Çıkarılan insan dişini diş forsepsleri ile yerine sabitleyerek başlayın. Ardından, bir diş el aletine bağlı bir elmas disk ve bir su soğutucusu kullanarak dişi kesin. Bir diş ekskavatörü kullanarak, pulpa dokusunu dişten çıkarın.
Ardından, pulpa dokusunu dikkatlice küçük parçalara ayırmak için steril bir cerrahi bıçak kullanın. Daha sonra bu parçaları homojen bir karışım oluşturmak için PBS'li mini bir doku öğütücüye yerleştirin. Kıyılmış doku parçalarını 15 mililitrelik bir tüpe aktarın ve bunları bir tip kollajenaz karışımı kullanarak sindirin ve boşaltın.
Enzim karışımındaki dokuyu iki saat boyunca 37 santigrat derecede inkübe edin. İnkübasyondan sonra, enzimleri nötralize edin. Daha sonra, sindirilmiş dokuyu 15 mililitrelik bir tüpe aktarın ve oda sıcaklığında beş dakika boyunca 300 G'de döndürün.
Daha sonra süpernatanı dikkatlice atın ve peleti% 10 ila 20 FBS ile desteklenmiş taze DMEM'de yeniden süspanse edin. Hücre kültürü için, hücre süspansiyonunu dikkatlice 25 santimetre karelik bir kültür şişesine aktarın. Hücreleri 37 santigrat derecede% 5 karbondioksit içinde inkübe edin.
İki ila üç gün sonra, steril bir serolojik pipet kullanarak, ortamı dikkatlice aspire edin ve yeni bir ortamla değiştirin. Daha sonra, DPSC'lerin karakterizasyonu için akış sitometresini açın ve izole edilen hücrelerin mezenkimal kök hücre yapısını onaylayın. DPSC'lerin osteoblastlara, adipositlere ve kondrositlere başarılı bir şekilde farklılaşması, DPSC'lerin çok etkili doğasını doğrular.
DPSC'lerin iki katına çıkma süresi, mezenkimal kök hücreler için bildirilenle tutarlıydı, bu da sağlıklı ve proliferatif bir hücre popülasyonu olduğunu düşündürüyordu. Akış sitometrisi analizi, DPSC'lerin çoğunluğunun CD-90, CD-73 ve CD-105 için pozitif olduğunu gösterdi ve mezenkimal kök hücreler olarak kimliklerini doğruladı. Ayrıca, hücrelerin% 2'sinden azı CD-34, CD-45 ve HLADR için pozitifti ve bu da önemli hematopoietik veya endotel hücre kontaminasyonunun olmadığını doğruladı.
