来自人类乳牙和恒牙的牙髓干细胞的分离、培养和表征

首先用牙科镊子将拔出的人牙固定到位。然后使用连接到牙科手机和水冷却剂的金刚石盘切割牙齿。使用牙科挖掘机，从牙齿上去除牙髓组织。

接下来，使用无菌手术刀片小心地将牙髓组织切成小碎片。然后将这些片段放入含有 PBS 的微型组织研磨机中，形成均匀的混合物。将切碎的组织片段转移到 15 毫升的试管中，并使用 1 型胶原酶和分散酶的混合物消化它们。

将组织在 37 摄氏度的酶混合物中孵育 2 小时。孵育后，中和酶。接下来，将消化的组织转移到 15 毫升试管中，并在室温下以 300 G 离心 5 分钟。

然后小心地弃去上清液，将沉淀重新悬浮在新鲜的 DMEM 中，补充有 10% 至 20% FBS。对于细胞培养，小心地将细胞悬液转移到 25 平方厘米的培养瓶中。将细胞在 37 摄氏度的 5% 二氧化碳中孵育。

2 到 3 天后，使用无菌血清移液管，小心吸出培养基并更换为新鲜培养基。接下来，为了表征 DPSC，打开流式细胞仪并确认分离细胞的间充质干细胞性质。DPSC 成功分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞验证了 DPSC 的多能性。

DPSCs 的倍增时间与间充质干细胞报道的倍增时间一致，表明细胞群健康且增殖。流式细胞术分析显示，大多数 DPSCs 的 CD-90 、 CD-73 和 CD-105 呈阳性，证实了它们作为间充质干细胞的身份。此外，不到 2% 的细胞对 CD-34 、 CD-45 和 HLADR 呈阳性，证实不存在明显的造血或内皮细胞污染。