Um das Bildgebungssystem einzurichten, lassen Sie den 532-Nanometer-Laser zunächst 15 Minuten lang eingeschaltet, um sich aufzuwärmen. Platzieren Sie als Nächstes eine angepasste Rampe, die an einem manuell verstellbaren Tisch befestigt ist, neben der Bildgebungsmembran. Befestigen Sie einen Mauszahnhalter mit angeschlossenem Beatmungsschlauch an der Rampe und befestigen Sie ein Heizkissen auf der Rampenoberfläche.
Sobald sich der Laser erwärmt hat, platzieren Sie eine Detektorkarte in der Nähe des IR vor dem Eingang des Faserbündels und überprüfen Sie die Laserausrichtung, indem Sie sicherstellen, dass das Laserlicht in das Bündel eintritt. Beginnen Sie mit der Vorbereitung des Tieres, indem Sie die Haare des Kopfes der betäubten Maus mit einem Elektrorasierer von der Nähe der Augen bis hinter die Ohren schneiden. Tragen Sie eine Haarentfernungscreme auf die Oberseite des Kopfes auf.
Wischen Sie die Creme nach fünf Minuten Einwirkzeit mit einem feuchten Wattestäbchen ab. Wiederholen Sie die Anwendung, bis die Haut des Kopfes vollständig enthaart ist. Kurz bevor das Tier auf die Plattform des Systems gebracht wird, injizieren Sie mit einer 27-Gauge-Nadel retroorbital 100 Mikroliter Mikrobläschen in Bestandskonzentration.
Geben Sie nun einen Tropfen der Augenschutzlotion auf die Augen. Beginnen Sie mit der PAUSAT-Bildgebung, indem Sie das Bildgebungsfenster mit destilliertem Wasser auf der Oberfläche füllen, um eine akustische Kopplung zu gewährleisten. Befestigen Sie als Nächstes den Kopf der Maus im Zahnhalter und sorgen Sie für eine ordnungsgemäße Anästhesie und Luftzirkulation.
Halten Sie mit einer Heizlampe und einer Rektalsonde, die an einen Temperaturregler angeschlossen ist, die Körpertemperatur des Tieres bei 37 Grad Celsius. Öffnen Sie die Bildgebungsanwendung und navigieren Sie zum B-Modus-Ultraschall. Verwenden Sie das Live-Ultraschallfenster, um den Kopf der Maus manuell in die gewünschte Position und die entsprechende Bühnenhöhe einzustellen.
Stellen Sie den Wert der Ultraschallsendefrequenz im B-Modus auf 16 Megahertz ein. Geben Sie dann die Speicherverzeichnisinformationen in die Imaging-Anwendung ein. Wählen Sie als Nächstes die gewünschte Region des Gehirnscans aus, indem Sie das schwebende Feld verwenden.
Drücken Sie die Taste "Statisch erfassen" und überprüfen Sie die Scanergebnisse, sobald die Bildaufnahme abgeschlossen ist, um sicherzustellen, dass der gewünschte Bereich abgebildet wird. Um eine akustische Angiographie-Bildgebung durchzuführen, kehren Sie zur Bildaufnahme zurück und ändern Sie dann den Modus in Akustische Angiographie. Geben Sie als Nächstes die gewünschten Scanprotokollparameter ein und stellen Sie den Bildabstand auf 0,2 Millimeter und 10 Bilder pro Position ein.
Überprüfen Sie die Scanergebnisse unter Bildanalyse, um die Bildqualität sicherzustellen. Um mit der photoakustischen Tomographie abzubilden, öffnen Sie den optisch-parametrischen Oszillator (OPO) und stellen Sie ihn auf 756 Nanometer ein. Verschieben Sie dann den linearen Array-Wandler manuell in die zuvor festgelegten Koordinaten, um die Wobbler-Volumina und die linearen Array-Volumina automatisch zu registrieren.
Öffnen Sie die Laseranwendung und schalten Sie den 532-Nanometer-Laser ein. Stellen Sie die Scanparameter auf 0,4 Millimeter Schrittweite, 20 Millimeter Scanlänge und 10 gemittelte Bilder pro Position ein. Öffnen Sie nun das MATLAB-Programm des Ultraschalldatenerfassungssystems und drücken Sie die Run-Taste.
Drücken Sie anschließend in der Scan-Anwendung auf Start. Sobald der Scan abgeschlossen ist, öffnen Sie das MATLAB-Speicherprogramm. Ändern Sie den Speichernamen in den gewünschten Dateinamen und klicken Sie auf Ausführen.
Ändern Sie dann die OPO-Wellenlänge auf 798 Nanometer und wiederholen Sie das Scannen. Die akustische Angiographie, kurz AA-Bildgebung, zeigte, dass im unverletzten Gehirn beide Hemisphären eine ähnliche Verteilung der Blutgefäße aufweisen. Ähnliche Ergebnisse werden in den photoakustischen Bildern bei zwei verschiedenen Wellenlängen beobachtet.
Eine bemerkenswerte Signalreduktion im rechten lateralen Kortex wurde in den AA-Bildern von elektrokauterisierten Mäusen beobachtet. Die gleiche Region zeigte auch eine reduzierte Sauerstoffversorgung des Gewebes, was auf eine Ischämie hindeutet. Die PAUSAT-Bildgebung kann Schlaganfallbereiche auf der Grundlage des photothrombotischen Schlaganfallmodells identifizieren, indem sie die Region des oberen Kortex mit reduzierter Durchblutung und verminderter Sauerstoffsättigung identifiziert.
Das Alter der Maus kann die Bildgebung beeinflussen, da der Schädel dicker wird und zu einer unterschiedlichen akustischen Impedanz führt, was bei älteren Mäusen zu einer geringeren Bildtiefe führt.
