National Institutes of Health (NIH), Joshua Frase Stiftung, Gesellschaft für Muskeldystrophie (MDA).

1. Einrichten für das Experiment <ol><li> Laden Sie die Dynamische Muscle Control (DMC)-Software. </li><li> Schalten Sie das Physiologie rig folgenden Anweisungen des Herstellers. </li><li> Ausführen der DMC-Software: </li></ol> Es wird davon ausgegangen, dass die Hardware auf dem Computer, der DMC-Software läuft angeschlossen ist, und dass das System kalibriert. Die Software kann von Zeit zu Zeit überarbeitet werden, daher Anweisungen sind nachfolgend die für die aktuelle Software-Version, die wir verwenden zur Verfügung gestellt. Wenn die Software geöffnet wird, ist es bereits ausgeführt. Der Benutzer kann zunächst schreiben ein Protokoll in DMC (zB bei 50 Hz für 1,5 s zu stimulieren, um eine isometrische Tetanus zu erzeugen) und das Protokoll kann dann für die spätere Verwendung gespeichert werden. Wir verwenden zwei Standard-Protokolle: (1) isometrische Kontraktion Protokoll (zB Zucken oder Tetanus) und (2) exzentrisch Stretch-Verletzungen Protokoll. Wir beginnen mit der isometrischen Kontraktion Protokoll für die zucken. Zur Optimierung der zucken, wird die Monitor-Ausgänge Bildschirm verwendet; Drehmoment während des twitch erzeugt werden beobachtet, wie die Elektroden verschoben werden. Wenn die maximale Zuckung erreicht ist, werden die Daten, die von der Rückkehr zum Hauptbildschirm (wählen Sie Fortsetzen) und wählen Sie Start-und Fertig gesammelt. Die Dateien werden aus dem Save As Popup-Fenster gespeichert. Mit den Elektroden in der gleichen Position gehalten, ist eine Tetanus (50 Hz) dann gesammelt und gespeichert. Wenn alle isometrischen Kontraktionen abgeschlossen sind, kann der exzentrische Stretch-Verletzungen Protokoll geladen und ausgeführt werden. Da gibt es eine Reihe von Kontraktionen in diesem Protokoll ausgeführt werden (10 Kontraktionen), auf dem Hauptbildschirm der Run auf Knopfdruck gewählt zu offenbaren Run All-Status. Nun, wenn Begin gewählt ist, erscheint ein Run Alle Protokolle Pop-up Fenster, das fragt nach dem Root-Dateinamen und das Verzeichnis, in dem die Dateien gespeichert werden sollen. Dann, Start-Protokoll Series Test-und Fertig werden ausgewählt, um die exzentrische Protokoll initiieren. Die Dateien werden automatisch in das ausgewählte Verzeichnis gespeichert. 2. Positionierung des Tieres in der Physiologie rig <ol><li> Tiere in Pflege und Gebrauch Ausschuss (ACUC) Richtlinien müssen für alle Verfahren, die Tiere folgen. </li><li> Anesthetize Hund mit Inhalationsnarkose (wie Isofluran) nach genehmigten Protokoll. Überprüfen Sie Blinkreflex sicher sein, dass das Tier tief narkotisiert ist. CO 2-Überwachung, Pulsoxymeter und Temperatur sollten während des gesamten Verfahrens zu überwachen. Wir verwenden in der Regel Propofol zur Induktion von Sevofluran zur Inhalationsanästhesie gefolgt. </li><li> Shave das Haar um die seitlichen ersticken (Knie), wo der stimulierenden Elektroden platziert werden soll (dh der lateralen Seite der Extremität beginnend mit dem Fibulaköpfchen um 2-3 cm distal des Trochanter major. </li><li> Position Hund auf die Physiologie Tisch in Rückenlage mit dem Beckengliedmaße, so dass die Ober-und Unterschenkels im rechten Winkel zu positionieren, und die Tibia parallel zur Tischplatte. Entweder rechts oder links des Körpers getestet werden. </li><li> Vor Anbringen Hund Pfote zu Pedalkraft, überprüfen, um sicherzustellen, dass die Kraft Pedal klar und sicher zu drehen. Befolgen Sie die Stromversorgung über das Verfahren für die Physiologie rig und aktivieren Sie das Pedal. Hinweis: die Kraft Pedal sollte &quot;steif&quot;, wenn der Benutzer versucht, ihn manuell zu bewegen. </li><li> Sanft ruhen die Pfote des Hundes in das Fußpedal, messen und aufzeichnen der Länge der Hund die Pfote aus der Mitte der Drehachse bis zum Ende der seitlichen Stelle. </li><li> Sichern Sie die Pfote in das Fußpedal mit elastischen selbsthaftend wickeln. </li></ol> 3. Isometrische zucken Drehmoment (tibiotarsalen Flexion) <ol><li> Nach einem Sicherheits-Check, schließen sterile abgeschirmt monopolare 24-Gauge-stimulierenden Elektroden auf den Stimulus Isolation Unit (SIU). </li><li> Stellen Sie den Stimulator zu: kontinuierliche Impulsausgang mit 1 Hz (1 Impuls pro Sekunde) </li><li> Software-Einstellungen: Legen Sie die isometrische Kontraktion Protokoll (auf dem Hauptbildschirm wählen Sie Load Protocol). Der Run auf Knopfdruck sichtbar sein soll neben dem Begin-Taste. Dadurch wird sichergestellt, das Protokoll ist nur einmal ausgeführt werden. </li><li> Mit Handschuhen, reinigen Sie die Haut mit Alkohol, und palpieren der N. peronaeus nur distal der lateralen proximalen Fibula. Mit einem Finger Kennzeichnung im Bereich der Nerven, vorsichtig die Kathode (schwarz) Elektrode unter die Haut und gerade außerhalb der Knochenhaut. Die Elektrode sollte parallel zur Oberfläche der Haut in einer Tiefe von ca. 2 cm gelegt werden, ausreichen, um die Elektrode aus bewegt, wenn die Hand entfernt zu verhindern. </li><li> Legen Sie die Anode (rot) Elektrode unter die Haut, parallel und leicht distal der Kathodenelektrode. Beide Elektroden sollten nun im Inneren des N. peronaeus direkt distal des Fibulaköpfchen. </li><li> Aktivieren Sie die Stimulationtor bei 1 Hz. Beachten Sie die twitch Antworten auf dem Monitor. Machen Sie kleine Anpassungen in den Elektrodenpositionen zu erhalten größten zucken Amplitude möglich. Die Elektrode sollte vollständig entfernt werden und in drei Minuten vor vier ½ cm-Schritten parallel zur Tibia zu den größten Zuckungsantwort finden ersetzt. Dies ist eine kritische Komponente des Verfahrens und großer Sorgfalt zu treffen, um die größte Resonanz finden werden. </li><li> Notieren Sie sich den zuckenden Antworten, indem Sie das Monitor-Ausgänge-Bildschirm (wählen Sie Fortsetzen), und wählen Sie dann Start und Fertig, um die Daten zu sammeln. Speichern Sie die Datei mit den gewünschten Dateinamen in das Save As Popup-Fenster. Schalten Sie den Stimulator. </li></ol> 4. Isometrische tetanische Drehmoment (tibiotarsalen Flexion) <ol><li> Ohne sich zu bewegen die Elektroden, ändern Sie den Stimulator-Einstellungen auf 50 Hz für 1,5 sec und ermöglichen den externen Trigger-Funktion. Dadurch kann der Stimulator von der Software aktiviert werden. </li><li> Software-Einstellungen: Das gleiche isometrische Kontraktion Protokoll wird verwendet, um die tetanische Reaktion wie bei der Zuckung zu sammeln. Angenommen, der stimulierenden Elektroden nicht bewegt worden sind, Begin und Done werden ausgewählt, um die Tetanus zu erzeugen. In der isometrischen Protokoll zu einem Tetanus zu erzeugen, wird der Stimulator von der Software auf das richtige Timing zu halten ausgelöst. Speichern Sie die tetanische Reaktion in den Save As Popup-Fenster. </li></ol> 5. Exzentrische Protokoll <ol><li> Ohne sich zu bewegen die Elektroden, ändern Sie den Stimulator-Einstellungen auf: 50 Hz für 1 sec (100V), und aktivieren Sie den externen Trigger-Funktion. Dadurch kann der Stimulator von der Software aktiviert werden. </li><li> Software-Einstellungen: Legen Sie die exzentrische Dehnung Verletzungen Protokoll, einen Befehl an den Servomotor bis 29 Grad (30 Grad ist das Maximum) zu drehen. Wählen Sie Run All. Wählen Sie Start, geben Sie das Root-Dateisystem Namen für den exzentrischen Reihe von Dateien und die Ordner, in dem sie gespeichert werden sollen. Wählen Sie Start-Protokoll Series Test, und dann auf Fertig, um das Protokoll zu initiieren. </li><li> In diesem Protokoll der Stimulator wird sich durch die Software, um das richtige Timing zu halten ausgelöst werden. Als Antwort auf jede exzentrischen Kontraktion auf dem Bildschirm erscheint, wird diese automatisch gespeichert. </li><li> A 4 Minuten Ruhezeit folgt jeder Satz von zehn exzentrische Kontraktionen. </li><li> Sammle insgesamt 30 exzentrische Kontraktionen (drei Sätze von zehn Kontraktionen; jeder Satz von einem 4 Minuten Ruhezeit getrennt). </li></ol> 6. Isometrische zucken Drehmoment (tibiotarsalen Erweiterung) <ol><li> Wiederholen Sie die twitch-Protokoll oben, aber statt den Elektroden senkrecht zur Haut-und proximal der ursprünglichen Platzierung der Elektroden für die Flexion-Protokoll. Der N. tibialis stimuliert wird, wie es Kurse kaudal und distal im gastrocnemious Muskelbäuche. Anregend und Paired Referenzelektroden sind tief in die Muskulatur caudal gelegt und genau proximal der zu ersticken. Der ungefähre Zeitpunkt der Platzierung wird entlang einer Linie, die 90o Winkel der Kniegelenke (Knie) gebildet halbiert. Da der Nerv liegt tiefer (und caudal) der N. peronaeus, sollten die Elektroden in verschiedenen Bereichen gesetzt werden, um die optimale zucken Potenziale zu entlocken. Dies ist eine kritische Komponente des Verfahrens. Hinweis: Drehmoment Kurven für tibiotarsalen zucken und Tetanie wird relativ zu tibiotarsalen Flexion Kurven invertiert angezeigt. </li></ol> 7. Isometrische tetanische Drehmoment (tibiotarsalen Erweiterung) <ol><li> Ohne sich zu bewegen die Elektroden, ändern Sie den Stimulator-Einstellungen auf 50 Hz für 1,5 sec und ermöglichen den externen Trigger-Funktion. Dadurch kann der Stimulator von der Software aktiviert werden. </li><li> Software-Einstellungen auf: 50 Hz für 1,5 sec und ermöglichen den externen Trigger-Funktion. Dadurch kann der Stimulator von der Software aktiviert werden. </li><li> Software-Einstellungen: Das gleiche isometrische Kontraktion Protokoll ist für die Tetanus-wie für die twitch verwendet. Angenommen, der stimulierenden Elektroden nicht bewegt worden sind, Begin und Done werden ausgewählt, um die Tetanus zu erzeugen. </li><li> In der isometrischen Protokoll zu einem Tetanus zu erzeugen, wird der Stimulator von der Software auf das richtige Timing zu halten ausgelöst. Speichern Sie die tetanische Reaktion in den Pop-up-Fenster Datei speichern. </li></ol> 8. Datenanalyse <ol><li> Dynamische Muskel-Analyse (DMA)-Programm (Aurora Scientific) wird verwendet, um das Drehmoment und zeitlichen Informationen aus zucken, tetanische und exzentrische Kontraktionen gesammelt zu erhalten. </li><li> Das Ausführen des DMA-Programm: Die Software kann von Zeit zu Zeit überarbeitet werden, daher Anweisungen sind nachfolgend die für die aktuelle Software-Version, die wir verwenden zur Verfügung gestellt. Wenn der DMA-Software geöffnet wird es nicht läuft. So aktivieren Sie das Programm, wählen Sie den weißen Pfeil in der linken oberen Ecke. Der DMA-Software hat eine Reihe von Funktionen, aber für unsere Zweckes, nur ein paar relevante Funktionen beschrieben werden. Legen Sie eine Datei zu analysieren: Die neu laden jüngsten Daten-Datei oder eine neue Datei Popup-Fenster erscheint, wenn der DMA-Programm gestartet. Wählen Sie Neu, im nächsten Fenster wählen Sie Labview, im nächsten Fenster wählen Sie den entsprechenden Ordner und Dateien, wählen Sie Öffnen. Wählen Sie Filter entfernen Plot, um dieses Fenster zu entfernen. Geben Sie einen Filter-Frequenz in der Cut-off Frequenz angezeigt. Optimal Filterfrequenz müssten auf der Grundlage der Daten zu beurteilen bestimmt werden. Als Beispiel verwenden wir 30 Hz für unsere isometrische Antworten und 10 Hz für den exzentrischen Reaktionen. Aktivieren Sie das gefilterte Daten-Taste. Wählen Sie unter Zeichnen von Daten, wählen Sie Gefilterte Force. Mit den beiden Schiebereglern am unteren Rand, um die Anzeige zu erweitern und bewegen sich durch die Datei. </li><li> Twitch-Analyse (Abb. 1): Angenommen, die Datei geladen wird und die obigen Schritte abgeschlossen sind, stellen Sie die Position des Cursors: Es gibt 3 Cursor: (1) blau, (2) gelb und (3) weiß. Für isometrische Zuckungen und tetani oder andere isometrische Kontraktionen, der blaue an der Stelle, wo Drehmoment erhöht sich von der Ruhe Drehmoment eingestellt, die gelb ist dort platziert, wo das Drehmoment kehrt Ruhe Drehmoment (dh nach der Phase der Entspannung), der weiß ist, platziert rechts neben der gelben Cursor (nicht erforderlich). Der Cursor sind leicht mit der linken Taste der Maus gedrückt und ziehen Sie den ausgewählten Cursor an die gewünschte Position bewegt. Führen Sie die Analyse: Wenn der Cursor positioniert sind, wählen Sie Muscle Analysis, dann Show Results. Auf den analysierten Daten Muscle Ergebnisse up-Fenster Pop, gibt eine Reihe von Variablen wie Maximum Force angezeigt; Baseline Force; ½ Relaxationszeit, etc. Die Daten werden für die Drehmoment-Reaktionszeit, die zwischen Cursor 1 (blau) und 2 (gelb liegt vorgestellt ). Alle diese Variablen oder Variablen kann auf eine Daten-Datei protokolliert werden, aber dieser Prozess ist nicht beschrieben. Wenn ein Daten-Log nicht eingerichtet ist, müssten die Daten von Hand erfasst werden. Wählen Sie Fenster schließen, um zum Hauptbildschirm zurückzukehren. Wählen Sie Exit-Programm, um die DMA zu schließen, und wählen Sie dann den weißen Pfeil auf die Analyse von einer neuen Datei beginnen. </li><li> Tetanie-Analyse (Abb. 2): Die gleichen Schritte wie oben für die twitch beschrieben. </li><li> Exzentrisch-Analyse (Abb. 3): Der exzentrische Analyse erfordert mehrere Schritte zum Einrichten und nutzt alle 3 Cursor. Wenn der exzentrische Drehmoment Antwort ist negativ (dh, das Drehmoment Kurven erscheinen in der Richtung nach unten), kann es durch die Eingabe -1 in der Reference Area (cm ²) Box (Drehmomentwerte sind unverändert) invertiert werden, und wählen Sie nicht normalisieren, die Button kehrt, um anzuzeigen, die Daten wurden normalisiert (in diesem Fall invertiert). Geben Sie die gewünschte Grenzfrequenz (zB 10 Hz), und wählen Sie ungefilterte Daten auf die Schaltfläche, um gefilterte Daten Verwenden Sie umgekehrt, nun gefilterten Daten für die Analyse verwendet werden. Positionieren Sie den blauen Cursor an die Stelle, wo isometrische Drehmoment beginnt zu ruhen Drehmoment steigen, positionieren Sie den gelben Cursor an die Stelle, wo der exzentrische Dehnung Drehmoment beginnt, sich von der isometrischen Plateau (siehe Abbildung unten) steigen; Position der weißen Cursor an Drehmoment wieder Ruhe-Drehmoment. Wählen Sie Muscle Analysis, dann Show Results. Auf den analysierten Daten Muscle Ergebnisse Popup-Fenster können Sie die Daten zwischen Cursor 1 (blau) und 2 (gelb) für die isometrische Drehmoment Daten oder zwischen Cursor 2 (gelb) und 3 (weiß) für den exzentrischen Drehmoment Daten. Alle diese Variablen oder Variablen kann auf eine Daten-Datei protokolliert werden, aber dieser Prozess ist nicht beschrieben. Wenn ein Daten-Log nicht eingerichtet ist, müssten die Daten von Hand erfasst werden. Wählen Sie Fenster schließen, um zum Hauptbildschirm zurückzukehren. Wählen Sie Exit-Programm, um die DMA zu schließen, und wählen Sie dann den weißen Pfeil auf die Analyse von einer neuen Datei beginnen. </li></ol> 9. Repräsentative Ergebnisse <ol><li> Twitch Drehmoment: Tibia Nervenstimulation (1 Hz) aktiviert einzelnen Zuckungen tibiotarsalen Streckmuskeln (Abb. 1). Beachten Sie, dass die Y-Achse &quot;Kraft&quot; bedeutet; Drehmoment (das Produkt aus Kraft und Weg) wird durch den Benutzer berechnet. Wir messen die Länge der Pfote (von der Drehachse bis zum Ende der seitlichen stellig). Diese Länge ist der Abstand (Hebelarm) verwendet werden, um das Drehmoment (Nm) zu bestimmen. </li><li> Isometrische tetanische Drehmoment (tibiotarsalen Erweiterung): tibial Nervenstimulation tetanized tibiotarsalen Streckmuskeln (1,5 sec Zug von 50Hz Pulse). Wir verwendeten Dynamische Muscle Control-Computer-Software (DMC, Aurora Scientific, Inc.) auf die Stimulation Zeitsteuerung und Drehmoment Antworten (Abb. 2) zu erfassen. </li><li> Exzentrische Protokoll: Der exzentrische Kontraktionen wurden in den tibiotarsalen Beuger durchgeführt. Perkutane peronaeus stimulATION aktiviert eine erste isometrische Kontraktion durch gemeinsame Rotation gefolgt verursacht Verlängerung der aktivierten Beugemuskeln (exzentrische Kontraktion; Abb. 3). 6 </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2623/2623fig1.jpg" alt="Abbildung 1" /> Abbildung 1. Platzierung des blauen (# 1), gelb (# 2) und Weiß (# ​​3) Cursor auf ein Zucken zu analysieren. Ein Vertreter Screenshot der DMA-Software ist für tibiotarsalen Erweiterung Zucken in einem gesunden 13 kg Hund gezeigt. Beachten Sie, dass für die spätere Analyse durch die Software durchgeführt, die Daten in eine Tabellenkalkulation, und die Kraft-Ausgang (gezeigt in der Figur als Force (g), um das Drehmoment (Nm). Drehmoment umgewandelt werden kann, ist durch das Produkt aus Kraft berechnet und gehen in den Export Hebelarm Abstand (in diesem Abstand = Länge von der Drehachse um seitliche Stelle der Pfote gemessen). <img src="/files/ftp_upload/2623/2623fig2.jpg" alt="Abbildung 2" /> Abbildung 2. Platzierung des blauen (# 1), gelb (# 2) und Weiß (# ​​3) Cursor zu analysieren Tetanus. Ein Vertreter Bildschirm des DMA-Software Schuss ist für tibiotarsalen Erweiterung Tetanie, dasselbe Tier gezeigt, wie in Abb. 1 dargestellt. <img src="/files/ftp_upload/2623/2623fig3.jpg" alt="Abbildung 3" /> Abbildung 3. Platzierung des blauen (# 1), gelb (# 2) und Weiß (# ​​3) Cursor, um einen exzentrischen Stretch-Verletzungen Kontraktion zu analysieren. Ein Vertreter Screenshot der DMA-Software ist für einen einzigen exzentrischen Stretch-Verletzungen Kontraktion in einem gesunden 13 kg Hund gezeigt. Die erste Plateau (grüne Linie) zeigt die isometrische Phase der Kontraktion. Die isometrische Phase wird durch eine exzentrische (Stretch)-Phase, wie durch die schnelle Spitzenleistung in der grünen Linie folgen. Wiederholte exzentrische Kontraktionen in der Regel in einem stetigen Rückgang der isometrischen Drehmoments führen.

<ol>
	<li>Childers, M. K., Okamura, C. S., Bogan, D. J., Bogan, J. R., Petroski, G. F., McDonald, K., Kornegay, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eccentric+contraction+injury+in+dystrophic+canine+muscle.">Eccentric contraction injury in dystrophic canine muscle.</a> Arch Phys Med Rehabil. 83, 1572-1578 (2002).</li><li>Childers, M. K., Okamura, C. S., Bogan, D. J., Bogan, J. R., Sullivan, M. J., Kornegay, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myofiber+injury+and+regeneration+in+a+canine+homologue+of+Duchenne+muscular+dystrophy.">Myofiber injury and regeneration in a canine homologue of Duchenne muscular dystrophy.</a> Am J Phys Med Rehabil. 80, 175-181 (2001).</li><li>MK, C. h. i. l. d. e. r. s., JT, S. t. a. l. e. y., JN, K. o. r. n. e. g. a. y., KS, M. c. D. o. n. a. l. d. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skinned+single+fibers+from+normal+and+dystrophin-deficient+dogs+incur+comparable+stretch-induced+force+deficits.">Skinned single fibers from normal and dystrophin-deficient dogs incur comparable stretch-induced force deficits.</a> Muscle Nerve. 31, 768-771 (2005).</li><li>Kornegay, J. N., Bogan, D. J., Bogan, J. R., Childers, M. K., Cundiff, D. D., Petroski, G. F., Schueler, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contraction+force+generated+by+tarsal+joint+flexion+and+extension+in+dogs+with+golden+retriever+muscular+dystrophy.">Contraction force generated by tarsal joint flexion and extension in dogs with golden retriever muscular dystrophy.</a> J Neurol Sci. 166, 115-121 (1999).</li><li>Liu, J. M., Okamura, C. S., Bogan, D. J., Bogan, J. R., Childers, M. K., Kornegay, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+prednisone+in+canine+muscular+dystrophy.">Effects of prednisone in canine muscular dystrophy.</a> Muscle Nerve. 30, 767-773 (2004).</li><li>Tegeler, C. J., Grange, R. W., Bogan, D. J., Markert, C. D., Case, D., Kornegay, J. N., Childers, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eccentric+contractions+induce+rapid+isometric+torque+drop+in+dystrophin-deficient+dogs.">Eccentric contractions induce rapid isometric torque drop in dystrophin-deficient dogs.</a> Muscle Nerve. 42, 130-132 (2010).</li><li>Allen, D. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Damage+to+skeletal+muscle+from+eccentric+exercise.">Damage to skeletal muscle from eccentric exercise.</a> Exerc Sport Sci Rev. 33, 98-104 (2005).</li><li>Warren, G. L., Lowe, D. A., Armstrong, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+tools+used+in+the+study+of+eccentric+contraction-induced+injury.">Measurement tools used in the study of eccentric contraction-induced injury.</a> Sports Med. 27, 43-59 (1999).</li></ol>

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Dieses Protokoll wird verwendet, um große Tier Muskelfunktion in vivo zu analysieren, zu bewerten, dokumentieren und zu bestimmen Wirksamkeit der Behandlung Interventionen oder biologischen Eigenschaften des Fortschreitens der Erkrankung dokumentieren. 1-6 Tiere Positionierung, des Körpers Platzierung und die Platzierung der Elektroden sind wichtige Variablen, die erhebliche Auswirkungen auf Ergebnisse. In einer Vorstudie bedeuten alveolare Konzentration (MAC)-Werte für Isofluran hatte keinen signifikanten Einfluss Kraftmessungen (Schueler RO, Koch H, Kornegay JN, unveröffentlichte Daten, 1993). Hardware und Software sind kommerziell erhältlich und Methoden etabliert. 7, 1,2,8,4,9-11,6,12 Es wird empfohlen, dass Benutzer und erhalten die Software und Geräte beschrieben, wenn nach diesem Protokoll. Änderungen: Einschränkungen des derzeitigen Servomotor gehören Körpermasse von ca. 23 kg und Pfote Länge von 20cm. Beachten Sie, dass das Drehmoment begrenzen ist ~ 8 N-Meter für die Drehmoment-Sensor (Modell 310LR) hier beschrieben. Dieser Wert kann durch normale Hunde nach 6 Monaten oder älter überschritten werden. Mögliche Änderungen an dem aktuellen Protokoll gehören die Aktualisierung der Software und den Drehmomentbereich des Wandlers zu erhöhen. Aurora Scientific stellt ein Glied Positioniereinrichtung für große Tiere, die für den stereotaktischen Rahmen in der aktuellen Protokoll ersetzt werden können. Diese Methode wurde erfolgreich auf andere Tiermodelle angewandt worden, einschließlich der nicht-menschlichen Primaten.

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Reagenzes </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th><th> Kommentare (optional) </th></tr><tr><td> Stimulationselektroden </td><td> Teca </td><td> 25mmx26G </td><td> Sterile monopolare Nadelelektroden </td></tr><tr><td> Stimulator </td><td> Gras </td><td> S88X </td><td></td></tr><tr><td> Stimulus Isolation Unit </td><td> Gras </td><td> SIU-C </td><td></td></tr><tr><td> Muscle Hebel-System </td><td> Aurora Scientific </td><td> 310C-LR </td><td> Fußplatte Option </td></tr><tr><td> Signal-Schnittstelle </td><td> Aurora Scientific </td><td> Serie 604A </td><td></td></tr><tr><td> Dynamische Muscle Control &amp; Analysis Software </td><td> Aurora Scientific </td><td> Aurora Scientific </td><td></td></tr><tr><td> PC / Monitor </td><td> Aurora Scientific </td><td> Windows XP-Computer </td><td></td></tr><tr><td> Limb Position Gerät </td><td> Aurora Scientific </td><td> NA </td><td> Kann für stereotaktischen Rahmen ersetzt werden </td></tr><tr><td> Tabelle </td><td> Northstar Customs, LLC </td><td> NA </td><td> Custom made Tabelle </td></tr><tr><td> Flexible Verpackung für paw Verbundenheit mit Pedal </td><td> Andover </td><td> PetFlex (5cmx2m) </td><td> Können wiederverwendet werden ein oder zwei Mal </td></tr></tbody></table>

in vivo canine muscle function assay

Wir beschreiben eine minimal-invasive und reproduzierbare Methode zu Eckzahn Beckengliedmaße Muskelkraft und Reaktion auf wiederholte exzentrische Kontraktionen zu messen. Die Becken-Bein eines narkotisierten Hund ist in einem stereotaktischen Rahmen der Tibia im rechten Winkel zum Femur align immobilisiert. Adhesive wrap bringt die Pfote auf ein Pedal auf der Welle eines Servomotors an Drehmoment messen montiert. Perkutane Nervenstimulation aktiviert Beckengliedmaße Muskeln der Pfote, um entweder push (erweitern) oder ziehen (flex) gegen das Pedal, um isometrische Drehmoment erzeugen. Perkutane tibialis Stimulation aktiviert tibiotarsalen Streckmuskeln. Wiederholte Exzenter (Verlängerung) Kontraktionen werden in der tibiotarsalen Beugemuskeln durch perkutane peronaeus Stimulation induziert wird. Der exzentrische Protokoll besteht aus einer ersten isometrische Kontraktion durch eine erzwungene Dehnung durch den Stellmotor verhängt gefolgt. Die Rotation effektiv verlängert den Muskel, während es Verträge, zB einer exzentrischen Kontraktion. Während der Stimulation Beugemuskeln sind ein 800 msec isometrische und 200 msec exzentrischen Kontraktion unterworfen. Dieses Verfahren wird alle 5 Sekunden wiederholt. Um zu vermeiden, Müdigkeit, folgt 4 min ruhen alle 10 Kontraktionen mit einer Gesamtfläche von 30 Kontraktionen durchgeführt.

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In Vivo Canine Muscle Function Assay

Wir beschreiben eine minimal-invasive und schmerzfreie Methode, Hunde Hinterlauf der Muskelkraft und der Reaktion auf wiederholte exzentrische Kontraktionen zu messen.

In Vivo Canine Muscle Function Assay

We describe a minimally-invasive and reproducible method to measure canine pelvic limb muscle strength and muscle response to repeated eccentric 
...

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16.7K Aufrufe.  Wake Forest University. Wir beschreiben eine minimal-invasive und schmerzfreie Methode, Hunde Hinterlauf der Muskelkraft und der Reaktion auf wiederholte exzentrische Kontraktionen zu messen.

Serie: In Vivo Canine Muscle Function Assay

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under physiologic conditions the endothelium is impermeable to albumin, so Evans blue bound albumin remains restricted within blood vessels. In pathologic conditions that promote increased vascular permeability endothelial cells partially lose their close contacts and the endothelium becomes permeable to small proteins such as albumin. This condition allows for extravasation of Evans Blue in tissues. A healthy endothelium prevents extravasation of the dye in the neighboring vascularized tissues. Organs with increased permeability will show significantly increased blue coloration compared to organs with intact endothelium. The level of vascular permeability can be assessed by simple visualization or by quantitative measurement of the dye incorporated per milligram of tissue of control versus experimental animal/tissue. Two powerful aspects of this assay are its simplicity and quantitative characteristics. Evans Blue dye can be extracted from tissues by incubating a specific amount of tissue in formamide. Evans Blue absorbance maximum is at 620 nm and absorbance minimum is at 740 nm. By using a standard curve for Evans Blue, optical density measurements can be converted into milligram dye captured per milligram of tissue. Statistical analysis should be used to assess significant differences in vascular permeability.

An in vivo Assay to Test Blood Vessel Permeability

We are presenting an in vivo assay to test blood vessel permeability. This assay is based on intravenous injection of a dye and subsequent visualization of its diffusion into interstitial spaces.

Ein<em&gt; In vivo</em&gt; Assay Blood Vessel Durchlässigkeitsprüfung

This method is based on the intravenous injection of Evans Blue in mice as the test animal model. Evans blue is a dye that binds albumin. Under ...

Forschung

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In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. Here, we describe a general protocol for cell labeling, imaging, and image processing. The technique is applicable to various cell types and animal models, although here we focus on a typical mouse model for tracking murine immune cells. The most important issues for cell labeling are described, as these are relevant to all models. Similarly, key imaging parameters are listed, although the details will vary depending on the MRI system and the individual setup. Finally, we include an image processing protocol for quantification. Variations for this, and other parts of the protocol, are assessed in the Discussion section. Based on the detailed procedure described here, the user will need to adapt the protocol for each specific cell type, cell label, animal model, and imaging setup. Note that the protocol can also be adapted for human use, as long as clinical restrictions are met.

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

We describe a general protocol for in vivo cell tracking using MRI in a mouse model with ex vivo labeled cells. A typical protocol for cell labeling, image acquisition processing and quantification is included.

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In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

High-throughput Flow Cytometry Cell-based Assay to Detect Antibodies to N-Methyl-D-aspartate Receptor or Dopamine-2 Receptor in Human Serum

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases in children and adults. These antibodies have been used to guide diagnosis and treatment. Cell-based assays have improved the detection of antibodies in patient serum. They are based on the surface expression of brain antigens on eukaryotic cells, which are then incubated with diluted patient sera followed by fluorochrome-conjugated secondary antibodies. After washing, secondary antibody binding is then analyzed by flow cytometry. Our group has developed a high-throughput flow cytometry live cell-based assay to reliably detect antibodies against specific neurotransmitter receptors. This flow cytometry method is straight forward, quantitative, efficient, and the use of a high-throughput sampler system allows for large patient cohorts to be easily assayed in a short space of time. Additionally, this cell-based assay can be easily adapted to detect antibodies to many different antigenic targets, both from the central nervous system and periphery. Discovering additional novel antibody biomarkers will enable prompt and accurate diagnosis and improve treatment of immune-mediated disorders.

Over the recent years, live cell-based assays have been used successfully to detect antibodies against surface and conformational antigens. Here, we describe a method using high-throughput flow cytometry enabling the analysis of large cohorts of patients. Detection of novel antibodies will improve diagnosis and treatment of immune-mediated disorders.

Hochdurchsatz-Durchflusszytometrie zellbasierten Assay auf Antikörper gegen N-Methyl-D-Aspartat-Rezeptor oder Dopamin-2-Rezeptor im menschlichen Serum Detect

Over the recent years, antibodies against surface and conformational proteins involved in neurotransmission have been detected in autoimmune CNS diseases ...

Assessment of Right Ventricular Structure and Function in Mouse Model of Pulmonary Artery Constriction by Transthoracic Echocardiography

Emerging clinical data support the notion that RV dysfunction is critical to the pathogenesis of cardiovascular disease and heart failure1-3. Moreover, the RV is significantly affected in pulmonary diseases such as pulmonary artery hypertension (PAH). In addition, the RV is remarkably sensitive to cardiac pathologies, including left ventricular (LV) dysfunction, valvular disease or RV infarction4. To understand the role of RV in the pathogenesis of cardiac diseases, a reliable and noninvasive method to access the RV structurally and functionally is essential.
A noninvasive trans-thoracic echocardiography (TTE) based methodology was established and validated for monitoring dynamic changes in RV structure and function in adult mice. To impose RV stress, we employed a surgical model of pulmonary artery constriction (PAC) and measured the RV response over a 7-day period using a high-frequency ultrasound microimaging system. Sham operated mice were used as controls. Images were acquired in lightly anesthetized mice at baseline (before surgery), day 0 (immediately post-surgery), day 3, and day 7 (post-surgery). Data was analyzed offline using software.
Several acoustic windows (B, M, and Color Doppler modes), which can be consistently obtained in mice, allowed for reliable and reproducible measurement of RV structure (including RV wall thickness, end-diastolic&#160;and end-systolic dimensions), and function (fractional area change, fractional shortening, PA peak velocity, and peak pressure gradient) in normal mice and following PAC.
Using this method, the pressure-gradient resulting from PAC was accurately measured in real-time using Color Doppler mode and was comparable to direct pressure measurements performed with a Millar high-fidelity microtip catheter. Taken together, these data demonstrate that RV measurements obtained from various complimentary views using echocardiography are reliable, reproducible and can provide insights regarding RV structure and function. This method will enable a better understanding of the role of RV cardiac dysfunction.

Right ventricle (RV) dysfunction is critical to the pathogenesis of cardiovascular disease, yet limited methodologies are available for its evaluation. Recent advances in ultrasound imaging provide a noninvasive and accurate option for longitudinal RV study. Herein, we detail a step-by-step echocardiographic method using a murine model of RV pressure overload.

Beurteilung der rechtsventrikulären Struktur und Funktion in Maus-Modell der Lungenarterie Verengung durch transthorakale Echokardiographie

Emerging clinical data support the notion that RV dysfunction is critical to the pathogenesis of cardiovascular disease and heart failure1-3. Moreover, ...

Early Detection of Drug-Induced Renal Hemodynamic Dysfunction Using Sonographic Technology in Rats

The kidney normally functions to maintain hemodynamic homeostasis and is a major site of damage caused by drug toxicity. Drug-induced nephrotoxicity is estimated to contribute to 19- 25% of all clinical cases of acute kidney injury (AKI) in critically ill patients. AKI detection has historically relied on metrics such as serum creatinine (sCr) or blood urea nitrogen (BUN) which are demonstrably inadequate in full assessment of nephrotoxicity in the early phase of renal dysfunction. Currently, there is no robust diagnostic method to accurately detect hemodynamic alteration in the early phase of AKI while such alterations might actually precede the rise in serum biomarker levels. Such early detection can help clinicians make an accurate diagnosis and help in in decision making for therapeutic strategy. Rats were treated with Cisplatin to induce AKI. Nephrotoxicity was assessed for six days using high-frequency sonography, sCr measurement and upon histopathology of kidney. Hemodynamic evaluation using 2D and Color-Doppler images were used to serially study nephrotoxicity in rats, using the sonography. Our data showed successful drug-induced kidney injury in adult rats by histological examination. Color-Doppler based sonographic assessment of AKI indicated that resistive-index (RI) and pulsatile-index (PI) were increased in the treatment group; and peak-systolic velocity (mm/s), end-diastolic velocity (mm/s) and velocity-time integral (VTI, mm) were decreased in renal arteries in the same group. Importantly, these hemodynamic changes evaluated by sonography preceded the rise of sCr levels. Sonography-based indices such as RI or PI can thus be useful predictive markers of declining renal function in rodents. From our sonography-based observations in the kidneys of rats that underwent AKI, we showed that these noninvasive hemodynamic measurements may consider as an accurate, sensitive and robust method in detecting early stage kidney dysfunction. This study also underscores the importance of ethical issues associated with animal use in research.

Early stage hemodynamic dysfunction is critical to the development of kidney disease. Yet, detection methodologies are limited. Recent advances in sonography provide a noninvasive, accurate option for early detection of kidney injury. This study outlines a step-by-step, sonographic methodology for detecting kidney dysfunction using a drug-induced nephrotoxicity rat model.

Früherkennung von Medikamenten-induzierten Nieren hämodynamischen Dysfunktion Mit sonographische Technologie bei Ratten

The kidney normally functions to maintain hemodynamic homeostasis and is a major site of damage caused by drug toxicity. Drug-induced nephrotoxicity is ...

Ultrasound Based Assessment of Coronary Artery Flow and Coronary Flow Reserve Using the Pressure Overload Model in Mice

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow reserve (CFR) in humans. Reduced CFR is accompanied by marked intramyocardial and pericoronary fibrosis and is used as an indication of the severity of dysfunction. This study explores, step-by-step, the real-time changes measured in the coronary flow velocity, CFR and systolic to diastolic peak velocity (S/D) ratio in the setting of an aortic banding model in mice. By using a Doppler transthoracic imaging technique that yields reproducible and reliable data, the method assesses changes in flow in the septal coronary artery (SCA), for a period of over two weeks in mice, that previously either underwent aortic banding or thoracotomy. 
During imaging, hyperemia in all mice was induced by isoflurane, an anesthetic that increased coronary flow velocity when compared with resting flow. All images were acquired by a single imager. Two ratios, (1) CFR, the ratio between hyperemic and baseline flow velocities, and (2) systolic (S) to diastolic (D) flow were determined, using a proprietary software and by two independent observers. Importantly, the observed changes in coronary flow preceded LV dysfunction as evidenced by normal LV mass and fractional shortening (FS). 
The method was benchmarked against the current gold standard of coronary assessment, histopathology. The latter technique showed clear pathologic changes in the coronary artery in the form of peri-coronary fibrosis that correlated to the flow changes as assessed by echocardiography. 
The study underscores the value of using a non-invasive technique to monitor coronary circulation in mouse hearts. The method minimizes redundant use of research animals and demonstrates that advanced ultrasound-based indices, such as CFR and S/D ratios, can serve as viable diagnostic tools in a variety of investigational protocols including drug studies and the study of genetically modified strains.

Coronary flow reserve (CFR) is useful for assessment of myocardial oxygen demand and evaluation of cardiovascular risk. This study establishes a step-by-step transthoracic Doppler echocardiographic (TTDE) method for longitudinal monitoring of the changes in CFR, as measured from coronary artery in mice, under the experimental pressure overload of aortic banding.

Ultraschall Basierend Beurteilung der koronaren Herzfluss und koronare Flussreserve Mit der Drucküberlastung Modell an der Maus

Transthoracic Doppler echocardiography (TTDE) is a clinically useful, noninvasive tool for studying coronary artery flow velocity and coronary flow ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

Depletion von Maus-Zellen aus menschlichem Tumorxenografte deutlich verbessert Downstream-Analyse von Zielzellen

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo and noninvasively in humans via phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS). However, the approach has not been widely adopted in translational and clinical research, with variations in methodology and limited guidance from the literature. Increased optimization, standardization, and dissemination of methods for in vivo 31PMRS would facilitate the development of targeted therapies to improve OXPHOS capacity and could ultimately favorably impact cardiovascular health. 31PMRS produces a noninvasive, in vivo measure of OXPHOS capacity in human skeletal muscle, as opposed to alternative measures obtained from explanted and potentially altered mitochondria via muscle biopsy. It relies upon only modest additional instrumentation beyond what is already in place on magnetic resonance scanners available for clinical and translational research at most institutions. In this work, we outline a method to measure in vivo skeletal muscle OXPHOS. The technique is demonstrated using a 1.5 Tesla whole-body MR scanner equipped with the suitable hardware and software for 31PMRS, and we explain a simple and robust protocol for in-magnet resistive exercise to rapidly fatigue the quadriceps muscle. Reproducibility and feasibility are demonstrated in volunteers as well as subjects over a wide range of functional capacities.

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

This work demonstrates the feasibility of an in vivo phosphorus-31 magnetic resonance spectroscopy (31PMRS) technique to quantify mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity in human skeletal muscle.

Phosphor-31 Magnet-Resonanz-Spektroskopie: Ein Werkzeug zur Messung<em&gt; In Vivo</em&gt; Mitochondrial Oxidative Phosphorylierung Kapazität im menschlichen Skelettmuskel

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include supporting mastication and deglutition, as well as taste-sensing and phonetics. Accordingly, the strength and volume of the tongue can impact the ability of vertebrates to accomplish basic activities such as feeding, communicating, and breathing. Human patients with sleep apnea have enlarged tongues, characterized by reduced muscle tone and increased intramuscular fat that can be visualized and quantified by magnetic resonance imaging (MRI). The abilities to measure force generation and viscoelastic properties of the tongue constitute important tools for obtaining functional information to correlate with imaging data. Here, we present techniques for measuring tongue force production in anesthetized Zucker rats via electrical stimulation of the hypoglossal nerves and for determining the viscoelastic properties of the tongue by applying passive Lissajous force/deformation curves.

In Vivo Evaluation of the Mechanical and Viscoelastic Properties of the Rat Tongue

We describe a surgical procedure in an anesthetized rat model for determining the muscle tone and viscoelastic properties of the tongue. The procedure involves specific stimulation of the hypoglossal nerves and application of passive Lissajous force/deformation curves to the muscle.

In vivo Auswertung der mechanischen und viskoelastischen Eigenschaften der Rattenzunge

The tongue is a highly innervated and vascularized muscle hydrostat on the floor of the mouth of most vertebrates. Its primary functions include ...

Skeletal Muscle Neurovascular Coupling, Oxidative Capacity, and Microvascular Function with 'One Stop Shop' Near-infrared Spectroscopy

Exercise represents a major hemodynamic stress that demands a highly coordinated neurovascular response in order to match oxygen delivery to metabolic demand. Reactive hyperemia (in response to a brief period of tissue ischemia) is an independent predictor of cardiovascular events and provides important insight into vascular health and vasodilatory capacity. Skeletal muscle oxidative capacity is equally important in health and disease, as it determines the energy supply for myocellular processes. Here, we describe a simple, non-invasive approach using near-infrared spectroscopy to assess each of these major clinical endpoints (reactive hyperemia, neurovascular coupling, and muscle oxidative capacity) during a single clinic or laboratory visit. Unlike Doppler ultrasound, magnetic resonance images/spectroscopy, or invasive catheter-based flow measurements or muscle biopsies, our approach is less operator-dependent, low-cost, and completely non-invasive. Representative data from our lab taken together with summary data from previously published literature illustrate the utility of each of these end-points. Once this technique is mastered, application to clinical populations will provide important mechanistic insight into exercise intolerance and cardiovascular dysfunction.

Skeletal Muscle Neurovascular Coupling, Oxidative Capacity, and Microvascular Function with &#039;One Stop Shop&#039; Near-infrared Spectroscopy

Here, we describe a simple, non-invasive approach using near-infrared spectroscopy to assess reactive hyperemia, neurovascular coupling and skeletal muscle oxidative capacity in a single clinic or laboratory visit.

Skelettmuskulatur neurovaskuläre Kopplung, Oxidative Kapazität und mikrovaskuläre Funktion mit "One Stop Shop" Nah-Infrarot-Spektroskopie

Exercise represents a major hemodynamic stress that demands a highly coordinated neurovascular response in order to match oxygen delivery to metabolic ...