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Entitäten hier eingegebenen Degrees: Micro: μ-Zeichen: & Warenzeichen: PRÜFUNG ∂ Σ Ω ≈ γ γδ γδ γδ-Test
Robert M. Rioux & William A. Elliott, Pennsylvania State University, University Park, PA
Rauch Hauben und Laminar-Flow-Schränke sind engineering-Steuerelemente, die unter ähnlichen Prinzipien funktionieren. Beide verwenden einen konstanten Luftstrom um die Laborumgebung und seine Bewohner zu verhindern. Abzüge zu verhindern, dass Gefahrstoffe aus den Haube Arbeitsbereich verlassen während Laminar-Flow Schränke verhindern, dass Verunreinigungen in den Schrank Arbeitsbereich.
Rauch Hauben sind Lüftungsanlagen entwickelt, um gefährliche Dämpfe, Gase und Partikel minimieren. Ein konstanten Luftstrom zieht es in die Haube öffnen, die Flucht der Dämpfe, Gase und Partikel zu begrenzen, und dann durch den Auspuff herausgezogen ist. Laminar-Flow-Schränke werden verwendet, um eine sterile/saubere Umgebung zu pflegen, indem ständig fließenden Hocheffizienz Partikel Arrestance (HEPA)-gefilterte Luft nach außen, kontaminierten Luft, die in den Schrank Arbeitsbereich zu minimieren. Die HEPA-gefilterte Luft verringert die Möglichkeit für schädliche Chemikalien oder Partikel vom Labor betreten. Ein HEPA-Filter entfernt 99,97 % oder größer 0,3 µm Partikel.
Rauch Hauben und Laminar-Flow-Schränke sind engineering-Steuerelemente, die darauf abzielen, die Exposition gegenüber Gefahren und Verunreinigung zu verringern. Abzüge reduzieren Exposition gegenüber gefährlichen Dämpfe, Rauch und Partikel für den Benutzer während Laminar-Flow Schränke Arbeitsbereich Belastung durch Schadstoffe reduzieren. Turbulente Strömung folgt eine unregelmäßige Strömungsmuster mit lokalen Strom bewegt sich in alle Richtungen im Verhältnis zu der Masse fließen. Laminare Strömung bewegt sich in parallelen Stromlinien, die sich nicht kreuzen. Laminar-Flow Schränke erhalten einen laminaren Luftstrom, Kreuzkontamination innerhalb des Arbeitsbereichs zu vermeiden und Rückfluss von kontaminierter Luft von außen die Haube zu verhindern, die mit turbulente Strömung auftreten würde.
1. Rauch Hauben
2. Laminar-Flow-Schränke
Abbildung 1 . Diagramme von horizontalen und vertikalen Laminar-Flow Hauben.
horizontale Laminar-Flow Hood | |
Vorteile | Nachteile |
Hände/Handschuhe verschmutzen weniger, da sie in der Regel Abwind der Elemente im Kabinett | Luftstrom bläst in Benutzer ’ s Gesicht |
reduzierte Luftverwirbelungen Fluss | große Objekte auf Worksp Ass kann sauber Luftstrom, Verringerung der Wirksamkeit behindern |
Vertikale Laminar-Flow Hood | |
Vorteile | Nachteile |
Luft Stream bläst nicht in Benutzer ’ s Gesicht | Hände und Arme über Objekte positionieren kann nicht |
weniger Kreuzkontamination von Element im Arbeitsbereich | erhöhte Strömung Luftverwirbelungen |
Tabelle 1. Vor- und Nachteile der horizontale und vertikale Laminar-Flow Hauben.
Rauch Hauben und Laminar-Flow-Schränke sind wesentliche Teile von Laborgeräten, die Gefahrensituationen und Verschmutzung zu verhindern.
In Rauch Hauben und Laminar-Flow-Schränke, Gefahren oder Verunreinigungen sinken mit Luftstrom. Rauch-Hauben zeichnen in Luft über einen Arbeitsbereich zu entfernen schädliche Dämpfe und feinen Partikeln, während Laminar-Flow Schränke Schlag Luft durch einen Filter und Vermeidung von Kontamination der Proben durch Staub oder biologische Materialien heraus.
Dieses Video wird veranschaulichen wie Rauch Hauben und Laminar-Flow Schränke arbeiten, wie man sie benutzt und Wartung.
Rauch Hauben und Laminar-Flow-Schränke mit laminarer Luftströmung, eine Strömung, die in parallelen Stromlinien, verläuft die nicht kreuzen betrieben. Laminar-Flow, im Gegensatz zur turbulenten Strömung verhindert Querkontamination zwischen Proben durch Objekte entfernen gefährliche Partikel umströmenden.
Rauch Hauben haben drei Hauptteile: die Eröffnung Gesicht mit einer Schärpe, den Arbeitsbereich und den Auspuff. Der Lüfter im Abgas saugt Luft durch die Öffnung Gesicht, über den Arbeitsbereich, und durch den Auspuff. Diese Strömung zieht wiederum Dämpfe und Partikel aus dem Abgas und vom Labor.
In der richtigen Höhe des Flügels beschränkt die Größe der Öffnung, die wiederum einen hohen Luftstrom unterhält. Dieses high-Flow ist notwendig, um das Entweichen von Rauch zu verhindern.
Mittlerweile gibt es zwei Arten von Laminar-Flow-Schränke, horizontale und vertikale. In beiden Fällen Luft ist gezeichnet durch eine Aufnahme und reinigenden Filter wo es kleine Partikel wie Staub und Bakterien entfernt.
A horizontale Kabinett leitet Luft horizontal durch den Arbeitsbereich. Diese Art von Schrank vermindert Verunreinigung durch Hände und Handschuhe, wie sie stromabwärts der Proben sind. Jedoch die Airstream brennt direkt auf die Benutzer durch, und große Objekte können den Fluss behindern.
In einer vertikalen Ablage die Luft richtet sich von oben auf den Arbeitsbereich dann vorbei an einer Schärpe. Da diese Art der Strömung direkt die Fläche des Arbeitsbereichs Materialien kommt, hilft es um Cross-Kontamination zu verhindern. Jedoch die Schärpe kann Handbewegung beschränken und der Luftstrom ist unruhiger als in einem horizontalen Schrank.
Nun, wir zeigen Ihnen wie diese Arbeitsbereiche in einem Labor Einstellung verwenden und grundlegende Wartung.
mit einem Abzug sicher, immer tragen geeigneten persönlichen Schutzausrüstung. Die Schärpe nur für die angegebene maximale sichere Arbeitshöhe Sicherstellung ausreichenden Luftstrom durch die Haube aufrichten.
Zur Vermeidung der Exposition zu schädlichen Dämpfe oder Partikel, mit nur Ihre Arme im Inneren der Haube arbeiten, und lassen Sie niemals Ihren Kopf, den Arbeitsbereich zu geben. Auch, um sicherzustellen, dass die Geschwindigkeit in der Haube ausreicht, den Arbeitsbereich übersichtlich zu halten, und verschieben Sie alle Elemente mindestens sechs Zoll weg vom Gesicht Kapuze.
Wenn Sie fertig sind Arbeiten in der Haube, alle Materialien herausnehmen. Speichern Sie keine Chemikalien in der Haube, sondern in einem dedizierten Speicherort wie ein Schrank entzündliche Stoffe. Zu guter Letzt schließen des Flügels zur Gewährleistung sichereren Laborumgebung und Energieverbrauch zu reduzieren.
Regelmäßige Wartung durch das Testen Alarme und Strömungsgeschwindigkeit an der maximalen Flügelhöhe.
Wenn die Geschwindigkeit niedrig ist, senken des Flügels bis es mit der erforderlichen Geschwindigkeit ist. Wenn die Schärpe zu niedrig für die Arbeit an der Haube erfolgen wird, Betrieb einstellen, bis die Wurzel des Problems gerichtet ist.
Laminar-Flow Schränke sind weit verbreitet in Orten, wo Verschmutzung ein Anliegen, wie ein Biologie-Labor, so Sie von sich selbst und Labor Verunreinigungen vorsichtig sein müssen. Um Verunreinigungen zu vermeiden, verwenden Sie Ethanol, um Handschuhe und alle Geräte vor der Verwendung des Schranks oder das Öffnen des Flügels zu sterilisieren.
Stellen sicher, dass der Flügel nicht über die maximal zulässige Höhe, um eine ausreichende Luftzirkulation zu gewährleisten. Halten Sie das Gehäuse frei von Unordnung, und sicherstellen Sie, dass Objekte mindestens 6 Zoll von der Kante platziert werden, denn das ist das Gebiet am ehesten durch Labor Luft verunreinigt werden. Außerdem legen Sie Gegenstände nicht in Gefahr der Kreuzkontamination flussabwärts von einander.
Wenn Sie fertig sind, entfernen Sie alle Elemente aus dem Arbeitsbereich zu verhindern, dass Unordnung und Schließen des Flügels um Verunreinigungen zu verhindern. Dann, wenn der Schrank mit einem UV-C Licht ausgestattet ist, einschalten, um den Arbeitsbereich zu desinfizieren.
Führen Sie regelmäßige Wartung auf die laminare Strömung Kabinett. Überprüfen Sie auf Lecks durch die Beschichtung sensible Bereiche wie die Schärpe Kanten mit einer Seifenlösung, die am Ort der Flucht Luft Blase wird.
Sie haben beobachtete, wie Jupiters Einführung in die Hauben und Laminar-Flow Schränke Rauch. Sie sollten jetzt verstehen wie sie funktionieren, wie man sie benutzt und wie um Wartungsarbeiten durchzuführen. Vielen Dank für das Ansehen von!
Die transuroepithelial Neutrophilenmigration Assay ermöglicht die quantitative Erfassung des menschlichen PMN Migration in kultivierten Blase Epithelzellschichten in Reaktion auf verschiedene Stimuli (1B). Während das Protokoll ist einfach, gibt es eine Reihe von Variablen, die PMN Migration beeinflussen können und damit die Reproduzierbarkeit der Ergebnisse hervorrufen. Es sollten Maßnahmen ergriffen, während der Vorbereitung der durchlässigen Träger und die PMN an Variabilität zwischen technischen und biologischen Replikate zu reduzieren. Zum Beispiel unterstützt nur durchlässig, die ausreichend konfluenten 5637 Zellschichten in einem Versuch verwendet werden. Confluence der 5637 Zellen wird mit Hilfe eines funktionellen Assays, die Undurchlässigkeit Maßnahmen zur Flüssigkeit. Wenn Medium hinzugefügt, um den oberen Reservoir ins Gleichgewicht über den durchlässigen Träger, dann die 5637 Zellen sind nicht ausreichend, um die konfluenten Experiment durchzuführen. Wenn das Volumen in dem oberen Behälter aufrechterhalten wird,dann die durchlässige Träger kann verwendet werden, um PMN Migration zu beurteilen. Wir haben transepithelialen elektrische Widerstand in diesem System, das nach oben steigt bescheiden Zusammenfluss der Zellen gemessen, ob diese Methode gewählt wird, sollte darauf geachtet werden, dass die ansonsten sterile Setup verseuchen werden. Zusammenfluss von 5637 Zellen 7 Tage nach der Aussaat kann von mehreren Faktoren, einschließlich der Passage Anzahl der Zellen und die Anzahl der Zellen auf der durchlässigen Träger ausgesät beeinflusst werden. Darüber hinaus sollte die Menge an Zeit, die die 5637 Zellen auf dem durchlässigen Träger in der umgekehrten Position während der Aussaat inkubiert nicht größer als 16 h (Abb. 1A). Für eine optimale Reproduzierbarkeit, sollte das Protokoll genau beachtet werden. Schließlich unterstützt die permeable konfluenten 5637 Zellschichten in 1-2 Tagen verwendet werden, und die Membranen der Träger sollte niemals während entweder das Wachstum der Zellen 5637 oder während der transuroepithelial Neutrophilenmigration Assay berührt werden.
Zusätzlich zu den 5637-Zellen können auch Schwankungen in PMN Herstellung eingeführt werden. Mit dem Protokoll über den PMN isolieren detailliert, 1 ml von menschlichem Blut liefert typischerweise etwa 10 6 PMN, obwohl diese Zahl variiert von Individuum zu Individuum. Sobald die typische Ausbeute eines Individuums Spenderblut bekannt ist, kann die Isolation Protokoll skaliert werden oder entsprechend nach unten. PMN von ungesunden oder kranke Menschen sollten vermieden werden, und verschiedene PMN Spendern verwendet für die biologische Replikate, um sicherzustellen, dass die Ergebnisse reproduzierbar sind beobachtet werden. PMN sollte vorsichtig und steril behandelt werden, um die Aktivierung während der Isolierung zu vermeiden. Schließlich ist das Timing der experimentellen Verfahren entscheidend, wie PMN nicht für längere Zeit einmal aus dem Körper entfernt überleben. Wir nutzen PMN innerhalb 1 Stunde nach Beendigung der Isolation Verfahren. Angesichts dieser Überlegungen, mindestens 3 technische Replikate sind in jedem biologischen Replikat einbezogen werden.
Die Anzahl von PMN in dem unteren Reservoir nach 1 Stunde wird in 2 normalisiert auf 10 6 PMN-Eingang gezeigt. Alternativ können PMN Zahlen eines internen Kontrollsystems nach der Normalisierung werden zur Eingabe PMN, die Variation reduzieren kann zwischen biologischen Replikate verglichen. Einhaltung des Protokolls über mit Liebe zum Detail skizziert ermöglicht die Aufzählung der PMN Migration in Reaktion auf Reize wie Bakterien (2A) und Lockstoff Substanzen (Abbildung 2B).
Abbildung 1. Schematische Darstellung der Versuchsanordnung. (A) 5637 Blase Epithelzellen auf invertierte durchlässigen Träger ausgesät werden die Träger in eine 24-Well-Platte aufgerichtet, und die Zellen werden bis zur Konfluenz gezüchtet. (B) Permeable supHäfen mit konfluenten 5637 Zellen werden invertiert und mit E. infiziert coli auf der apikalen Seite der Epithelzellen Schichten. Alternativ können Lockstoffe im unteren Reservoir platziert werden. Die durchlässigen Träger werden in einem low-Befestigungsplatte aufgerichtet und frisch isolierten menschlichen PMN sind in den oberen Stausee (als Vertreter der basolateralen Seite der epithelialen Schichten) aufgebracht. PMN über das Epithel einwandern und der aus dem unteren Reservoir unter Verwendung eines Hämozytometers gezählt.
Abbildung 2. PMN über Blase wandern Epithelien als Reaktion auf verschiedene Reize. (A) Infektion mit pathogenen E. coli-Stamm MG1655, MG1655 wärmegetöteten (HKMG) oder UPEC Mutante UTI89 YbCl :: cat entlockt deutlich mehr PMN Migration als mock Infektion oder eine Infektion mit dem Wildtyp-Stamm UPEC UTI89, isolieren eine Blasenentzündung (*, P <0,001). (B) Die Zugabe von fMLF (100 nm) oder IL-8 (100 ng / ml) auf die untere Reservoir Ergebnisse in deutlich mehr PMN Migration als Mock Behandlung (*, P <0,001). Die Daten repräsentieren den Mittelwert und die Standardabweichung von mindestens 3 biologischen repliziert. Statistisch signifikante Unterschiede wurden mit einem ungepaarten Student-t-Test.
Rauch Hauben und Laminar-Flow-Schränke sind nützliche Werkzeuge im Labor um Schaden von gefährlichen Stoffen zu verhindern und eine sauber zu halten Arbeitsraum bei empfindliche Materialien Verwendung. Jedoch Rauch Hauben und Laminar-Flow-Schränke sind nur wirksam, wenn Sie richtig eingesetzt. Nach einfachen Bedienungsanleitung und die regelmäßige Wartung, Rauch Hauben und Laminar-Flow-Schränke können wirksame Instrumente im Labor werden.
Bekanntgabe
Name | Company | Catalog Number | Comments |
(3-Glycidyloxypropyl)trimethoxysilane | Sigma | 440167 | GOPS |
0.25% Trypsin-EDTA (1X) | Gibco | 25200-056 | |
4-Dodecylbenzenesulfonic acid | Sigma | 44198 | DBSA |
96-well plate | Falcon | 353075 | |
Acetone | Technic | 530 | |
Acrylic resin | Fischer scientific | NC1455685 | |
agarose | Sigma | A9539 | |
autoclave | Tuttnauer | 3150 EL | |
AZ 10XT | Microchemicals | Positive photoresist | |
AZ 826 MIF Developer | Merck | 10056124960 | Metal-ion-free developer for the negative photoresist |
AZ Developer | Merck | 10054224960 | Metal-ion-free developer for the positive photoresist |
AZ nLof 2070 | Microchemicals | Negative photoresist | |
Buprenorphine | Axience | ||
Carprofen | Rimadyl | ||
Centrifuge Sorvall Legend X1R | Thermo Scientific | 75004260 | |
CMOS camera Prime 95B | Photometrics | ||
CO2 incubator HERAcell 150i | Thermo scientific | ||
DAC board | National Instruments | USB 6259 | |
Déco spray Pébéo | Cultura | 3167860937307 | Black acrylic paint |
Dextran Texas Red 70.000 | Thermofisher | D1830 | |
Die bonding paste "Epinal" | Hitachi | EN-4900GC | Silver paste |
Dimethyl sulfoxide | Sigma | D2438 | |
Dispensing machine | Tianhao | TH-2004C | |
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium + GlutaMAX™-I | Gibco | 10567-014 | |
Dulbecco's Modified Eagle's Medium | Sigma | D6429 | |
Egg incubator COUVAD'OR 160 | lafermedemanon.com | ||
Ethylene glycol | Carl Roth | 6881.1 | |
Fertilized eggs of Japanese quail | Japocaille | ||
Fetal Bovine Serum | VWR | S181BH | |
Flask | Greiner | 658170 | |
Fluorescence macroscope | Leica MZFLIII | ||
Gl261 | DSMZ | ACC 802 | |
Gold pellets - Dia 3 mm x 6 mm th | Neyco | ||
Handheld automated cell counter | Millipore | PHCC00000 | |
Heating and drying oven | Memmert | UF110 | |
Hexadimethrine Bromide Sequa-brene | Sigma | S2667 | |
hot plate Delta 6 HP 350 | Süss Microtec | ||
Illumination system pE-4000 | CoolLed | ||
Infrared tunable femtosecond laser (Maï-Taï) | Spectra Physics (USA) | ||
Ionomycin calcium salt | Sigma | I3909 | |
Kapton tape SCOTCH 92 33x19 | 3M | Polyimide protection tape | |
Lab made pulse generator | |||
Labcoter 2 Parylene Deposition system PDS 2010 | SCS | ||
Lenti-X 293 T cell line | Takara Bio | 63218 | HEK 293T-derived cell line optimized for lentivirus production |
Lenti-X GoStix Plus | Takara Bio | 631280 | Quantitative lentiviral titer test |
Mask aligner MJB4 | Süss Microtec | ||
Micro-90 Concentrated cleaning solution | International Products | M9050-12 | |
Microscope slides 76 x 52 x 1 mm | Marienfeld | 1100420 | |
Needles 30G | BD Microlance 3 | 304000 | |
PalmSens4 potentiostat | PalmSens | ||
parylene-c : dichloro-p-cyclophane | SCS | 300073 | |
PCB Processing Tanks | Mega Electronics | PA104 | |
PEDOT:PSS Clevios PH 1000 | Heraeus | ||
penicillin / streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
Petri dish | Falcon | 351029 | |
pGP-CMV-GCaMP6f | Addgene | 40755 | plasmid |
Phosphate Buffer Saline solution | Thermofisher | D8537 | |
Plasma treatment system PE-100 | Plasma Etch | ||
PlasmaLab 80 Reactive Ion Etcher | Oxford Instruments | ||
Plastic mask | Selba | ||
Plastic weigh boat 64 x 51 x 19 mm | VWR | 10770-454 | |
Poly-dimethylsiloxane: SYLGARD 184 Silicone Elastomer Kit | Dow chemicals | 1673921 | |
Polyimide copper film 60 µm (Kapton) | Goodfellow | IM301522 | |
Propan-2-ol | Technic | 574 | |
Protolaser S | LPKF | ||
puromycin | Gibco | A11103 | |
Round cover glass 5 mm diameter | Fischer scientific | 50-949-439 | |
Scepter Sensors - 60 µm | Millipore | PHCC60050 | |
Silicone adhesive Kwik-Sil | World Precision Instruments | ||
spin coater | Süss Microtec | ||
Spin Coater | Laurell | WS-650 | |
Super glue | Office depot | ||
tetracycline-free fœtal bovine Serum | Takara Bio | 631105 | |
Thermal evaporator Auto 500 | Boc Edwards | ||
Two-photon microscope | Zeiss LSM 7MP | ||
U87-MG | ATCC | HTB-14 | Human glioblastoma cells |
Ultrasonic cleaner | VWR | ||
Vortex VTX-3000L | LMS | VTX100323410 | |
Xfect single shots reagent | Takara Bio | 631447 | Transfection reagent |
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