilité et de minimiser les dommages opérationnels chez les animaux de laboratoire.
Éviter de perturber leur structure anatomique. Commencez par organiser les instruments chirurgicaux et la plate-forme coaxiale pour les lésions de la moelle épinière. Une fois que la souris est correctement anesthésiée, identifiez la petite saillie le long de la ligne médiane derrière le cou de l’animal, qui est l’apophyse épineuse de la deuxième vertèbre thoracique, ou T2. Rasez les poils entourant l’apophyse épineuse T2 derrière le cou et désinfectez la peau avec trois cycles alternés de solution Iota 4 et d’éthanol à 75 %.
Ensuite, placez la souris en position couchée sur la table d’opération. Appliquez une pommade pour les yeux pour protéger les yeux. Positionnez un coussinet de 3 à 4 millimètres d’épaisseur sous la poitrine de l’animal pour faciliter la cambrure de la courbe de la colonne cervicale, ce qui permet l’exposition de l’espace interlaminaire et également un passage d’air sans entrave lors de l’opération.
Ensuite, tout en travaillant sous un microscope, utilisez un scalpel pour faire une incision longitudinale de 1 à 1,5 centimètre centrée sur l’apophyse épineuse T2 et exposez la couche fasciale. À l’aide de micro-ciseaux, retirez une partie du tissu adipeux au-dessus de T2 pour exposer clairement l’apophyse épineuse T2. À l’aide des micro-ciseaux, séparez les trapèzes bilatéraux et les muscles rhomboïdes de C5 à T2 le long de la ligne médiane.
Ensuite, séparez les muscles de la lame des vertèbres C5 à T2 et utilisez des micro-écarteurs pour rétracter la couche musculaire sur les côtés. Coupez les muscles multifides et cervicaux de la colonne vertébrale présents à la surface des vertèbres. Localisez la vertèbre T2 en identifiant le point le plus élevé des apophyses épineuses.
Ensuite, continuez à sonder les apophyses épineuses successivement à partir de T2, en vous déplaçant vers l’extrémité rostrale, jusqu’à ce que la sixième vertèbre cervicale ou C6 soit localisée. À l’aide d’une pince, soulevez la lame C6 pour exposer la moelle épinière avant de couper la lame. Fixez les facettes articulaires C6 à C7 avec le stabilisateur vertébral et verrouillez-le.
Alignez l’embout du poids avec la moelle épinière exposée, en veillant à ce que le bas de l’embout soit parallèle à la surface dorsale de la moelle épinière. Ajustez le manchon pour laisser le poids comprimer la moelle épinière. Arrêtez le réglage lorsque le poids maintient une position relative constante avec la moelle épinière.
Retirez le poids et le stabilisateur vertébral après avoir permis une compression de cinq minutes. Au microscope, observez tout changement de couleur de la moelle épinière résultant de la compression. Rincez le site d’opération à l’aide d’une solution saline stérile tamponnée au phosphate.
Ensuite, utilisez l’aspiration pour nettoyer la zone. Suturez les muscles et la peau en couches à l’aide d’une suture 6-0 en polypropylène non résorbable. Après avoir désinfecté la zone chirurgicale, placez la souris sur un tampon chaud jusqu’à ce qu’elle reprenne conscience avant de la remettre dans sa cage.
La coloration à l’hématoxyline et à l’éosine ou à l’H&E de la section sagittale de la moelle épinière suggère que la zone endommagée dans la matière grise était plus large dans le groupe des blessures graves que dans le groupe des blessures légères. Les coupes coronaires de l’HE ont montré que dans les deux groupes, la lésion existait principalement dans la matière grise. Dans le groupe sévère, bien que la structure de la substance blanche entourant la matière grise ait été plus impactée, son contour a tout de même été maintenu.
La coloration par immunofluorescence a également révélé que bien que la substance blanche entourant la matière grise ait été affectée dans le groupe sévère, elle était encore relativement intacte. Aucun globule rouge n’a été trouvé dans les coupes d’EH sagittale sept jours après la lésion, que ce soit dans le groupe léger ou sévère. La coloration au bleu de Prusse n’a révélé l’hémosidérose que dans le groupe sévère.
L’immunofluorescence a révélé des zones d’expression élevée de GFAP et d’Iba1 dans les lésions légères et sévères, suggérant une réponse inflammatoire et la formation d’une cicatrice gliale. De plus, le groupe sévère présentait une plus grande surface lésionnelle que le groupe léger. L’imagerie par résonance magnétique a suggéré que dans les deux groupes, il y avait un changement de signal hypo intense dans la lésion avec un contour de signal élevé.
Le groupe sévère a montré une zone de signal hypo intense significativement plus grande. L’élimination autant que possible des tissus mous devant et derrière la lame facilite la relaxation de la lame et les dommages prouvés à la travée coupée lors de la coupe parallèle. Le volume de phase du protocole actuel modélise le syndrome de la moelle centrale et permet une compréhension et une exploration plus approfondies du signal.
