Verteilen Sie zunächst die Mäuse, deren Mundhöhle negativ für das Candida-Wachstum ist, nach dem Zufallsprinzip in neun Gruppen, die jeweils einer unterschiedlichen Konzentration von Curcuminoiden mit oder ohne Licht entsprechen. Am ersten Tag injizieren Sie allen Mitgliedern der Gruppen subkutan das Immunsuppressivum Prednisolon. Stellen Sie Tetracyclinhydrochlorid in einer Konzentration von 0,83 Milligramm pro Milliliter vom ersten Tag bis zum Ende des Experiments im Trinkwasser bereit.
Verabreichen Sie am zweiten Tag intramuskulär Chlorpromazinchlorid auf jeden Oberschenkelmuskel, um die Maus für die intraorale Inokulation zu sedieren. Tauchen Sie als Nächstes einen sterilen Tupfer in eine frisch zubereitete, standardisierte Suspension von Candida albicans. Nachdem Sie die Maus in Rückenlage gebracht haben, reiben Sie ihre Zunge 30 Sekunden lang mit einem eingeweichten Tupfer.
Verabreichen Sie am fünften Tag eine kostenlose subkutane Injektion von Prednisolon, um die Immunsuppression aufrechtzuerhalten. Legen Sie die betäubte Maus am siebten Tag vor der Behandlung in Rückenlage auf ein mit Fäden ausgestattetes PAD-Gerät. Schlingen Sie den Faden um die Schneidezähne, um den Mund offen zu halten.
Geben Sie 70 Mikroliter des Photosensibilisators auf den Zungenrücken jeder Maus, die zu den C+L+-Gruppen gehört. Bewegen Sie dann die Zunge zurück in die Mundhöhle und halten Sie die Maus als Vorbestrahlung 20 Minuten lang in einer dunklen Umgebung. Platzieren Sie das LED-Gerät nach der Photosensibilisierungsphase auf dem Zungenrücken und beleuchten Sie es sieben Minuten lang.
Wenden Sie den Photosensibilisator wie gezeigt auf die C+L-Gruppen an und lassen Sie die Mäuse 27 Minuten lang im Dunkeln. Unmittelbar nach der Behandlung den Zungenrücken eine Minute lang abtupfen und mit einem sterilen Wattestäbchen Candida albicans aus der Zunge ziehen. Legen Sie jeden Probentupfer in ein Röhrchen mit einem Milliliter steriler Kochsalzlösung und wirbeln Sie ihn eine Minute lang auf, um die mikrobiellen Zellen zu resuspendieren.
Führen Sie unverzüglich zehnfache serielle Verdünnungen in PBS durch und aliquotieren Sie 25 Mikroliter in zweifacher Ausfertigung auf Sabouraud-Dextrose-Agar-Platten. Inkubieren Sie die Platten 48 Stunden lang aerob bei 37 Grad Celsius. Verwenden Sie nach 48 Stunden einen digitalen Koloniezähler, um die Anzahl der Hefekolonien zu bestimmen.
Berechnen Sie die Belastung mit Candida albicans für jedes Tier. Fahren Sie am achten Tag, nachdem Sie das Tier ordnungsgemäß eingeschläfert haben, mit der chirurgischen Entfernung der Zunge fort und führen Sie die Zungenentfernung vor den zirkumvallaten Papillen durch, um sicherzustellen, dass die gesamte Zunge entfernt wird. Fahren Sie schließlich mit der histopathologischen Analyse der isolierten Zunge fort.
Das murine Modell der oralen Candidiasis zeigte typische weiße Flecken und Pseudomembranen auf der Zunge infizierter Mäuse. Die antimikrobielle photodynamische Therapie reduzierte die Lebensfähigkeit von Candida albicans bei einer Konzentration von 80 mikromolaren Curcuminoiden. Die Zungen nicht infizierter Tiere zeigten normales gesundes Gewebe, einschließlich: intakte Lamina propria, Basalmembran und fadenförmige Papillen.
In der C-L-Gruppe wurden Hefen und Filamente in der keratinisierten Epithelschicht beobachtet. Im darunter liegenden Bindegewebe lag eine leichte Entzündungsreaktion vor. Im Gegensatz dazu hatten Mäuse, die mit einer antimikrobiellen photodynamischen Therapie behandelt wurden, die durch 80 mikromolare Curcuminoide vermittelt wurde, weniger Pilzzellen in der keratinisierten Schicht des Zungenepithels.
