肝细胞癌患者来源的类器官异种移植模型，用于研究肝脏再生对肿瘤生长的影响

肿瘤复发是分娩切除的一个非常突出的问题。在这项研究中，我们试图更多地了解再生环境中的肿瘤生长。肿瘤类器官已被证明可以在组织学和遗传学上概括患者的肿瘤，尽管体内模型稀缺且缺乏稳定性。

我们已经成功地将患者衍生的类器官移植到小鼠的肝脏中。我们已经通过两个示例案例展示了这一点。组织学免疫组织化学染色显示类器官和异种移植物与原始患者肿瘤相似。

与 2D 细胞培养等其他可能性相比，从原始肿瘤发育出类器官类似于更准确的患者肿瘤模型。将该模型嵌入到肝脏再生的复杂环境中将有助于更多地了解肿瘤细胞与再生环境之间的现有相互作用。我们希望我们获得有关了解肝切除术 HCC 复发的领域知识。

因此，我们希望通过这个模型为未来的研究项目奠定基础。首先，使用手术刀和镊子将收获的肝癌组织切成一到两平方毫米的小碎片。将组织块转移到含有 5 mL 解离缓冲液的 15 mL管中。

将管子放在 37 摄氏度的旋转装置上。孵育后，将细胞混合物通过放置在 50 毫升试管顶部的 100 微米细胞过滤器上。使用 5 毫升注射器的柱塞将组织碎片粉碎通过过滤器。

现在在过滤器上添加 5 毫升补充的高级 DMEM 进行清洗。将滤液转移到 15 ml 锥形管中。吸出上清液后，将沉淀重悬于 5 mL 红细胞裂解缓冲液中。

将悬浮液以 300 g 的浓度再次离心 5 分钟。然后在计数前将沉淀重悬于 1 毫升 PBS 中。在细胞铺板之前，从离心细胞悬液中取出上清液。

用大约 1 毫升的基底膜基质重悬于试管中，并置于冰上。将 20 μL 细胞悬液移液到预热的 6 孔板的孔中，以产生液滴。等待 2 到 3 分钟后，将板倒置在 Flow 柜中 5 分钟。

然后将板转移到培养箱中凝固。最后，向每个孔中加入 2 毫升类器官培养基。患者来源的类器官系呈现原始患者肿瘤的形态学特征。

首先，将麻醉的小鼠置于仰卧位，四肢用胶带固定。使用镊子和显微外科剪刀沿线性白线从下腹部到剑突软骨在耗尽的手术部位做一个切口。将牵开器插入切口，调整牵引方向以获得上腹部的最佳暴露。

将一张用生理盐水弄湿的干净餐巾纸放在切口部位旁边。现在，将小肠和盲肠外出到湿餐巾纸上。暴露右上叶，直到可以注射。

将类器官混合物吸入标有 Hamilton 注射器的冲洗液中。将悬浮液稳定地注入鼠标中，直到标记，不要移动针头。用棉签按压注射部位。

然后检查腹部是否有任何肺叶破裂或回流。用 0.5 毫升无菌盐水冲洗腹部。放置带有可吸收缝合线的连续缝合线以闭合腹部。

在小鼠中形成的肿瘤类似于患者来源的类器官以及原始患者肿瘤。要开始小额肝脏切除，请在仰卧位对麻醉小鼠进行剖腹手术。用湿棉签推动内侧叶，在手术区域创造更多空间。

将左侧肝叶颅侧翻转，露出尾状叶和韧带。完全切断韧带。然后在肝外叶下方插入结扎线。

现在将左侧肝叶向尾部翻转，并将结扎线的左自由端引导至左侧肝叶的左尖端。将右自由端引导到另一个尖端周围。使用棉签在耳垂上施加牵引力，确保结扎线位于中央。

然后打一个双半结。用另一个向另一个方向打的后半结固定这个结，不要完全拧紧它。当结扎线位置正确时，用钝头镊子握住结扎线的颅骨自由端，然后用另一对镊子拉动尾端。

用向相反方向打的第二个结固定结。靠近结扎线切开，不要切开以切开肝脏。左外侧肝叶小切除术后，横切镰状韧带。

向颅骨翻转肺叶，然后在其下方插入结扎线并向尾部翻转。现在将结扎线的自由 ens 绕在唇部周围。正确放置结扎后，慢慢打一个双半结。

沿相反方向完全拧紧第二个半结，然后在相反方向添加第三个半结。切除肺叶，然后用无菌盐水冲洗腹部。将肠道放回其解剖位置。

要闭合腹部，请使用镊子抓住皮肤和腹膜。在切口线的顶端放置带有可吸收缝合线的缝线。在切口的另一侧进行第二次缝合，从皮肤侧引出。

打紧结，使自由端不短针。将针迹的针端留长。在切口的底端打一个结，完成跑步缝合。

清洁腹部残留的血液。肝叶的相对贡献在同一品系的不同小鼠之间是可比的。小切除术后右下叶平均重量增加到总体重的 0.82%。

大切除术导致总体重增加 0.99%。右上叶的大面积切除导致其重量相对于右下叶明显增加。