Protokoll für Mosquito Aufzucht (A. gambiae)

Zusammenfassung

Dieses Video zeigt den allgemeinen Techniken verwendet, um hinten Anopheles gambiae im Labor. Die Methoden für die Pflege Labor Mücken sind in allen Phasen des Organismus Lebenszyklus von Larven zu Blut-Fütterung Erwachsene Puppen gezeigt.

Zusammenfassung

Dieses Protokoll beschreibt Mücke Aufzucht im Insektarium. Das Insektarium Zimmer sind bei 28 ° C und ca. 80% Luftfeuchtigkeit, mit einem 12-Std. Tag / Nacht-Zyklus. Für dieses Verfahren benötigen Sie Moskito-Käfige, 10% sterile Saccharose-Lösung, Papierhandtücher, Becher, Whatman-Filterpapier, Glas Speiser, menschlichem Blut und Serum, Wasserbad, Parafilm, destilliertes Wasser, saubere Kunststoff-Trays, Moskito Essen (beschrieben unten), Moskitonetz, um die Fächer, Vakuum, und eine Sammlung Kammerdeckel zu Erwachsenen zu sammeln.

Protokoll

Mosquito Essen:

1. Lebensmittel A: geerdet Fischfutter (Aquaricare). Eine kleine Prise hinzugefügt werden muss.
2. Lebensmittel B: geerdet Katzenfutter (Purina). Eine kleine Prise hinzugefügt werden muss.
3. Lebensmittel C: Katzenfutter (Purina). Zwei Tabletten hinzugefügt werden muss.

Blood:

Tierischem oder menschlichem Blut kann nach hinten Moskitos eingesetzt werden. Frisches Blut mit einer Spritze gesammelt und in ein steriles 15 ml Falcon-Röhrchen mit 1 ml der CPD (Antikoagulans) für jeweils 10 ml Blut, dann vorsichtig gemischt und zentrifugiert bei Raumtemperatur bei 2000 rpm für 5 min. Der Überstand wird verworfen, kümmert sich um die Buffy-Coat, die anderen Blutzellen (zB WBC) umfasst entfernen. Die RBC Pellet wird dann in ein gleiches Volumen RPMI-Medium mit einer Pipette suspendiert und weitere in diesem Medium dreimal gewaschen. Nach dem letzten Waschen, die pelletierten Erythrozyten sind in dem gleichen Volumen RPMI resuspendiert und bei 4 ° C (für 8-10 Tage aufbewahrt werden). Gerade vor dem Füttern wird der RBC (in RPMI) zentrifugiert (2000 rpm für 5 min) zu Pellets automatisch in die Zellen und die gepackte RBC ist in Serum (O + Humanserum) resuspendiert, um eine 40% Hämatokrit zu erhalten. Das Blut muss bei 37 ° C immer für die Fütterung gehalten werden.

TAG 1:

1. Die 3-5 Tage alten adulten weiblichen Mücken sind auf Blut, Eier zu legen zugeführt.
2. Für Blut füttern, ist eine künstliche Membran (Parafilm) Fütterung Methode wie folgt verwendet:
   
   
   1. Rote Blutkörperchen (siehe oben für Blut Vorbereitung) sind mit hitzeinaktiviertes Serum gemischt, um eine ~ 40% Hämatokrit (verpackt RBC 40% und Serum 60%) erhalten. Dies ist auf die Glasfeeder aufgenommen.
   2. Der Anleger ist es, eine Warmwasser-Jacke (37 ° C) verbunden ist, und auf den Käfig, um die Moskitos Zugriff auf die Membranoberfläche zu ermöglichen.
   3. Die Mücken sind erlaubt, für ~ 30 Minuten zu ernähren.

TAG 3:

1. Die Weibchen legt Eier 2 Tage, nachdem sie ernähren sich von Blut. Ein kleines Filterpapier in eine konische Form gewickelt ist in einem kleinen Becherglas mit destilliertem Wasser gelegt, um sicherzustellen, dass Filterpapier feucht wird. Der Becher wird in den Käfig über Nacht für die Moskitos, Eier zu legen gehalten.

TAG 4:

1. Das Filterpapier mit dem Moskito-Eier ist in einer Plastikschale mit ~ 300 ml destilliertes Wasser gegeben. Eine Prise von Lebensmitteln A ist, um das Fach aufgenommen und Eier dürfen die Larven in den nächsten Tagen schlüpfen.

DAYS 5 bis 8:

1. Wachsenden Larven gefüttert werden jeden Tag mit zwei Tabletten von Lebensmitteln C und überwacht für die Dichte und der Bevölkerung. Am achten Tag (5 Tage alte Larven), ist die Larven Bevölkerung von 1-Fach nach ~ 10 Tabletts verdünnt, mit einer Prise von Lebensmitteln A und zwei Tabletten von Lebensmitteln C in den einzelnen Fächern. (~ 30 Min.)

DAYS 9 bis 12:

1. Die Larven gefüttert werden jeden Tag mit der Nahrung C. Am 12. Tag (9 Tage alte Larven), wird das Wasser mit frischem Wasser verändert, und das Essen wird hinzugefügt (eine Prise von Lebensmitteln B und zwei Tabletten von Lebensmitteln C). Die Puppen beginnt mit der Entwicklung in diesem Stadium. Die Schalen sind mit Netzen abgedeckt, um zu entkommen der Erwachsenen zu vermeiden. (~ 8-10 Minuten)

TAG 13 bis 15:

Die Puppen dürfen bei Erwachsenen für die nächsten 2 emerge - 3 Tage. Das Essen ist jeden Tag, um die Larven / Puppen gegeben durch vorsichtiges Entfernen der net zu vermeiden Flucht von Erwachsenen.

TAG 16:

1. Die Erwachsenen werden in einem Käfig durch einen Aspirator verbunden Vakuum gesammelt. Der Käfig besteht aus einem kleinen 100 ml Flasche mit einem Baumwollfaden, der mit 10% Saccharose (autoklaviert) und einem Papiertuch Futter auf dem Boden, um mögliche Zucker verschüttet, die während Käfig Handhabung auftreten können, genießen getränkt ist. (~ 30-40 Minuten)

TAG 17 bis 21:

1. Die Erwachsenen (Männer und Frauen) werden dann in der Insektarium Zimmer für 4-5 Tage gehalten, gefüttert 10% Saccharose, bevor sie wieder Blut zugeführt werden, um den nächsten Zyklus zu beginnen. Das gleiche Mücken können verwendet werden, um Eier mehr als einmal zu verlegen.
2. Die Mücken, die nicht für Experimente oder die Aufzucht benötigt werden kann, indem man den Käfig in ein Gefrierfach getötet werden. Die verwendeten Schalen und Käfige müssen gereinigt und getrocknet werden, bevor sie wieder verwendet werden können.

HINWEIS: Es kann einige Variationen in der Mücke Aufzucht-Methode und verschiedene Labore können verschiedene Techniken.

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Food A		Aquaricare		Grounded fish food. A small pinch needs to be added.
Food B		Purina		Grounded cat food. A small pinch needs to be added.
Food C		Purina		Cat food. Two tablets needs to be added
RBC				prepared red blood cells: 40% hematocrit in human serum
RPMI	Medium
CPD				anticoagulant
serum				O+ human serum
Mosquito feeder
parafilm
Anopheles gambiae				mosquitos
10% sucrose				mosquito food
insectary