Um mit der Fibronektinbeschichtung zu beginnen, wählen Sie 12 Einsätze und 2 24-Well-Platten aus. Platzieren Sie die Einsätze in einer Well-Platte, so dass zwei Reihen mit je sechs Vertiefungen entstehen. Bereiten Sie ein Mikrogramm pro Milliliter Fibronektinlösung vor, indem Sie 52 Mikroliter Fibronektin-Stammlösung und 1,2 Milliliter PBS in einem 1,5-Milliliter-Röhrchen mischen.
Verteilen Sie 100 Mikroliter der Fibronektinlösung in jede Einlage. Inkubieren Sie die Einsätze in der Well-Platte bei 37 Grad Celsius für drei Stunden. Entfernen Sie nach der Inkubation die überschüssige Fibronektinlösung von jedem Einsatz.
Waschen Sie die Einsätze zweimal, indem Sie jedem Einsatz 100 Mikroliter steriles destilliertes Wasser hinzufügen. Entfernen Sie das Wasser in der gleichen Reihenfolge, in der es hinzugefügt wurde, um eine gleichmäßige Waschzeit zwischen den Einsätzen zu gewährleisten. Waschen Sie nun die Einsätze mit 100 Mikrolitern Zellkulturmedium und entfernen Sie dann das Medium aus den Einsätzen.
Als nächstes säen Sie 200 Mikroliter A431-Zellsuspension in die Einsätze. Zur Negativkontrolle pipettieren Sie 200 Mikroliter Zellkulturmedium in die Einsätze. Zeichnen Sie mit einem Permanentmarker eine Linie, die die zweite Well-Platte in zwei Spalten mit einer Breite von drei Wells unterteilt.
Trennen Sie jede Spalte in Zeilen. Beschriften Sie jeden Bereich im Raster mit relevanten Parametern. Geben Sie einen Milliliter Zellkulturmedium in jede Vertiefung.
Übertragen Sie die Einsätze von der Präparationsplatte an die entsprechende Stelle in der beschrifteten Versuchsplatte und inkubieren Sie 12 Stunden lang bei 37 Grad Celsius.
