Tiermodelle des Zentralschnursyndroms könnten in der Folge der präklinischen Forschung zugute kommen. Die Strategie in dieser Studie ist vorteilhaft, da sie die Untersuchung von Verletzungsmechanismen ermöglicht, indem sie konsistente Ergebnisse liefert. Das derzeitige Protokoll zur Simulation des zentralen Rückenschnursyndroms bei Mäusen hat die Wiederholbarkeit verbessert und die operativen Schäden an Versuchstieren minimiert.
Vermeidung von Störungen ihrer anatomischen Struktur. Beginnen Sie mit der Organisation der chirurgischen Instrumente und der koaxialen Plattform für Rückenmarksverletzungen. Sobald die Maus richtig betäubt ist, identifizieren Sie die kleine Vorwölbung entlang der Mittellinie hinter dem Hals des Tieres, die den Dornfortsatz des zweiten Brustwirbels oder T2 darstellt. Rasieren Sie die Haare, die den T2-Dornfortsatz hinter dem Hals umgeben, und desinfizieren Sie die Haut mit drei abwechselnden Runden Iota 4-Lösung und 75%igem Ethanol.
Platzieren Sie dann die Maus in Bauchlage auf dem Operationstisch. Tragen Sie eine Augensalbe auf, um die Augen zu schützen. Positionieren Sie ein 3 bis 4 Millimeter dickes Polster unter der Brust des Tieres, um die Wölbung der Halswirbelsäulenkrümmung zu erleichtern, was die Freilegung des interlaminaren Raumes und auch einen ungehinderten Luftdurchgang während der Operation ermöglicht.
Als nächstes machen Sie unter dem Mikroskop mit einem Skalpell einen 1 bis 1,5 Zentimeter langen Längsschnitt mittig auf dem Dornfortsatz T2 und legen die Faszienschicht frei. Entfernen Sie mit Hilfe einer Mikroschere einen Teil des Fettgewebes oberhalb von T2, um den Dornfortsatz T2 deutlich freizulegen. Trennen Sie mit der Mikroschere den bilateralen Trapezmuskel und die Rautenmuskulatur von C5 bis T2 entlang der Mittellinie.
Trennen Sie dann die Muskeln auf der Lamina der Wirbel C5 bis T2 und verwenden Sie Mikroretraktoren, um die Muskelschicht zu den Seiten zurückzuziehen. Schneiden Sie den Multifidus und die Halswirbelsäulenmuskulatur auf der Oberfläche der Wirbel durch. Lokalisieren Sie den T2-Wirbel, indem Sie den höchsten Punkt der Dornfortsätze identifizieren.
Dann werden die Dornfortsätze sukzessive von T2 aus in Richtung rostrales Ende sondiert, bis sich der sechste Halswirbel oder C6 befindet. Heben Sie die C6-Lamina mit einer Pinzette an, um das Rückenmark freizulegen, bevor Sie die Lamina abschneiden. Klemmen Sie die Facettengelenke C6 bis C7 mit dem Wirbelstabilisator und arretieren Sie ihn.
Richten Sie die Gewichtsspitze am freiliegenden Rückenmark aus und achten Sie darauf, dass die Unterseite der Spitze parallel zur dorsalen Oberfläche des Rückenmarks verläuft. Stellen Sie die Manschette so ein, dass das Gewicht das Rückenmark komprimieren kann. Hören Sie auf, sich anzupassen, wenn das Gewicht eine konstante relative Position zum Rückenmark beibehält.
Entfernen Sie das Gewicht und den Wirbelstabilisator, nachdem Sie eine fünfminütige Kompression zugelassen haben. Beobachten Sie unter dem Mikroskop alle Farbveränderungen des Rückenmarks, die sich aus der Kompression ergeben. Spülen Sie die Operationsstelle mit steriler, phosphatgepufferter Kochsalzlösung.
Anschließend saugen Sie den Bereich ab. Vernähen Sie die Muskeln und die Haut schichtweise mit einem nicht resorbierbaren 6-0-Nahtmaterial aus Polypropylen. Legen Sie die Maus nach der Desinfektion des Operationsbereichs auf ein warmes Pad, bis sie wieder bei vollem Bewusstsein ist, bevor Sie sie in ihren Käfig zurückbringen.
Die Hämatoxylin- und Eosin- oder H&E-Färbung des sagittalen Rückenmarksabschnitts deutete darauf hin, dass der geschädigte Bereich in der grauen Substanz in der Gruppe mit schweren Verletzungen breiter war als in der Gruppe mit leichten Verletzungen. Die koronalen HE-Schnitte zeigten, dass die Läsion in beiden Gruppen hauptsächlich in der grauen Substanz existierte. In der schweren Gruppe war die Struktur der weißen Substanz, die die graue Substanz umgibt, zwar stärker betroffen, aber ihr Umriss blieb erhalten.
Die Immunfluoreszenzfärbung zeigte auch, dass die weiße Substanz, die die graue Substanz umgibt, zwar in der schweren Gruppe betroffen war, aber noch relativ intakt war. Sieben Tage nach der Verletzung wurden weder in der leichten noch in der schweren Gruppe rote Blutkörperchen in sagittalen HE-Abschnitten gefunden. Die Preußisch-Blau-Färbung zeigte Hämosiderose nur in der schweren Gruppe.
Die Immunfluoreszenz zeigte Bereiche mit erhöhter GFAP- und Iba1-Expression sowohl bei leichten als auch bei schweren Verletzungen, was auf eine Entzündungsreaktion und die Bildung einer Glianarbe hindeutet. Außerdem wies die schwere Gruppe eine größere Läsionsfläche auf als die milde Gruppe. Die Magnetresonanztomographie deutete darauf hin, dass es in beiden Gruppen zu einer hypointensiven Signaländerung in der Läsion mit einer hohen Signalkontur kam.
Die schwere Gruppe zeigte eine signifikant größere hypointensive Signalfläche. Das weitestgehende Entfernen der Weichteile vor und hinter der Lamelle erleichtert die Entspannung der Lamina und die nachgewiesene Beschädigung des Spanschnitts beim parallelen Schneiden. Das vorliegende Protokollphasenvolumen modelliert das zentrale Cordsyndrom und ermöglicht ein besseres Verständnis und eine weitere Erforschung des Signals.
