Wir möchten Alvin Welch und Larry Pang für ihre technische Unterstützung danken. CIRM New Faculty Award RN2-00902-1; Diese Arbeit wurde zum Teil durch die National Institutes of Health (NIH) award P50 CA086306 das California Institute for Regenerative Medicine (CIRM) Zuschüsse RC1-00149-1 und RS1-00.203-1 finanziert die Caltech-UCLA Joint Center for Translational Medicine, UCLA Center for AIDS Research (CFAR) NIH / NIAID AI028697 die UCLA AIDS Institute, die CIRM Tools und Technology Award RT1-01.126, und die UC multicampus Research Program und Initiativen aus dem California Center for Antiviral Drug Discovery (Anzahl MRPI-143.226).

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	<li>McCune, J. M., Namikawa, R., Kaneshima, H., Shultz, L. D., Lieberman, M., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SCID-hu+mouse:+murine+model+for+the+analysis+of+human+hematolymphoid+differentiation+and+function.">The SCID-hu mouse: murine model for the analysis of human hematolymphoid differentiation and function.</a> Science. 241 (4873), 1632-1639 (1988).</li><li>Bristol, G. C., Gao, L. Y., Zack, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+maintenance+of+SCID-hu+mice+for+HIV+research.">Preparation and maintenance of SCID-hu mice for HIV research.</a> Methods. 12 (4), 343-347 (1997).</li><li>Mosier, D. E., Gulizia, R. J., Baird, S. M., Wilson, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+a+functional+human+immune+system+to+mice+with+severe+combined+immunodeficiency.">Transfer of a functional human immune system to mice with severe combined immunodeficiency.</a> Nature. 335 (6187), 256-259 (1988).</li><li>Melkus, M. W., Estes, J. D., Padgett-Thomas, A., Gatlin, J., Denton, P. W., Othieno, F. A., Wege, A. K., Haase, A. T., Garcia, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humanized+mice+mount+specific+adaptive+and+innate+immune+responses+to+EBV+and+TSST-1.">Humanized mice mount specific adaptive and innate immune responses to EBV and TSST-1.</a> Nat. Med. 12 (11), 1316-1322 (2006).</li><li>Denton, P. W., Estes, J. D., Sun, Z., Othieno, F. A., Wei, B. L., Wege, A. K., Powell, D. A., Payne, D., Haase, A. T., Garcia, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antiretroviral+pre-exposure+prophylaxis+prevents+vaginal+transmission+of+HIV-1+in+humanized+BLT+mice.">Antiretroviral pre-exposure prophylaxis prevents vaginal transmission of HIV-1 in humanized BLT mice.</a> PLoS Med. 5 (1), e16 (2008).</li><li>Sun, Z., Denton, P. W., Estes, J. D., Othieno, F. A., Wei, B. L., Wege, A. K., Melkus, M. W., Padgett-Thomas, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrarectal+transmission,+systemic+infection,+and+CD4++T+cell+depletion+in+humanized+mice+infected+with+HIV-1.">Intrarectal transmission, systemic infection, and CD4+ T cell depletion in humanized mice infected with HIV-1.</a> J. Exp. Med. 204 (4), 705-714 (2007).</li><li>Shimizu, S., Hong, P., Arumugam, B., Pokomo, L., Boyer, J., Koizumi, N., Kittipongdaja, P., Chen, A., Bristol, G., Galic, Z., Zack, J. A., Yang, O., Chen, I. S., Lee, B., An, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+highly+efficient+short+hairpin+RNA+potently+down-regulates+CCR5+expression+in+systemic+lymphoid+organs+in+the+hu-BLT+mouse+model.">A highly efficient short hairpin RNA potently down-regulates CCR5 expression in systemic lymphoid organs in the hu-BLT mouse model.</a> Blood. 115 (8), 1534-1544 (2010).</li><li>V, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+HIV+Latency+in+Humanized+BLT+Mice.">Generation of HIV Latency in Humanized BLT Mice.</a> J. Virol. 86 (1), 630-634 (2012).</li><li>Vatakis, D. N., Koya, R. C., Nixon, C. C., Wei, L., Kim, S. G., Avancena, P., Bristol, G., Baltimore, D., Kohn, D. B., Ribas, A., Radu, C. G., Galic, Z., Zack, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antitumor+activity+from+antigen-specific+CD8+T+cells+generated+in+vivo+from+genetically+engineered+human+hematopoietic+stem+cells.">Antitumor activity from antigen-specific CD8 T cells generated in vivo from genetically engineered human hematopoietic stem cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108 (51), 1408-1416 (2011).</li></ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Die modifizierte BLT humanisierten Mausmodell mit in vivo PET-Bildgebung verbunden sind leistungsfähige Werkzeuge, um chronische Krankheiten zu studieren. Dieses System nimmt die BLT Mausmodell und Fortschritten, die sie über den begrenzten Spielraum für HIV-Forschung. Darüber hinaus ist es ein großes System, in dem wir verschiedene Gentherapieprotokollen sowie diagnostische Techniken untersucht werden können, bevor sie den klinischen Umgebung erreichen. Die letztere mit den niedrigen Kosten der Verwendun...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name des Reagenzes </td><td> Firma </td><td> Katalog-Nummer </td><td> Kommentare (optional) </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Invitrogen </td><td> 10010049 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td></td><td> A1049101 </td><td></td></tr><tr><td> Iscoves </td><td></td><td> 12440061 </td><td></td></tr><tr><td> Fetal Calf Serum </td><td></td><td> 16000085 </td><td></td></tr><tr><td> Kollagenase vom Typ IV </td><td> Sigma Aldrich </td><td> C5138 </td><td></td></tr><tr><td> Hyaluronidase </td><td></td><td> H3506 </td><td></td></tr><tr><td> DNAse I </td><td> Roche Diagnostics </td><td> 10104159001 &lt;/ Td&gt; <td></td></tr><tr><td> Piptazo (Zosyn) </td><td> Pfizer </td><td></td><td> <a href="http://labeling.pfizer.com/showlabeling.aspx?id=416" target="_blank">Piperacillin / Tazobactam Kombination</a> </td></tr><tr><td> Ficoll (Ficoll-Paque Plus) </td><td> GE Healthcare Life Sciences </td><td> 17-1440-02 </td><td></td></tr><tr><td> MACS-Puffer </td><td> Miltenyi Biotech </td><td> Siehe Kommentare </td><td> MACS-Puffer: PBS, ergänzt mit 0,5% fötalem Rinderserum und 2 mM Citratdextrose Formel-A </td></tr><tr><td> CD34 Nichtmetallisches Kit </td><td></td><td> 130-046-702 </td><td></td></tr><tr><td> LS Columns </td><td></td><td> 130-042-401 </td><td></td></tr><tr><td> Retronectin </td><td> Takara </td><td> T100A </td><td></td></tr><tr><td&gt; Matrigel </td><td> BD Biosciences </td><td> 354263 </td><td></td></tr><tr><td> Isofluoran </td><td> Baxter </td><td></td><td> <a href="http://www.baxter.com/healthcare_professionals/products/forane.html" target="_blank">http://www.baxter.com/healthcare_professionals/products/forane.html</a> </td></tr><tr><td> Carprofen (Rimadyl) </td><td> Pfizer Animal Health </td><td></td><td> <a href="https://www.rimadyl.com/default.aspx" target="_blank">https://www.rimadyl.com/default.aspx</a> </td></tr></tbody></table>

using the blt humanized mouse as a stem cell based gene therapy tumor model

Kleine Tiermodelle wie Mäuse wurden ausgiebig genutzt, um menschliche Krankheiten zu untersuchen und neue therapeutische Interventionen zu entwickeln. Trotz der Fülle an Informationen aus diesen Studien führten die einzigartigen Eigenschaften von Maus-Immunität sowie der Spezies-Spezifität von Viruserkrankungen wie humanes Immundefizienz-Virus (HIV) für die Entwicklung von humanisierten Maus-Modellen. Die früheren Modelle betrifft die Verwendung von C. B 17 scid / SCID-Mäuse und die Transplantation von humanen fötalen Thymus und fötale Leber bezeichnet thy / liv (SCID-hu) 1, 2 oder adoptiven Transfer von menschlichem peripheren Blut Leukozyten (SCID-huPBL ) 3. Beide Modelle wurden hauptsächlich zur Untersuchung von HIV-Infektionen verwendet wird. Eine der wichtigsten Einschränkungen dieser beiden Modelle war das Fehlen einer stabilen Rekonstitution der menschlichen Immunzellen in der Peripherie, um ihnen eine weitere physiologisch relevanten Modell HIV-Erkrankung zu untersuchen. Zu diesem Zweck wird die BLT humeinblech Mausmodell entwickelt wurde. BLT steht für Knochenmark / Leber / Thymus. In diesem Modell, 6 bis 8 Wochen alten NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SZJ (NSG) immungeschwächten Mäusen erhalten die thy / liv Implantat im SCID-hu Mausmodell nur von einem zweiten menschlichen hämatopoietischen Stammzelltransplantation 4 folgen. Der Vorteil dieses Systems ist die vollständige Rekonstitution des menschlichen Immunsystems in die Peripherie. Dieses Modell wurde verwendet, um eine HIV-Infektion und Latenz 5-8 studieren. Wir haben eine modifizierte Version dieses Modells, in denen wir genetisch humanen hämatopoetischen Stammzellen (HHSC) geändert, um die thy / liv Implantat durch Injektion von folgten transduzierten autologen HHSC 7, 9 konstruieren erzeugt. Dieser Ansatz führt zu der Erzeugung von genetisch veränderten Linien. Noch wichtiger ist, passten wir dieses System die Möglichkeit einer Erzeugung funktioneller zytotoxischen T-Zellen (CTL) Expression eines Melanom-spezifische T-Zell-Rezeptors zu untersuchen. Mit diesem Modell konnten wir die Funktionalität unserer transgenen CTL nutzen Live-Positronen-Emissions-Tomographie (PET) zur Rückbildung des Tumors (9) bestimmen zu beurteilen. Das Ziel dieses Protokolls ist es, den Prozess der Erzeugung dieser transgenen Mäusen und Beurteilung in vivo-Wirksamkeit mit Live-PET-Bildgebung beschreiben. Als Hinweis, da wir menschliche Gewebe und lentiviralen Vektoren zu verwenden, entsprechen unseren Einrichtungen auf CDC NIH Richtlinien für Biosafety Level 2 (BSL2) mit besonderen Vorsichtsmaßnahmen (BSL2 +). Darüber hinaus sind die NSG Mäusen stark geschwächtes Immunsystem so muss ihre Wohnung und die Wartung zu den höchsten Gesundheits-Standards (entsprechen <a href="http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html" target="_blank">http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html</a> ).

Ein Flussdiagramm des Transplantationsverfahren ist in 1A gezeigt. Ein Bild von der thy / liv Implantat wird in 1B gezeigt. Die Thymusgewebes entwickelt normal und hat eine physiologische Verteilung von menschlichen CD4-und CD8-T-Zellen. Nach der Rekonstitution tragen die Tiere einen menschlichen Immunsystems mit normalen Verteilung von CD4, CD8 T-Zellen und anderen Immunzellen Linien. Die Diskrepanz zwischen Tumorgröße und lebendes Gewebe ist in A...

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Using the BLT Humanized Mouse as a Stem Cell based Gene Therapy Tumor Model

Die Generierung und Charakterisierung von Tumor-spezifischen T-Zellen mit humanisierten Mäusen wird hier beschrieben. Menschliche Thymus-Gewebe und gentechnisch veränderten humanen hämatopoetischen Stammzellen in immungeschwächten Mäusen transplantiert. Hierdurch ergibt sich der Rekonstitution eines konstruierten menschliche Immunsystem so zur in vivo-Untersuchung von Anti-Tumor-Immunantwort.

Mit der BLT humanisierte Maus als Stem Cell based Gene Therapy Tumormodell

Small animal models such as mice have been extensively used to study human  disease and to develop new therapeutic interventions. Despite the wealth of  ...

using-blt-humanized-mouse-as-stem-cell-based-gene-therapy-tumor

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

18.6K Aufrufe.  David Geffen School of Medicine at UCLA. Die Generierung und Charakterisierung von Tumor-spezifischen T-Zellen mit humanisierten Mäusen wird hier beschrieben. Menschliche Thymus-Gewebe und gentechnisch veränderten humanen hämatopoetischen Stammzellen in immungeschwächten Mäusen transplantiert. Hierdurch ergibt sich der Rekonstitution eines konstruierten menschliche Immunsystem so zur in vivo-Untersuchung von Anti-Tumor-Immunantwort.