Die Forschung hier vorgestellte wurde von Charles River unterstützt.

<ol>
	<li>Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+routes+of+administration+and+factors+to+consider.">Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider.</a> JAALAS. 50, 600-613 (2011).</li><li>Diehl, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+good+practice+guide+to+the+administration+of+substances+and+removal+of+blood,+including+routes+and+volumes.">A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes.</a> J. Appl. Toxicol. 21, 15-23 (2001).</li><li>Hurst, J. L., West, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Taming+anxiety+in+laboratory+mice.">Taming anxiety in laboratory mice.</a> Nat. Methods. 7, 825-826 (2010).</li><li>Maurer, B. M., D&#246;ring, D., Scheipl, F., K&#252;chenhoff, H., Erhard, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+a+gentling+programme+on+the+behaviour+of+laboratory+rats+towards+humans.">Effects of a gentling programme on the behaviour of laboratory rats towards humans.</a> Appl. Anim. Behav. Sci. 111, 329-341 (2008).</li><li>Cloutier, S., Newberry, R. 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A., Brabb, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Administration+of+substances+to+laboratory+animals:+equipment+considerations,+vehicle+selection,+and+solute+preparation.">Administration of substances to laboratory animals: equipment considerations, vehicle selection, and solute preparation.</a> JAALAS. 50, 614-627 (2011).</li><li>Lukas, G., Brindle, S. D., Greengard, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+route+of+absorption+of+intraperitoneally+administered+compounds.">The route of absorption of intraperitoneally administered compounds.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 178, 562-564 (1971).</li><li>AALAS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Mouse Handbook. , (2009).</li><li>AALAS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> LAT Training Manual. , (2009).</li><li>AALAS. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> LATg Training Manual. , (2009).</li><li>Barnett, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Manual of Animal Technology. , 440 (2007).</li><li>Baumans, V., Pekow, C. A., Hau, J., Schapiro, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Laboratory Animal Science. 1, 401-446 (2010).</li><li>Bogdanske, J. J., Hubbard-Van Stelle, S., Riley, M. R., Schiffman, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Laboratory Mouse Procedural Techniques. , (2011).</li><li>Danneman, P., Suckow, M. A., Brayton, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Laboratory Mouse. , (2000).</li><li>Sharp, P. E., La Regina, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Laboratory Rat. , (1998).</li></ol>

Die Autoren sind Mitarbeiter von Charles River.

Dieses Protokoll sollte als Einführung in die Behandlung der Tiere und Substanz Verwaltung soll zu ergänzen Hands-on Training in der Forscher die Anlage zur Verfügung gestellt angesehen werden. Die Mittel der Zurückhaltung, die verwendet werden die Routen des Stoffes Verwaltung sollte im experimentellen Design berücksichtigt werden und wenn die Forschungseinrichtung Protokoll oder Ethikkommission Protokoll geschrieben wird. Training in Zusammenhang mit Tieren Verfahren ist entscheidend für den Erfolg der Forschung. Für die meisten Experimente durchzuführen, müssen die Tiere von wissenschaftlichen Mitarbeitern bearbeitet werden, und desto besser ist die Behandlung der Tiere, die weniger gestresst das Tier 3. Gewöhnen Tiere sanften menschlichen Kontakt kann Stress reduzieren und machen Tiere gefügiger Versuchspersonen 4,5. Umgang mit Stress wurde gezeigt, dass einige Arten von Forschung 6 beeinflussen, und es ist möglich, es können auch andere beeinflussen. Restraint von Nagetieren sollte mit Vorsicht durchgeführt werden, aber fest Handhabung (eine vorläufigeGriff ist wahrscheinlich zu Verletzungen Nager und Hundeführer führen) und sollte für die kürzest mögliche Dauer praktischen sein. Rückhaltesystem Methoden werden in der Regel auf Basis der Größe des Tieres gewählt oder der Zugriff gesucht. Zum Beispiel, Handhabung erwachsenen Ratten durch das Genick ist zwar möglich, wird oft mit starken Widerstand von der Ratte erfüllt, vor allem, wenn der Hundeführer unerfahren ist. Holding eine Maus oder Ratte von Hand den Zugang zu den Schwanzvenen schwierig und eine Rückhalteeinrichtung wird oft gewählt, um das Tier so still wie möglich zu halten. Wenn Forscher Tieren zu behandeln, sind sie oft versucht, eine Verbindung oder ein biologisches für weitere Untersuchungen zu verabreichen. Der Verabreichungsweg kann die Absorption von Substanzen, Bioverfügbarkeit und eine Eignung für einen bestimmten Experiment beeinflussen. Vertrautheit mit verschiedenen Routen sollten Forscher mit der Fähigkeit, ihre Substanz in der besten möglichen Weise für ihre Forschung zu verwalten bieten. Zum Beispiel kann eine Route, die eine schnelle Absorption eines Stoffes fördert, Wie intravenöse oder intraperitoneale, sollten nicht verwendet werden, wenn die Forscher möchte, um die Substanz in einer langsameren wirkender Weise zu verabreichen. Aktuelle Bewertungen einiger dieser Techniken und Überlegungen für die Lautstärke, Ausrüstung und gelöste Stoff kann in zwei Arbeiten von Turner et al. 1,7 Werden Stoffe zu Labornagern verabreicht werden, sollte überlegt werden, die richtige Größe der Geräte und Volumen des Stoffes (wie in Tabelle 1) gegeben werden. Falschen Größe oder große Mengen können zu Beschwerden, Verletzungen oder zum Tod des Tieres führen. Generell sind Substanzen parenteral verabreicht sterile, sofern die Forschungsziele würde dies unmöglich (dh bakterielle Studien). Verbindungen und biologischen Materialien sollten in einem gelösten Stoff oder das Fahrzeug, die die geringste Wirkung auf das Tier haben wird. Ein physiologischen pH-Wert (7,3 -7,4) allgemein gut akzeptiert, insbesondere zur subkutanen, intramuskulären und intraperitoneal Routen. Non-physiologischen pH-Werte in-Stoffe durch diese Strecken Applikation können Schmerzen oder Nekrose und Gewebeschäden führen. Wider des pH-Wertes mit intragastrischen und intravenöse Routen 7 vertragen. In kleinen Nagetieren, ist ein weiterer wichtiger Aspekt die Möglichkeit der Kühlung, wenn große Mengen von bei Raumtemperatur Flüssigkeiten gegeben werden. Wenn Fluide werden intravenös oder intraperitoneal, vor allem zur Unterstützung von einem kranken Tier verabreicht werden, sollten sie auf Körpertemperatur (37 ° C) erwärmt werden. Die Verabreichungswege in diesem Protokoll diskutiert sind diejenigen, häufig in vielen Forschungsprogrammen eingesetzt werden, sind einfach zu meistern, und in der Regel keine Narkose. Eine fast unendliche Vielfalt der Wege der Verabreichung sind jedoch möglich, einschließlich intrakranieller, intrathekale, epidurale, intratracheale intraossären und intraartikuläre, um nur einige zu nennen. Training in dieser spezialisierten Verabreichungswege sollten von Menschen wh gesucht werdeno verfügen über umfangreiche Erfahrung mit der Strecke und gute Ergebnisse. Bei Nagetieren ist die intranasale Route typischerweise verwendet, um Stoffe eingeführt, um die Lunge über ein &quot;natürlicher&quot; zu studieren; Methode als Intratrachealbiopersistenztest. Mäuse und Ratten sind obligate Nasen-Entlüfter, so induzieren sie auf sehr kleine Mengen Flüssigkeit eingeatmet ist nicht schwer, auch in der bewussten Tieren. Da der Nasenschleimhaut wird mit Blutgefäßen, intranasale Verabreichung von einigen Substanzen gut versorgt kann ähnlich intravenöse Verabreichung. Dieser Weg ist nicht bei Tieren mit Rhinitis jedoch empfohlen, da dies die Absorption beeinträchtigen können. Versuche, große Mengen von der intranasale Weg zu verabreichen kann Atemnot oder Ertrinken des Tieres führen. Intramuskuläre Injektionen bieten eine schnelle Absorption von Substanzen. Intramuskuläre Injektionen können bei Ratten und Mäusen aufgrund ihrer geringen Größe und entsprechend kleinen Muskeln Herausforderung sein. Sie werden in der Hinterlauf durchgeführts. Aufgrund der möglichen Schäden der Ischiasnerv ist der quadriceps femoris der Muskel der Wahl. Obwohl sowohl die subkutane und intradermale Wege der Haut beinhalten, gibt es Unterschiede zwischen der Bioverfügbarkeit von Substanzen in die Haut vs der Subkutis platziert. Die subkutane Verabreichung wird oft als eine &quot;Deposition&quot; Strecke mit langsamer Absorption als andere Routen, wie intravenöse oder intraperitoneale. Intradermalen Verabreichung ist für sehr kleine Mengen von Substanzen, in der Regel immunstimulierende Substanzen wie Adjuvans-Antigen-Mischungen verwendet. In beiden Fällen sollte die Substanzen verabreicht des physiologischen pH-Wertes und nicht reizend sein. Intradermale oder subkutane Injektionen sollte nicht in das Genick durchgeführt werden, da es sich um eine allgemein verwendete Site zum Zurückhalten des Nagers. Intravenöse und intraperitoneale Verabreichung werden häufig als gleichwertig Nagetiere. Intravenöse Verabreichung der Dosierung bieten mehr rapid Aufnahme von Verbindungen ist jedoch, während intraperitoneale Verabreichung sollte in Betracht gezogen entspricht in etwa orale Verabreichung 8 werden. Es sollte mit Verbindungen intraperitoneal genommen werden, da sie Schmerzen verursachen, wenn sie unsachgemäß gepuffert. Der gemeinsame Weg der intravenöse Bolus-Gabe bei Nagetieren ist über die Schwanzvene. Wenn chronische intravenöse Verabreichung einer Substanz gewünscht wird, sollte die Implantation von venösen oder arteriellen Kanülen in Betracht gezogen werden. Stoffe intravenös verabreicht aseptisch geliefert werden und sollte sich als sicher erwiesen intravenös zu verabreichen. Beispielsweise sind Substanzen, die Hämolyse, Thrombose oder Vaskulitis induzieren, kann nicht geeignet für die intravenöse Verabreichung. Die intragastrischen oder orale Gabe Route wird oft verwendet, um eine gemeinsame Dosierung beim Menschen Strecke imitieren. Es ermöglicht auch eine genaue Dosierung von Substanzen, wenn auf orale Verabreichung durch die Nahrung und Wasser verglichen. Bioverfügbarkeit von Verbindungenverabreicht über Schlundsonde werden auf der gespeisten / nüchternen Zustand des Tieres sowie der gelöste Stoff oder das Fahrzeug der Verbindung oder des biologischen variieren. Magensonde oder Fütterung Nadeln sollten der entsprechenden Größe für das Tier verwendet, und sollte zwischen Tieren gereinigt werden, wenn Einweg-Sonde Nadeln nicht praktikabel sind. Verletzungen durch eine Magensonde verursacht wurden, sind nicht ungewöhnlich und gehören Abscheidung der Substanz in der Lunge oder Ruptur des Magens oder der Speiseröhre. Die Ausbildung sollte von einem erfahrenen Partei überwacht und durchgeführt am eingeschläfert Tiere zuerst, dann narkotisierten Tieren (das wird eingeschläfert werden), bevor Magensonde am wachen Tier versucht wird. Erste Versuche Schlundsonde am wachen Tier sollte beinhalten mittelgroßen Tieren und kleine Volumina einer Substanz, wie zB Salzlösung, die nicht zu Verletzungen führen, wenn die Prozedur geht schief wird. Tiere sollten engmaschig auf Anzeichen von Leiden, wie Keuchen beurteilt werden, Blaufärbung, Blutungen oder vermehrter Speichelfluss, nachdem eine Magensonde und eingeschläfert, wenn nötig. Wenn euthAnasia erforderlich ist, das Tier seziert sollte, um festzustellen, warum die Sonde fehlgeschlagen werden.

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare </td></tr><tr><td> Needles </td><td> Verschiedene </td><td> Verschiedene </td><td> Nadeln sind sowohl Manometer und Länge verkauft. Überprüfen Sie sowohl vor der Bestellung. </td></tr><tr><td> Spritzen </td><td> Verschiedene </td><td> Verschiedene </td><td> Wählen immer eine geeignete Größe für das Volumen zu verabreichen ist. </td></tr><tr><td> DecapiCones </td><td> Braintree Scientific </td><td> DC-200, DCL-120, MDC-200 </td><td> Erhältlich in Maus und Ratte Größen. </td></tr><tr><td> Rodent restrainer </td><td> Harvard Apparatus, Braintree Scientific, Plas-Labs, andere </td><td></td><td> Erhältlich in klarem Plexiglas, verstellbare Kunststoff und Größe für Mäuse und Ratten. </td></tr><tr><td> 50 ml konischen Röhrchen </td><td> Verschiedene </td><td> &amp; Nbsp; </td><td></td></tr><tr><td> Feeding Nadeln </td><td> VWR, Popper and Sons </td><td> Verschiedene </td><td> Den Nadelabstand und Länge zu den Tieren wie oben beschrieben. Beide Einweg-und Mehrweg-Fütterung Nadeln zur Verfügung. </td></tr></tbody></table>

manual restraint and common compound administration routes in mice and rats

Die Möglichkeit, sicher und effektiv zurückhalten Mäusen und Ratten ist ein wichtiger Teil der Durchführung von Forschung. Arbeiten sicher und menschenwürdig mit Mäusen und Ratten erfordert eine grundlegende Kompetenz in der Handhabung und Zurückhaltung Methoden. Dieser Artikel wird die grundlegenden Prinzipien erforderlich, um sicher zu handhaben Tiere. One-handed, two-handed und Zurückhaltung speziell Zurückhaltung Objekte dargestellt werden. Oft ist ein weiterer Teil der Forschung oder die Prüfung Verwendung von Tieren der effektive Verabreichung von Verbindungen an Mäuse und Ratten. Obwohl es eine große Anzahl von möglichen Applikationswege (begrenzt nur durch die Größe und Organe des Tieres) sind, sind die meisten nicht regelmäßig in der Forschung eingesetzt. Das Video wird veranschaulichen mehrere der häufigeren Routen, einschließlich intravenöse, intramuskuläre, subkutane und orale Gabe. Das Ziel dieses Artikels ist es, einen Viewer vertraut mit diesen Techniken, um grundlegende Zurückhaltung und Substanz Verabreichungswege aussetzen. Dieses Videoersetzt nicht erforderliche praktische Ausbildung in Ihrem Betrieb, sondern soll zu erweitern und zu ergänzen, dass die Ausbildung.

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Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats

Sicheres Arbeiten und menschlich mit Forschung Nager erfordert eine Kernkompetenz in der Handhabung und Zurückhaltung Methoden. Dieser Artikel wird die grundlegenden Prinzipien erforderlich, um sicher zu handhaben und effektiv zu verwalten Verbindungen an Mäusen und Ratten.

Manuelle Restraint und Common Compound Verabreichungswege bei Mäusen und Ratten

Being able to safely and effectively restrain mice and rats is an important part of conducting research.  Working confidently and humanely with mice and ...

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Serie: Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland undergoes extensive modeling and re-modeling, alter susceptibility to carcinogen-induced mammary tumors. Similar findings have been described in humans: for example, high birthweight increases later risk of developing breast cancer, and dietary intake of soy during childhood decreases breast cancer risk. It is thought that these prenatal and postnatal dietary modifications induce persistent morphological changes in the mammary gland that in turn modify breast cancer risk later in life. These morphological changes likely reflect epigenetic modifications, such as changes in DNA methylation, histones and miRNA expression that then affect gene transcription . In this article we describe how changes in mammary gland morphology can predict mammary cancer risk in rats. Our protocol specifically describes how to dissect and remove the rat abdominal mammary gland and how to prepare mammary gland whole mounts. It also describes how to analyze mammary gland morphology according to three end-points (number of terminal end buds, epithelial elongation and differentiation) and to use the data to predict risk of developing mammary cancer.

Our protocol describes how to dissect the rat abdominal mammary gland and how to prepare mammary gland whole mounts. It also describes how to analyze mammary gland morphology using three end-points (number of terminal end buds, epithelial elongation and differentiation) and to use these results to predict mammary cancer risk in rats which were exposed to dietary modifications in utero or during prepuberty.

Änderungen der Brustdrüsen Morphologie und Breast Cancer Risk in Ratten

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland ...

Forschung

Biologie

Diagnostic Necropsy and Selected Tissue and Sample Collection in Rats and Mice

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal colony. Proper collection of tissues for further histological processing can impact the quality of testing results. This article describes the conduct of a basic gross examination including identification of heart, liver, lungs, kidneys, and spleen, as well as how to collect those organs. Additionally four of the more difficult tissue/sample collection techniques are demonstrated. Lung collection and perfusion can be particularly challenging as the tissue needs to be properly inflated with a fixative in order for inside of the tissue to fix properly and to enable thorough histologic evaluation. This article demonstrates the step by step technique to remove the lung and inflate it with fixative in order to achieve optimal fixation of the tissue within 24 hours. Brain collection can be similarly challenging as the tissue is soft and easily damaged. This article demonstrates the step by step technique to expose and remove the brain from the skull with minimal damage to the tissue. The mesenteric lymph node is a good sample type in which to detect many common infectious agents as enteric viruses persist longer in the lymph node than they are shed in feces. This article demonstrates the step by step procedure for locating and aseptically removing the mesenteric lymph node. Finally, identification of infectious agents of the respiratory tract may be performed by bacterial culture or PCR testing of nasal and/or bronchial fluid aspirates taken at necropsy. This procedure describes obtaining and preparing the respiratory aspirate sample for bacterial culture and PCR testing.

This article describes the procedures for conducting a basic postmortem examination of a mouse or rat, and the collection of basic organs, as well as more challenging sample types from for histological, microbiological, and PCR evaluation.

Diagnostic Necropsy und ausgewählte Gewebe und Probenentnahme bei Ratten und Mäusen

There are multiple sample types that may be collected from a euthanized animal in order to help diagnose or discover infectious agents in an animal ...

Ovariectomy and 17&beta;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are commonly ovariectomized in order to ablate the rapidly cycling hormone production, replacing the 17&beta;-estradiol exogenously. There is, however, lack of consensus regarding how the hormone should be administered to obtain physiological serum concentrations. This is crucial since the 17&beta;-estradiol level/administration method profoundly influences the experimental results1-3. We have in a series of studies characterized the different modes of 17&beta;-estradiol administration, finding that subcutaneous silastic capsules and per-oral nut-cream Nutella are superior to commercially available slow-release pellets (produced by the company Innovative Research of America) and daily injections in terms of producing physiological serum concentrations of 17&beta;-estradiol4-6. Amongst the advantages of the nut-cream method, that previously has been used for buprenorphine administration7, is that when used for estrogen administration it resembles peroral hormone replacement therapy and is non-invasive. The subcutaneous silastic capsules are convenient and produce the most stable serum concentrations. This video article contains step-by-step demonstrations of ovariectomy and 17&beta;-estradiol hormone replacement by silastic capsules and peroral Nutella in rats and mice, followed by a discussion of important aspects of the administration procedures.

Ovariectomy and 17&amp;#946;-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration

Ovariectomy and subsequent replacement of 17&beta;-estradiol by means of silastic capsules and peroral Nutella are demonstrated in rats and mice.

Ovariektomie und 17β-Estradiol Ersatz bei Ratten und Mäusen: Die bildliche Darstellung

Estrogens are a family of female sexual hormones with an exceptionally wide spectrum of effects. When rats and mice are used in estrogen research they are ...

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

A unique open reading frame (ORF) Z3276 was identified as a specific genetic marker for E. coli O157:H7. A qPCR assay was developed for detection of E. coli O157:H7 by targeting ORF Z3276. With this assay, we can detect as low as a few copies of the genome of DNA of E. coli O157:H7. The sensitivity and specificity of the assay were confirmed by intensive validation tests with a large number of E. coli O157:H7 strains (n = 369) and non-O157 strains (n = 112). Furthermore, we have combined propidium monoazide (PMA) procedure with the newly developed qPCR protocol for selective detection of live cells from dead cells. Amplification of DNA from PMA-treated dead cells was almost completely inhibited in contrast to virtually unaffected amplification of DNA from PMA-treated live cells. Additionally, the protocol has been modified and adapted to a 96-well plate format for an easy and consistent handling of a large number of samples. This method is expected to have an impact on accurate microbiological and epidemiological monitoring of food safety and environmental source.

Detection of Live Escherichia coli O157:H7 Cells by PMA-qPCR

A qPCR assay was developed for detection of Escherichia coli O157:H7 targeting a unique genetic marker, Z3276. The qPCR was combined with propidium monoazide (PMA) treatment for live cell detection. This protocol has been modified and adapted to a 96-well plate format for easy and consistent handling of numerous samples

Erkennung von Live-<em&gt; Escherichia coli</em&gt; O157: H7-Zellen durch PMA-qPCR

A unique open reading frame (ORF) Z3276 was identified as a specific genetic marker for E. coli O157:H7. A qPCR assay was developed for detection of E. ...

Plant Promoter Analysis: Identification and Characterization of Root Nodule Specific Promoter in the Common Bean

The upstream sequences of gene coding sequences are termed as promoter sequences. Studying the expression patterns of promoters are very significant in understanding the gene regulation and spatiotemporal expression patterns of target genes. On the other hand, it is also critical to establish promoter evaluation tools and genetic transformation techniques that are fast, efficient, and reproducible. In this study, we investigated the spatiotemporal expression pattern of the rhizobial symbiosis-specific nodule inception (NIN) promoter of Phaseolus vulgaris in the transgenic hairy roots. Using plant genome databases and analysis tools we identified, isolated, and cloned the P. vulgaris NIN promoter in a transcriptional fusion to the chimeric reporter &#946;-glucuronidase (GUS) GUS-enhanced::GFP. Further, this protocol describes a rapid and versatile system of genetic transformation in the P. vulgaris using Agrobacterium rhizogenes induced hairy roots. This system generates &#8805;2 cm hairy roots at 10 to 12 days after transformation. Next, we assessed the spatiotemporal expression of NIN promoter in Rhizobium inoculated hairy roots at periodic intervals of post-inoculation. Our results depicted by GUS activity show that the NIN promoter was active during the process of nodulation. Together, the present protocol demonstrates how to identify, isolate, clone, and characterize a plant promoter in the common bean hairy roots. Moreover, this protocol is easy to use in non-specialized laboratories.

Promoter expression analyses are crucial to improving the understanding of gene regulation and the spatiotemporal expression of target genes. Herein we present a protocol to identify, isolate, and clone a plant promoter. Further, we describe the characterization of the nodule-specific promoter in the common bean hairy roots.

Pflanzenanalysen Promoter: Identifizierung und Charakterisierung der Root Knoten bestimmten Promoter in die Gartenbohne

The upstream sequences of gene coding sequences are termed as promoter sequences. Studying the expression patterns of promoters are very significant in ...

Determination of Reproductive Competence by Confirming Pubertal Onset and Performing a Fertility Assay in Mice and Rats

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also termed the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. The reproductive axis is a key integrator of environmental and internal input adapting fertility to favorable conditions for reproduction. Prior to embarking upon a fertility study in mice and rats, sexual maturity is evaluated to exclude the possibility that the observed reproductive phenotypes are caused by delayed or absent pubertal onset. This protocol describes a non-invasive approach to assess pubertal onset in males through the determination of preputial separation, and in females through vaginal opening and first estrus. After the confirmation of the completion of puberty and the achievement of sexual maturity, a fertility study can be initiated. The procedure describes the optimal breeding conditions for mice and rats, how to set up a fertility study, and what parameters to evaluate and determine if the treatment or gene deletion has an impact on fertility.

Many treatments and genetic mutations impact the timing of sexual maturity and fertility. This protocol describes a non-invasive method to evaluate pubertal onset in mice and rats prior to setting up a fertility study in sexually mature animals.

Bestimmung der reproduktive Kompetenz durch Bestätigung pubertären Beginn und Durchführung eines Fruchtbarkeit Assays bei Mäusen und Ratten

Assessment of reproductive competence is critical for understanding the impact of a treatment or genetic manipulation on the reproductive axis, also ...

Loop-Mediated Isothermal Amplification for Screening Salmonella in Animal Food and Confirming Salmonella from Culture Isolation

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) has emerged as a powerful nucleic acid amplification test for the rapid detection of numerous bacterial, fungal, parasitic, and viral agents. Salmonella is a bacterial pathogen of worldwide food safety concern, including food for animals. Presented here is a multi-laboratory-validated Salmonella LAMP protocol that can be used to rapidly screen animal food for the presence of Salmonella contamination and can also be used to confirm presumptive Salmonella isolates recovered from all food categories. The LAMP assay specifically targets the Salmonella invasion gene (invA) and is rapid, sensitive, and highly specific. Template DNAs are prepared from enrichment broths of animal food or pure cultures of presumptive Salmonella isolates. The LAMP reagent mixture is prepared by combining an isothermal master mix, primers, DNA template, and water. The LAMP assay runs at a constant temperature of 65 &#176;C for 30 min. Positive results are monitored via real-time fluorescence and can be detected as early as 5 min. The LAMP assay exhibits high tolerance to inhibitors in animal food or culture medium, serving as a rapid, reliable, robust, cost-effective, and user-friendly method for screening and confirming Salmonella. The LAMP method has recently been incorporated into the U.S. Food and Drug Administration&#8217;s Bacteriological Analytical Manual (BAM) Chapter 5.

Loop-Mediated Isothermal Amplification for Screening Salmonella in Animal Food and Confirming Salmonella from Culture Isolation

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) is an isothermal nucleic acid amplification test (iNAAT) that has attracted broad interest in the pathogen detection field. Here, we present a multi-laboratory-validated Salmonella LAMP protocol as a rapid, reliable, and robust method for screening Salmonella in animal food and confirming presumptive Salmonella from culture isolation.

Loop-vermittelte isotherme Amplifikation zum Screening von Salmonellen in Tierfutter und Bestätigung von Salmonellen aus der Kulturisolierung

Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) has emerged as a powerful nucleic acid amplification test for the rapid detection of numerous bacterial, ...

Divergence of Root Microbiota in Different Habitats based on Weighted Correlation Networks

The root microbiome plays an important role in plant growth and environmental adaptation. Network analysis is an important tool for studying communities, which can effectively explore the interaction relationship or co-occurrence model of different microbial species in different environments. The purpose of this manuscript is to provide details on how to use the weighted correlation network algorithm to analyze different co-occurrence networks that may occur in microbial communities due to different ecological environments. All analysis of the experiment is performed in the WGCNA package. WGCNA is an R package for weighted correlation network analysis. The experimental data used to demonstrate these methods were microbial community data from the NCBI (National Center for Biotechnology Information) database for three niches of the rice (Oryza sativa) root system. We used the weighted correlation network algorithm to construct co-abundance networks of microbial community in each of the three niches. Then, differential co-abundance networks among endosphere, rhizoplane and rhizosphere soil were identified. In addition, the core genera in network were obtained by the "WGCNA" package, which plays an important regulated role in network functions. These methods enable researchers to analyze the response of microbial network to environmental disturbance and verify different microbial ecological response theories. The results of these methods show that the significant differential microbial networks identified in the endosphere, rhizoplane and rhizosphere soil of rice.

Network analysis was applied to evaluate the association of various ecological microbial communities, such as soil, water and rhizosphere. Presented here is a protocol on how to use the WGCNA algorithm to analyze different co-occurrence networks that may occur in the microbial communities due to different ecological environments.

Divergenz von Wurzelmikrobiota in verschiedenen Lebensräumen basierend auf gewichteten Korrelationsnetzwerken

The root microbiome plays an important role in plant growth and environmental adaptation. Network analysis is an important tool for studying communities, ...

Determination of Self-(In)compatibility and Inter-(In)compatibility Relationships in Citrus Using Manual Pollination, Microscopy, and S-Genotype Analyses

Citrus uses S-RNase-based self-incompatibility to reject self-pollen and, therefore, requires nearby pollinizer trees for successful pollination and fertilization. However, identifying suitable varieties to serve as pollinizers is a time-consuming process. To solve this problem, we have developed a rapid method for identifying pollination-compatible citrus cultivars that utilizes agarose gel electrophoresis and aniline blue staining. Pollen compatibility is determined based on the identification of S genotypes by extracting total DNA and performing PCR-based genotyping assays with specific primers. Additionally, styles are collected 3-4 days after manual pollination, and aniline blue staining is performed. Finally, the growth status of the pollen tubes is observed with a fluorescence microscope. Pollen compatibility and incompatibility can be established by observing whether the pollen tube growth is normal or suppressed, respectively. Due to its simplicity and cost-effectiveness, this method is an effective tool for determining the pollen compatibility and incompatibility of different citrus varieties to establish incompatibility groups and incompatibility relationships between different cultivars. This method provides information essential for the successful selection of suitable pollinizer trees and, thus, facilitates the establishment of new orchards and the selection of appropriate parents for breeding programs.

Determination of Self-Incompatibility and Inter-Incompatibility Relationships in Citrus Using Manual Pollination, Microscopy, and S-Genotype Analyses

This protocol provides a rapid method for determining pollen compatibility and incompatibility in citrus cultivars.

Bestimmung von Selbst(in)kompatibilitäts- und Inter(in)kompatibilitätsbeziehungen bei Zitrusfrüchten mittels manueller Bestäubung, Mikroskopie und S-Genotyp-Analysen

Citrus uses S-RNase-based self-incompatibility to reject self-pollen and, therefore, requires nearby pollinizer trees for successful pollination and ...

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Entwicklung von Gentransformations- und Editierungsmethoden in Bambus

In Planta Gene Expression and Gene Editing in Moso Bamboo Leaves

A novel in planta gene transformation method was developed for bamboo, which avoids the need for time-consuming and labor-intensive callus induction and regeneration processes. This method involves Agrobacterium-mediated gene expression via wounding and vacuum for bamboo seedlings. It successfully demonstrated the expression of exogenous genes, such as the RUBY reporter and Cas9 gene, in bamboo leaves. The highest transformation efficiency for the accumulation of betalain in RUBY seedlings was achieved using the GV3101 strain, with a percentage of 85.2% after infection. Although the foreign DNA did not integrate into the bamboo genome, the method was efficient in expressing the exogenous genes. Furthermore, a gene editing system has also been developed with a native reporter using this method, from which an in situ mutant generated by the edited bamboo violaxanthin de-epoxidase gene (PeVDE) in bamboo leaves, with a mutation rate of 17.33%. The mutation of PeVDE resulted in decreased non-photochemical quenching (NPQ) values under high light, which can be accurately detected by a fluorometer. This makes the edited PeVDE a potential native reporter for both exogenous and endogenous genes in bamboo. With the reporter of PeVDE, a cinnamoyl-CoA reductase gene was successfully edited with a mutation rate of 8.3%. This operation avoids the process of tissue culture or callus induction, which is quick and efficient for expressing exogenous genes and endogenous gene editing in bamboo. This method can improve the efficiency of gene function verification and will help reveal the molecular mechanisms of key metabolic pathways in bamboo.

Autor im Rampenlicht: Förderung der Gen-Editierung in Bambusblättern für nachhaltige Kunststoffalternativen 

In this study, a novel in planta gene expression and gene editing method mediated by Agrobacterium was developed in bamboo. This method greatly improved the efficiency of gene function validation in bamboo, which has significant implications for accelerating the process of bamboo breeding.

In Planta Genexpression und Gen-Editierung in Moso-Bambusblättern

A novel in planta gene transformation method was developed for bamboo, which avoids the need for time-consuming and labor-intensive callus induction and ...