C57BL/6Jマウスにおける中枢性臍帯症候群モデルの確立

中枢性臍帯症候群の動物モデルは、その後、前臨床研究に役立つ可能性があります。この研究の戦略は、一貫した結果を生み出すことで損傷メカニズムの調査を可能にしたため、有利です。マウスの中枢索症候群をシミュレートする現在のプロトコルは、再現性を向上させ、実験動物に対する操作上の損傷を最小限に抑えました。

解剖学的構造の破壊を回避します。手術器具と脊髄損傷同軸プラットフォームを整理することから始めます。マウスに適切に麻酔をかけたら、動物の首の後ろの正中線に沿った小さな突起、つまり第2胸椎の棘突起(T2)を特定します。首の後ろのT2棘突起の周囲の毛を剃り、イオタ4溶液と75%エタノールを交互に3回投与して皮膚を消毒します。

次に、マウスを操作テーブル上でうつ伏せの位置に置きます。目を保護するために眼軟膏を塗ります。頸椎のカーブのアーチを容易にするために動物の胸の下に3〜4ミリメートルの厚さのパッドを配置し、層間空間の露出と手術中の空気の通り道を妨げないようにします。

次に、顕微鏡下で作業しながら、メスを使用してT2棘突起を中心に縦1〜1.5センチメートルの切開を行い、筋膜層を露出させます。マイクロハサミの助けを借りて、T2より上の脂肪組織の一部を取り除き、T2棘突起をはっきりと露出させます。マイクロハサミを使用して、両側の僧帽筋と菱形筋を正中線に沿ってC5からT2に分離します。

次に、C5椎骨からT2椎骨の椎弓の筋肉を分離し、マイクロリトラクターを使用して筋肉層を横に引っ込めます。椎骨の表面に存在する多裂筋と頸椎の筋肉を切断します。棘突起の最高点を特定して、T2椎骨を見つけます。

次に、T2から吻側端に向かって、6番目の頸椎またはC6が位置するまで、棘突起を連続的に調査し続けます。鉗子を使用して、C6椎弓を持ち上げて脊髄を露出させてから、椎弓を切断します。C6 から C7 の椎間関節を椎体スタビライザーで固定し、ロックします。

ウェイトチップを露出した脊髄に合わせ、チップの底が脊髄の背側表面と平行になるようにします。袖を調整して、重さで脊髄を圧迫します。体重が脊髄との相対位置を一定に保ったら、調整を停止します。

5分間圧迫した後、重りと脊椎スタビライザーを取り外します。顕微鏡下で、圧迫による脊髄の色の変化を観察します。滅菌リン酸緩衝生理食塩水を使用して手術部位をすすぎます。

その後、吸引を使用して領域を清掃します。ポリプロピレン製の非吸収性6-0縫合糸を使用して、筋肉と皮膚を層状に縫合します。手術部位を消毒した後、マウスが完全に意識を取り戻すまで温かいパッドの上に置いてから、ケージに戻します。

脊髄矢状部のヘマトキシリンとエオシンまたはH&E染色は、灰白質の損傷領域が軽度の損傷群よりも重傷群の方が広いことを示唆している。冠状動脈HE切片は、両群において病変が主に灰白質に存在することを示した。重症群では、灰白質を取り巻く白質の構造がより影響を受けましたが、その輪郭は依然として維持されていました。

また、免疫蛍光染色により、重症群では灰白質を取り巻く白質が影響を受けているが、それでも比較的無傷であることが明らかになった。軽度群または重度群のいずれにおいても、損傷後7日目の矢状HE切片に赤血球は認められなかった。プルシアンブルー染色では、重篤なグループでのみヘモジデローシスが明らかになりました。

免疫蛍光法により、軽度および重度の傷害においてGFAPおよびIba1発現が上昇した領域が明らかになり、炎症反応とグリア瘢痕の形成が示唆されました。また、重症群は軽度群よりも大きな病変面積を示した。磁気共鳴画像法は、両群において、病変に低強度の信号変化があり、信号の輪郭が高いことが示唆された。

重症群は、有意に大きい低強度信号領域を示しました。椎弓の前後の軟部組織を可能な限り除去することで、椎弓の弛緩が促進され、平行切断時のスパンカットへの損傷が証明されています。現在のプロトコルフェーズボリュームは、中枢性臍帯症候群をモデル化し、シグナルのさらなる理解と探索を可能にします。