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Porphyrin-modifizierte Beads zur Verwendung als Kompensationskontrollen in der Durchflusszytometrie

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2.0K Views

•

10:06 min

•

March 24th, 2023

DOI :

10.3791/65294-v

March 24th, 2023

•

William Bauta¹, Marcia Grayson¹, Rossella Titone¹, Jennifer Rebeles¹, Vivienne I. Rebel¹

¹bioAffinity Technologies

Transkript

Wir haben mit dem Porphyrin TCPP modifizierte Polystyrolkügelchen als Kompensationskontrollen und Multicolor-Durchflusszytometrie entwickelt. Die in diesem Protokoll verwendeten Beads haben eine Fluoreszenzintensität, die mit TCPP-Färbezellen vergleichbar ist, und durchlaufen dennoch das Durchflusszytometer. Das ist uns gelungen und wir arbeiten derzeit an besseren Methoden, um das partikuläre Nebenprodukt zu entfernen.

Porphyrin-modifizierte Kompensationsbeads waren TCPP-gefärbten Zellen als Kompensationskontrollen vorzuziehen. Diese Geschwindigkeiten blieben über Monate stabil, ohne dass es zu nennenswertem Fluoreszenzverlust kam. Es ist bekannt, dass Porphyrine Krebszellen selektiv anfärben.

Die Forschung kombiniert die Selektivität von Porphyrinen mit quantitativer Durchflusszytometrie als leistungsstarke Plattform für die Hochdurchsatzanalyse menschlicher Proben.

Zusammenfassung

Das Protokoll beschreibt, wie Porphyrin-basierte Kompensationsbeads für die Durchflusszytometrie durch die Reaktion von Amin-funktionalisierten Polystyrol-Beads mit dem Porphyrin TCPP und dem Amid-Kupplungsreagenz EDC hergestellt werden. Ein Filtrationsverfahren wird eingesetzt, um die partikulären Nebenprodukte zu reduzieren.

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Durchflusszytometrie

Kompensationskontrolle

Amin funktionalisierte Beads

Kapitel in diesem Video

0:00

Introduction

0:53

Preparation of Meso‐Tetra(4‐Carboxyphenyl) Porphine (TCPP) Stock Solution

2:20

Combining Amine‐Functionalized Polystyrene Beads with TCPP Solution

3:15

Labeling Amine‐Functionalized Polystyrene Beads with TCPP

5:21

Quality Check (QC) of the TCPP Beads by Flow Cytometry

7:13

TCPP Bead Filtration

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