Geben Sie zunächst frisch zubereitete 4,5 Milliliter EDC-Arbeitslösung in ein 15-Milliliter-Polypropylenröhrchen, das die aminfunktionalisierten Polystyrolkügelchen und TCPP in MES-Puffer enthält. Legen Sie das Röhrchen 16 Stunden lang bei Raumtemperatur lichtgeschützt in einen invertierenden Rotator bei 35 U/min. Zentrifugieren Sie es dann 10 Minuten lang.
Saugen Sie den Überstand ab und suspendieren Sie die Perlen in 0,8 Millilitern Hank's Balanced Salt Solution erneut. Anschließend wird die Perlenlösung mit einer Ein-Milliliter-Pipette in ein braunes Polypropylen-Fläschchen überführt und bei vier Grad Celsius gelagert. Die Beziehung zwischen der Partikelbildung, dem Median, der Fluoreszenzintensität oder MFI und dem Bead-TCPP/EDC-Verhältnis zeigte, dass der MFI mit zunehmenden Verhältnissen zunahm, bis er ein Plateau bildete.
Die Partikel traten nur auf, wenn EDC während des Markierungsverfahrens als Kupplungsreagenz verwendet wurde. Die alleinige Markierung der Beads mit TCPP führte zu einer deutlich geringeren Fluoreszenzintensität. Als TCPP-markierte Beads nach 300 Tagen getestet wurden, wurde keine signifikante Veränderung des MFI oder des Partikelgehalts beobachtet.
Die Kopplung von TCPP an die Beads hatte einen minimalen Einfluss auf das Fluoreszenzemissionsspektrum. Sein Spektrum unterschied sich jedoch stärker von TCPP-markierten A549-Lungenkrebszellen. In einer Multiflora mit vier markierten Sputumproben funktionierten die TCPP-markierten Beads genauso gut wie die TCPP-gefärbten A549-Zellen.
