乳腺癌患者来源的异种移植物的高通量解离和原位植入

我实验室的研究重点是了解促进乳腺癌患者肌肉疲劳的潜在机制。具体来说，我们想了解位于乳腺组织中的肿瘤与外周骨骼肌之间的通信，然后了解该肌肉内导致疲劳的分子反应。3D 细胞培养模型的开发使高通量研究成为可能，其中可以在受控条件下研究肌肉疲劳等功能反应。

功能性细胞培养实验可以并行进行，并且比同等动物模型需要更少的时间，从而促进快速发现和创新。使用传统的患者来源的异种移植模型评估相关的功能表型既耗时又耗费资源。该方案有助于将 PDX 同时注射到小鼠体内，使研究人员能够使用强大的动物实验研究对人类肿瘤的全身反应。

该方案允许以比现有方法更高的规模对患者来源的乳腺肿瘤细胞进行原位注射，从而促进单个研究人员每天快速注射多达数十只小鼠。此外，肿瘤的解离会产生均匀的细胞悬液，使细胞类型在动物之间均匀分布。我实验室的数据在 PDX 小鼠和人类癌症患者中发现了类似的肌肉分子对乳腺癌的反应。

因此，我们希望利用这种临床前小鼠模型来筛选候选药物，并确定有可能减轻乳腺癌患者疲劳的疗法。首先，从人肿瘤解离试剂盒中解冻酶 H、R 和 A。在无菌管中加入 200 微升酶 H、100 微升酶 R 和 25 微升酶 A.向 C 管中加入 4.7 毫升无菌 RPMI 1640 培养基，将最终体积调整至约 5 毫升。

然后将解冻的肿瘤片段和随附的冷冻培养基转移到无菌 100 毫米培养皿的一半上。使用无菌镊子，将肿瘤碎片转移到无菌的 5 毫升微管中，并用 1 至 3 毫升无菌 PBS 洗涤。使用无菌镊子，将消毒后的碎片转移到新的 5 毫升微管中。

用无菌 PBS 第二次洗涤后，将片段转移到 100 毫米培养皿的干燥部分。使用两个无菌的 10 号手术刀刀片，彻底切碎肿瘤组织。将切碎的肿瘤片段转移到一个刀片上，并将它们放入含有制备的酶溶液的 C 管中。

将 C 管倒置数次，以确保肿瘤片段在酶溶液内均匀分布。现在将 C 管放入机械分离器中并倒置管，以确保所有内容物都浸没在培养基中。从触摸屏界面中选择 37CHTDK3 程序。

解离程序完成后，检查试管内容物。充分解离后，将 C 管在 200G 下在 4 摄氏度下离心 5 至 8 分钟。使用真空吸液或移液管，小心地去除上清液，并将细胞沉淀重悬于 RPMI 1640 中，使其体积相当于所需最终注射体积的一半。

在 2 mL 圆底微量离心管中，将所需量的稀释细胞悬液在 RPMI 中与等体积的 Matrigel 混合。通过重复移液轻轻混合悬浮液以确保均匀性。首先，将人乳腺肿瘤解离成单细胞悬液。

然后，使用不带针头的 1 毫升注射器，轻轻上下吸出细胞悬液，以确保均匀性。将 26 号针头连接到注射器上并抽出所需的注射体积。然后轻轻敲击或轻弹注射器以消除任何气泡。

在鼠标的目标注射部位涂抹一层薄薄的脱毛霜。清洁注射区域后，牢牢抓住背侧皮肤的后背和背部，以牢固地束缚鼠标并将鼠标置于仰卧位。以 45 度角插入针头，指向臀部，距离脂肪垫尾部约 0.5 至 1 厘米，调整针头长度。

将针头推进脂肪垫，并以受控方式注射所需体积的细胞悬液。注射后，将针头旋转 180 度并保持短暂的位置，然后慢慢抽出，以尽量减少注射部位的细胞损失。